一种3-氨基丁醇手性纯度的hplc分析方法
【技术领域】
[0001 ]本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种3-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方 法。
【背景技术】
[0002] HPLC检测法具有检测灵敏度高、精确度高，检测所需时间少，检测结果重复性高等 优点，是当前分析化学中常用的检测手段。
[0003] (R)-3_氨基丁醇是合成度鲁特韦的重要中间体。度鲁特韦是英国制药巨头葛兰素 史克(GSK)旗下抗艾滋病(HIV)新药，2013年8月12日美国食品和药物管理局(FDA)。临床前 研究结果显示度鲁特韦具有较强的抗HIV-1病毒活性，安全性及耐受性良好。
[0004] 吴生文等（CN201410488279.2)使用苄氧羰基氯与3-氨基丁醇衍生化生成N-Cbc- 3-氨基丁醇，21 Onm下液相检测。色谱柱AD-H;流动相正己烷:异丙醇(9:1);保留时间S-异构 体11.1分钟，R-异构体12.2分钟，过程中使用价格昂贵的正相柱。R. H. BUCK等(Journal of chromatography)用邻苯二甲醛-硫醇类衍生物对3-氨基丁醇进行衍生化，色谱条件： Knauer Hypersil 0DS柱子，流动相0.05%磷酸钠缓冲盐溶液/甲醇（体积比35/65)，pH 7.0,荧光检测。而通过与带紫外吸收的手性试剂进行快速双衍生化，得到既有紫外吸收又 有三个手性基团的衍生物，能够直接在反相高效液相与紫外联用上进行异构体的分析。
[0005] 度鲁特韦分子结构中有两个手性中心，由手性源(R)-3_氨基丁醇引入，度鲁特韦 两个非对映异构体的相对含量只取决于产生它们过渡态的相对能量高低，由于生成(4R， 12aS)过渡态能量较(4R，12aR)异构体低，因此反应最后生成了以（4R，12aS)构型为主的产 物。低光学纯的(R)-3_氨基丁醇中的另一个异构体，在反应中会生成四个手性化合物，降低 度鲁特韦的手性纯度，因此(R)-3-氨基丁醇的光学纯度直接决定了度鲁特韦的光学纯度、 杂质多少和抗艾滋病作用。尽管这种新药上市时间很短，但由于其高效的抗艾滋病作用引 发了对这种新药的大量需求，从而导致对度鲁特韦手性源(R)-3-氨基丁醇的大量需求。由 于3-氨基丁醇化合物分子结构含一个伯胺和一个羟基，无紫外吸收，建立快捷的、准确可靠 的光学纯度分析方法难度非常的大，因此对(R)-3-氨基丁醇进行准确的检测分析，对于合 成新药度鲁特韦具有重要意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种3-氨基丁醇手性纯度的HPLC分 析方法，可以快捷准确的实现定性、定量和对映体过量率分析。
[0007] 为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下： 一种3-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，具体包含如下步骤： 步骤一、衍生化 将3-氨基丁醇溶于有机溶剂中，在一定的温度条件下，以(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯为衍 生化试剂，控制3-氨基丁醇和(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯的摩尔比，进行衍生化反应，得到衍 生化化后的3-氨基丁醇，反应式见式I;
步骤二、分离检测 采用反相高效液相色谱-紫外检测器对衍生化后的3-氨基丁醇进行定性、定量和对映 体过量率测定。
[0008] 所述的有机溶剂选自甲苯、二甲苯、石油醚、二氯甲烷、1，2_二氯乙烷、四氢呋喃、 氯仿和四氯化碳中的一种或两种以上的组合。
[0009] 所述的有机溶剂与3-氨基丁醇的体积比为0.1~300:1，优选为1~20:1。
[0010] 所述的一定温度是指从_l〇°C到回流温度，优选为15~35°C。
[0011] 本发明的回流温度具体数值与有机溶剂的选择有关，本领域技术人员可以根据溶 剂的选择清楚的确定回流温度的范围。
[0012] 所述的3-氨基丁醇和(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯的摩尔比为1:2~20。
[0013] 所述的紫外检测器的检测波长为210~300nm，优选220~260nm。
[0014] 所述的反相高效液相色谱使用的色谱柱是普通反相柱。优选的，色谱柱为反相C18 柱，最优选的为迪马反相C18柱(250X4.6mm，5ym，pH范围2.0~8.0)。
[0015] 所述的反相高效液相色谱的流动相由缓冲盐溶液和有机溶剂组成，有机溶剂选自 甲醇、乙醇、异丙醇和乙腈中的一种或两种;有机溶剂占流动相的体积比例范围为20%~80%， 优选范围为40%~60%。
[0016] 所述的流动相的缓冲盐选自磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾中 的一种或两种，缓冲盐水溶液的质量体积浓度为〇. 01%~5%，优选为0.1%~1%。
[0017] 所述的缓冲盐水溶液的PH值为2.0~7.0，优选pH值为4.0~6.0。
