卡培他滨的测定及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种卡培他滨的测定及其应用，选择直接进样法，以常压下沸点低于70℃的有机溶剂为溶剂，进样口温度为60～75℃，对卡培他滨的降解进行了有效的控制，解决了卡培他滨样品因高温降解对正戊醇含量测定的干扰问题。本发明验证试验重现性好、线性关系良好、平均回收率良好，能准确定量检出卡培他滨样品中可能残留的正戊醇。本发明对样品中正戊醇的含量进行了准确的测定，同时确保了卡培他滨的质量及用药的安全。
【专利说明】
卡培他滨的测定及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于医药分析技术领域，具体设及一种卡培他滨的测定及其应用。
【背景技术】
[0002] 卡培他滨，英文名为化pecitabine，是一种可W在体内转变成5-FU的抗代谢氣喀 晚脱氧核巧氨基甲酸醋类药物，由罗氏公司研制，商品名为希罗达，能够抑制细胞分裂和干 扰RNA和蛋白质(protein)合成。适用于紫杉醇和包括有蔥环类抗生素化疗方案治疗无效的 晚期原发性或转移性乳腺癌的进一步治疗。主要用于晚期原发性或转移性乳腺癌，直肠癌、 结肠癌和胃癌的治疗。其结构式如下：
[0003]
[0004] 中国发明专利〔肥01080032544.6、〔肥01010134093.9和〔肥01110090029.乂在制备 卡培他滨时，都用到正戊醇；另外，经对卡培他滨的结构分析，在合成或放置过程中可能降 解为正戊醇，故对成品中正戊醇的残留量进行研究。在卡培他滨残留溶剂测定顶空进样过 程中，样品色谱图中有很大的正戊醇峰，推测在汽化室溫度20(TC条件下，卡培他滨样品已 经降解产生正戊醇，影响了卡培他滨样品中正戊醇含量的测定。
[0005] 当残留溶剂的残留高于安全值时，如果不对药品中溶剂残留进行限度检查，将会 使药品存在极大地安全隐患。
[0006] 目前尚未有报道卡培他滨中正戊醇的含量测定，因此，根据药品审评中屯、指导原 则要求，需要建立一种卡培他滨中正戊醇的含量测定方法，并规定合理的限定，对确保卡培 他滨的安全用药具有重要的意义。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的就是提供了一种卡培他滨的测定及其应用。解决了卡培他滨样品因 高溫降解对正戊醇含量测定的干扰问题。
[000引为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得W解决：
[0009] -种卡培他滨中残留溶剂的测定方法，包括如下步骤：
[0010] A、供试品溶液制备：取卡培他滨样品，用常压下沸点低于70°C的有机溶剂溶解并 稀释成0.0 lg/ml的溶液，混匀，备用；
[0011] B、对照品溶液制备：取卡培他滨中残留溶剂样品，用常压下沸点低于70°C的有机 溶剂稀释制成50化g/ml的溶液，混匀，备用；
[0012] C、检测方法:取供试品溶液和对照品溶液各化1，分别注入气相色谱仪的气相色谱 柱中，依次记录色谱图；
[0013] D、含量计算:按外标法W峰面积计算残留溶剂的含量。
[0014] 作为优选，所述残留溶剂为正戊醇。
[0015] 作为优选，所述常压下沸点低于70°C的有机溶剂为叔下基甲基酸、丙酬、正己烧和 二氯甲烧中任一种，更优选二氯甲烧。
[0016] 本发明选择常压下沸点低有机溶剂作为溶剂，从而降低了进样口汽化室的汽化溫 度，最大限度避免了高溫汽化对样品的降解，从而影响测定结果的准确性。
[0017] 作为优选，步骤C中所述检测方法是直接进样气相色谱法。
[001引本发明采用直接进样法，操作简单，对气相相关设备要求低，规避了顶空进样方式 原料药和溶剂消耗量大的缺点。同时避免顶空测定法对样品长时间的高溫加热顶空而引起 样品的降解，从而影响测定结果的准确性。
[0019] 作为优选，所述气相色谱仪的色谱柱型号为:6%氯丙基苯基-94%二甲基聚娃氧 烧为固定液的毛细管柱，该石英毛细管柱的柱长30m、内径0.32mm、液膜厚度3μπι。
[0020] 作为优选，直接进样法的气相色谱柱条件为：
[0021] 柱溫:程序升溫；
[0022] 进样口溫度:60~75°C;
[0023] 火焰离子化检测器溫度：180~250°C ;
[0024] 载气:氮气；
[0025] 载气流速:2.2 ~3.2ml/min;
[0026] 分流比：5:1 ~15:1。
[0027] 进一步的，气相色谱柱条件为：
[0028] 柱溫:程序升溫方法是初始溫度6(TC保持2分钟，然后W每分钟15Γ的速率升溫至 200°C，保持5分钟；
[0029] 进样口溫度:70。。
[0030] 火焰离子化检测器溫度:250°C ;
[00川载气:氮气；
[0032] 载气流速:2.7ml/min;
[0033] 分流比：10:1。
[0034] 本发明另一个目的是提供了采用本发明第一个目的任一测定方法在检测卡培他 滨成品中正戊醇含量中的应用。
[0035] 本发明第Ξ个目的是提供了采用本发明第一个目的任一测定方法的验证线性试 验，包括如下步骤：
[0036] 1)取正戊醇适量，精密称定，稀释制成含正戊醇0.5mg/ml的二氯甲烧溶液；
[0037] 2)分别精密移取0.2ml、0.5ml、1ml、1.2ml、1.5ml于10ml容量瓶中，用二氯甲烧稀 释定容，摇匀，备用；
[0038] 3)分别精密量取步骤2)中样品各化1进样，直接进样，记录色谱图；
[0039] 4) W浓度为X轴，峰面积为y轴，作线性回归。
[0040] 本发明采用上述验证线性试验，线性关系良好。
[0041] 本发明第四个目的是提供了采用本发明第一个目的任一测定方法的验证回收试 验，包括如下步骤：
[0042] 1)取正戊醇适量，精密称定，稀释制成含正戊醇0.5mg/ml的二氯甲烧溶液作为胆 备溶液；
[0043] 2)取本品约0.1 g，精密称定，置10ml容量瓶中，加适量二氯甲烧使溶解，分别精密 量取0.8ml，1ml，1.2ml对照溶液于10ml容量瓶中，加二氯甲烧稀释定容。直接进样，记录色 谱图；
[0044] 3)另精密量取1ml胆备溶液至10ml的容量瓶中，加二氯甲烧稀释至刻度，摇匀，同 法测定，计算其回收率。
[0045] 本发明采用上述验证回收试验，结果表明试验回收率都在80%~120%之间，结果 符合要求，方法回收率良好。
[0046] 与现有技术相比，本发明带来的有益技术效果如下：
[0047] 本发明提供一种操作简单、精密度高的检测方法，该方法精密度相对标准偏差仅 为3.1%，重现性更好，精密度试验验证良好；同时对卡培他滨样品的降解进行了有效的控 审IJ，对样品中正戊醇的含量进行了准确的测定，实现了有效的质量控制，从而保证了卡培他 滨的质量。
【附图说明】
[0048] 图1为实施例1中卡培他滨中的正戊醇的检测谱图。
[0049 ]图2为实施例1中正戊醇对照品溶液色谱图。
[0050]图3为实施例1中空白溶剂色谱图。
[0051 ]图4为实施例1中正戊醇检测限色谱图。
[0052] 图5为实施例1中正戊醇的线性关系图。
【具体实施方式】
[0053] 1、仪器：
[0化4]分析天平，型号:METTL邸 TOLEDO ABS135-S。
[0化日]气相色谱仪型号为Agilent 7890A、色谱柱型号为HP-I順0WAX: W聚乙二醇为固定 液的石英毛细管柱，该石英毛细管柱的柱长30m、内径0.32mm、液膜厚度3皿。
[0化6] 2、卡培他滨样品：批号:KP0901、ΚΡ0902、ΚΡ0903。