[0018] 所述的流动相流速在0.2~3. OmL/min，优选流速为1. OmL/min。
[0019] 本发明中，反相高效液相色谱分析条件优选为： 迪马C18色谱柱，流动相为40%乙腈-60%缓冲盐水溶液，缓冲盐水溶液为质量体积浓度 为0.1%的磷酸二氢钠水溶液，pH值为4.5;紫外检测波长为254]11]1，流速为1.〇111171]^11，柱温为 30°C，进样体积20yL。
[0020] 与现有技术相比，本发明所取得的有益效果如下： 本发明给出了 3-氨基丁醇的衍生化方法，通过控制反应条件，快速生成(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯和3-氨基丁醇的衍生物，并建立了对(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯衍生化后的3-氨基 丁醇的定性、定量和对映异构体测定的高效液相色谱分析方法。该方法操作简单、重现性 好、灵敏度高、准确性强，便于标准化操作。通过对(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯衍生化后的3-氨 基丁醇进行定性、定量和对映体过量率分析，从而实现对3-氨基丁醇的定性、定量和对映体 过量率(手性e.e.值)分析。
【附图说明】
[0021] 图l:(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-3_氨基丁醇衍生化后色谱图； 在附图中：1为(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(R)-3_氨基丁醇的衍生物;2为(R)-a-甲基- 2-萘乙酰氯和(S)-3-氨基丁醇衍的衍生物。
【具体实施方式】
[0022]以下结合附图对本发明进行进一步详细的叙述。
[0023]实施例1: (R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-3_氨基丁醇的衍生物的液相色谱分析 取（RS)-3-氨基丁醇3.09g(0.03mol)，溶于60mL二氯甲烷中，30°C下搅拌，缓慢加入 (R)-a-甲基-2-萘乙酰氯26.23g(0.12mol) aTLC监测反应，反应结束后蒸干得(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(RS )-3-氨基丁醇衍生物。
[0024]将(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与（RS)-3_氨基丁醇衍生物用流动相溶解后采用高效 液相色谱进行检测分析。液相色谱条件:迪马C18色谱柱，流动相为40%乙腈-60%缓冲盐水溶 液，缓冲盐水溶液为质量体积浓度为〇. 1%的磷酸二氢钠水溶液，pH值为4.5。紫外检测波长 为254nm，流速为1. OmL/min，柱温为30°C，进样体积20yL，保留时间和手性纯度分析见表1， 其图谱见图1。
[0025] 表1 (R)-a-甲基-2-萘乙酰氯衍生化后的3-氨基丁醇保留时间和手性e .e.%值
实施例2:3-氨基丁醇和(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯的衍生化反应条件的考察试验 2-1:取(RS)-3-氨基丁醇3.09g(0.03mol)，溶于40mL氯仿中，在40°C下搅拌，缓慢加入 (R)-a-甲基-2-萘乙酰氯n.WgW.OemolhTLC监测反应，反应结束后蒸干得(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(RS )-3_氨基丁醇衍生物。
[0026] 将(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与（RS)-3_氨基丁醇衍生物用流动相溶解后采用高效 液相色谱进行检测分析。液相色谱条件:迪马C18色谱柱，流动相为40%乙腈-60%缓冲盐水溶 液，缓冲盐水溶液为质量体积浓度为〇. 1%的磷酸二氢钠水溶液，pH值为4.5。紫外检测波长 为254nm，流速为1. OmL/min，柱温为30 °C，进样体积20yL，保留时间和手性e. e . %值同实施 例1〇
[0027]:称取(RS)-3-氨基丁醇3.09g(0.03mol)，溶于40mL四氯化碳中，在30°C下搅拌，缓 慢滴加(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯19.678(0.09111〇1)。11(：监测反应，反应结束后蒸干得(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(RS )-3-氨基丁醇衍生物。
[0028]将(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与（RS)-3_氨基丁醇衍生物用流动相溶解后采用高效 液相色谱进行检测分析。液相色谱条件:迪马C18色谱柱，流动相为40%乙腈-60%缓冲盐水溶 液，缓冲盐水溶液为质量体积浓度为〇. 1%的磷酸二氢钠水溶液，pH值为4.5。紫外检测波长 为254nm，流速为1. OmL/min，柱温为30