[0057]下面结合实施例对本发明作进一步阐述，但运些实施例不对本发明构成任何限 制。
[0化引实施例1
[0059] 直接进样法的色谱条件：
[0060] 柱溫:程序升溫:初始溫度60°C保持2分钟，然后W每分钟15°C的速率升溫至200 °C，保持5分钟。
[0061] 进样 口溫度:70°C;
[0062] 火焰离子化检测器溫度:250°C ;
[0063] 载气:氮气；
[0064]载气流速:2.7ml/min;
[00化]分流比：10:1。
[0066] 1、检测
[0067] A、供试品溶液制备:取卡培他滨样品，用二氯甲烧溶解并稀释成O.Olg/ml的溶液， 混匀，备用；
[0068] B、对照品溶液制备:取卡培他滨中残留溶剂样品，用二氯甲烧溶液稀释制成50化 g/ml的溶液，混匀，备用；
[0069] C、检测方法:取供试品溶液和对照品溶液各化1，分别注入气相色谱仪的气相色谱 柱中，依次记录色谱图；见图1和图2。
[0070] D、含量计算:按外标法W峰面积计算残留溶剂的含量。
[0071] 2、计算公式：
[0072] 溶剂残留量（％ ) = (Ai X V/W)/(As/Cs) X 100% ;
[0073] 其中Ai:供试品溶液中待测溶剂峰面积；
[0074] As :正戊醇对照品溶液主峰面积；
[0075] Cs:正戊醇对照品溶液浓度(mg/ml);
[0076] W:供试品溶液配制时样品的取样量(mg);
[0077] V:供试品溶液配制体积(ml);
[007引 3、测定结果
[0079] 按照上述测定方法对Ξ批供试品进行检测，结果见表1。
[0080] 表1 批供试品检测结果
[0081]
[0082] ~3、方法学验证 '
' ' '
[0083] 3.1空白试验
[0084] 精密量取二氯甲烧5ml置顶空进样瓶中，在上述色谱条件下进样，与对照品的图谱 比较表明，溶剂不干扰样品的测定，二氯甲烧溶剂出峰时间见图3。
[00化]3.2精密度试验
[0086] 精密称取卡培他滨样品6份，每份O.lg，分别置10ml容量瓶中，加二氯甲烧稀释至 刻度，摇匀，测定，结果见表2。
[0087] 表2:精密度试验结果 [008引
[0089]结论:6份样品正戊醇含量的相对标准偏差RSD为3.1%，结果表明，该方法样品精 密度良好。
[0090] 3.3检出限
[0091] 方法:精密称取正戊醇50mg，用二氯甲烧稀释成7个不同浓度的溶液，见表3。
[0092] 按上述色谱条件试验，精密量取各浓度下溶液化1，分别注入气相色谱仪的气相色 谱柱，记录色谱图。
[0093] 表3:
[0094]
[0095] ~实验结果: '
'
[0096] 通过逐级降低浓度法测定，按照S/N=3计算，测得正戊醇的检出限为0.5024yg/ ml,相当样品中0.005%的量;检测限图谱见图4。
[0097] 3.4线性试验
[0098] 取正戊醇适量，精密称定，稀释制成含正戊醇0.5mg/ml的二氯甲烧溶液。
[0099] 分别精密移取0.2ml、0.5ml、1ml、1.2ml、1.5ml于10ml容量瓶中，用二氯甲烧稀释 定容，摇匀。直接进样，记录色谱图。
[0100] 并W浓度为X轴，峰面积为y轴，作线性回归，结果见表4。
[0101] 表4:正戊醇线性范围测定结果
[0102]
[0103] 浓度与峰面积回归方程为：
[0104] y = 1.2401x-0.9425 R2 = 0.9995
[01化]结果，正戊醇在10.05~75.3化g/ml浓度范围内线性良好。线性关系曲线图见图6。
[0106] 3.5回收试验
[0107] 取正戊醇适量，精密称定，稀释制成含正戊醇0.5mg/ml的二氯甲烧溶液作为胆备 溶液。取本品O.lg，精密称定，置10ml容量瓶中，加适量二氯甲烧使溶解，分别精密量取 0.8ml，1ml，1.2ml对照溶液于10ml量瓶中，加二氯甲烧稀释定容。直接进样，记录色谱图。另 精密量取1ml胆备溶液至10ml的容量瓶中，加二氯甲烧稀释至刻度，摇匀，同法测定，计算其 回收率，结果见表5。
[0108] 表5:正戊醇回收率
[0109]
[0110] 结果表明试验回收率都在80 %~120 %之间，结果符合要求，方法回收率良好。
[01川实施例2
[0112] W与实施例1相同的方法，调整供试品溶液和对照品溶液的溶剂为丙酬；
[011引进样口溫度:60°C;
[0114] 火焰离子化检测器溫度:180°C;
[0115] 载气流速:2.2ml/min;
[0116] 分流比：5:1。
[0117] 按照上述测定方法对Ξ批供试品进行检测，结果见表6。
[011引表6: Ξ批供试品检测结果
[0119]
[0120] 实施例3
[0121] W与实施例1相同的方法，调整供试品溶液和对照品溶液的溶剂为正己烧；
[0122] 进样 口溫度:75°C;
[0123] 火焰离子化检测器溫度:250°C ;
[0124] 载气流速:3.2ml/min;
[0125] 分流比：15:1。
[0126] 按照上述测定方法对Ξ批供试品进行检测，结果见表7。
[0127] 表7 : Ξ批供试品检测结果 [012 引
[0129] 实施例4
[0130] W与实施例1相同的方法，调整供试品溶液和对照品溶液的溶剂为叔下基甲基酸；
[0131] 进样 口溫度:70°C;
[0132] 火焰离子化检测器溫度:250°C ;
[0133] 载气:氮气；
[0134] 载气流速:2.7ml/min;
[0135] 分流比：10:1。
[0136] 按照上述测定方法对Ξ批供试品进行检测，结果见表8。
[0137] 表8: Ξ批供试品检测结果 [013 引
[0139] 对比实施例5
[0140] W与实施例1相同的方法，仅改变进样口溫度，检测KP0901样品中正戊醇含量结果 见表9:
[0141] 表9:不同进样口溫度对样品中正戊醇含量的影响
[0142]
'[0143]~结果表明，进样口溫度为55°C时，正戊醇的含量比70°C时稍微偏低，但样品在70°C 更易快速完全汽化;进样口溫度为80°C时，正戊醇的含量比70°C时偏高，说明在80°C的条件 下，卡培他滨在检测的过程中有部分降解为正戊醇;进样口溫度为100 °C时正戊醇的含量比 70°C时明显偏高，无法准确检测样品中正戊醇的含量;故进样口溫度在60~75°C能快速准 确的检测样品中正戊醇的含量。
[0144] 对比实施例6
[0145] 参照本发明实施例1的实验条件，仅改变溶剂，卡培他滨样品中正戊醇含量结果如 下：
[0146] 溶剂1为甲醇，常压下沸点65°C，卡培他滨样品在该溶剂中存在甲醇与正戊醇交 换，影响测定准确度，且甲醇在70°C下难W快速汽化完全。
[0147] 溶剂2为乙醇，常压下沸点78°C，卡培他滨样品在该溶剂中存在乙醇与正戊醇交 换，影响测定准确度，且乙醇在70°C下不能汽化。
[014引溶剂3:因溶剂沸点较高，如乙腊(常压下沸点SrC)、乙酸乙醋(常压下沸点77°C)、 二甲基亚讽、N，N-二甲基甲酯胺，而本实验采用的汽化室溫度为70°C，不能用于直接进样检 测，无法准确检测卡培他滨样品中正戊醇含量。
[0149] 结论:尽管上述溶剂极性相近，但是因卡培他滨样品结构的特殊性，采用沸点较低 的溶剂能准确检测卡培他滨样品中正戊醇的含量。
[0150] W上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核屯、思想。应当指出，对 于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可W对本发明进行若干 改进和修饰，运些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
【主权项】
1. 一种卡培他滨中残留溶剂的测定方法，包括如下步骤： A、 供试品溶液制备：取卡培他滨样品，用常压下沸点低于70°C的有机溶剂溶解并稀释 成0.01g/ml的溶液，混勾，备用； B、 对照品溶液制备：取卡培他滨中残留溶剂样品，用常压下沸点低于70°C的有机溶剂 稀释制成500μg/ml的溶液，混勾，备用； C、 检测方法：取供试品溶液和对照品溶液各?μL，分别注入气相色谱仪的气相色谱柱 中，依次记录色谱图； D、 含量计算:按外标法以峰面积计算残留溶剂的含量。2. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述残留溶剂为正戊醇。3. 根据权利要求1或2所述的测定方法，其特征在于，所述常压下沸点低于70°C的有机 溶剂为叔丁基甲基醚、丙酮、正己烷和二氯甲烷中任一种，优选二氯甲烷。4. 根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，步骤C中所述检测方法是直接进样气 相色谱法。5. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述气相色谱仪的色谱柱型号为:6% 氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱，该石英毛细管柱的柱长30m、内径 0.3 2mm、液膜厚度3μηι。6. 根据权利要求4所述的测定方法，其特征在于，直接进样法的气相色谱柱条件为： 柱温:程序升温； 进样口温度:60~75 °C; 火焰离子化检测器温度：180~250 °C ; 载气:氮气； 载气流速:2 · 2~3 · 2ml/min; 分流比：5:1~15:1。7. 根据权利要求6所述的测定方法，其特征在于，气相色谱柱条件为： 柱温:程序升温方法是初始温度60°C保持2分钟，然后以每分钟15°C的速率升温至200 °C，保持5分钟； 进样口温度:70°C; 火焰离子化检测器温度:250°C ; 载气:氮气； 载气流速:2.7ml/min; 分流比：10:1。8. 根据权利要求1-7中任一项所述的测定方法在检测卡培他滨成品中正戊醇含量中的 应用。9. 如权利要求1所述测定方法的验证线性试验，包括如下步骤： 1) 取正戊醇适量，精密称定，稀释制成含正戊醇0.5mg/ml的二氯甲烷溶液； 2) 分别精密移取0.2ml、0.5ml、lml、1.2ml、1.5ml于10ml容量瓶中，用二氯甲烷稀释定 容，摇勾，备用； 3) 分别精密量取步骤2)中样品各2μ1进样，直接进样，记录色谱图； 4) 以浓度为X轴，峰面积为y轴，作线性回归。10.如权利要求1所述测定方法的验证回收试验，包括如下步骤： 1) 取正戊醇适量，精密称定，稀释制成含正戊醇〇.5mg/ml的二氯甲烷溶液作为贮备溶 液； 2) 取本品约0 . lg，精密称定，置10ml容量瓶中，加适量二氯甲烷使溶解，分别精密量取 0.8ml，lml，1.2ml对照溶液于10ml容量瓶中，加二氯甲烧稀释定容。直接进样，记录色谱图； 3) 另精密量取lml贮备溶液至10ml的容量瓶中，加二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，同法测 定，计算其回收率。
【文档编号】G01N30/88GK105823845SQ201610308274
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2016年5月11日
【发明人】朱叶芬, 雍春, 胡婷霞
【申请人】杭州华东医药集团新药研究院有限公司