一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，包括粉碎、酸浸、清洗、提取、高效液相色谱检测步骤。与现有技术相比，本发明具有以下优点：(1)本发明所述方法通过对中药饮片进行预处理，使得真菌壁得到破碎，从而提高检测的准确性；(2)本发明所述方法检测黄曲霉毒素效率高。
【专利说明】
-种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法
技术领域
[0001] 本发明属于分析化学领域，设及一种真菌毒素检测方法，尤其设及一种中药饮片 中黄曲霉素的检测方法。
【背景技术】
[0002] 真菌毒素是真菌产生的有毒次生代谢产物，种类繁多，广泛污染农作物、食品及饲 料等，严重威胁着人类健康，已经引起了全球的广泛关注。
[0003] 黄曲霉毒素(aflatoxins，简称AF)是由黄曲霉、寄生曲霉等多种菌株产生的一组 化学结构类似的二巧喃香豆素类真菌毒素。至今已分离出的黄曲霉毒素及其衍生物有二十 多种，主要包括黄曲霉毒素 Bl(AFBl)、黄曲霉毒素 B2(AFB2)、黄曲霉毒素 Gl(AFGl)和黄曲霉 毒素 G2(AFG2)等。黄曲霉毒素具有很强的肝毒性，其中WAFB1的毒性最强，1993年被世界卫 生组织的癌症研究机构（IARC)划定为I类致癌物。目前，世界上已有六十多个国家对其进行 限量控制，如欧盟规定直接供人类食用的食物及组成食品组分中的AFB1含量不得大于化g/ kg; AFB1，AFB2，AFG巧日AFG2的总量不得大于化g/kg。
[0004] 中药及其相关产品种类繁多，药材种植地区广泛，在生产、加工、运输、胆存过程 中，很容易发生霉变而污染各种真菌，产生对人体有害的真菌毒素，中药真菌毒素污染问题 也引起了业内人±的重视。2001年，中华人民共和国商务部公布了《药用植物及制剂外经贸 绿色行业标准》，规定黄曲霉毒素 B1限量应小于等于扣g/kg。《中国药典》2010年版一部收录 了中药中黄曲霉毒素 B1，B2，G1，G2的高效液相色谱巧光检测方法，对桃仁、胖大海、陈皮等 中药规定了 AFB1最高限量为扣g/kg，AF(Bl+B2+Gl+G2)最高限量为10yg/kg。因此，无论从保 障中药及其相关产品的安全性，还是中药进出口的管理方面，均有必要建立一个真菌毒素 多残留污染检测的技术平台，进一步完善中药及其产品的质量管理规范。
[0005] 现有技术中，常采用高效液相色谱巧光检测方法来检测黄曲霉毒素的含量，但是 该方法存在W下不足:首先黄曲霉毒素是一种真菌毒素，而真菌破壁较难，所W能够检测到 的毒素含量要低于实际含量，因而不利于检测人员准确判断结果;其次，单纯采用高效液相 色谱巧光检测方法效率不高。
【发明内容】
[0006] 本发明解决的技术问题是：为了克服现有技术的缺陷，获得一种能够准确测定中 药饮片中黄曲霉毒素含量，且检测效率高的方法，本发明提供了一种中药饮片中黄曲霉素 的检测方法。
[0007] 技术方案:一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，包含W下步骤：
[000引（1)将中药饮片加入粉碎机中，功率为1.3~1.7kW/h、转速为2800~3200转/分钟、 每小时投入饮片量为2~化g，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为200~400目；
[0009] (2)将步骤（1)获得的粉末置于质量浓度为0.5%~2.5%的乙酸中浸润0.5~3小 时，用蒸馈水冲洗至中性，并置于烘箱中在56~78Γ条件下烘干；
[0010] (3)将步骤(2)烘干后的粉末用质量浓度78~84%乙腊提取，提取液振荡10~25分 钟，在4°C、6000~8000转/分钟条件下离屯、5~10分钟，取上清液；
[0011] (4)采用高效液相色谱检测步骤(3)中的上清液，流动相为3~5mol/L的醋酸锭与 0.1~0.3%的乙酸按体积比1~3:1混合，流速为0.3~0.8mL/min，柱溫为24~28°C，样品溫 度为4~6°C，进样体积为5~10化。
[0012] 优选的，步骤（1)中将中药饮片加入粉碎机中，功率为1.5kW/h、转速为3000转/分 钟、每小时投入饮片量为3.化g，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为300目。
[001引优选的，步骤(2)中将步骤（1)获得的粉末置于质量浓度为1.7%的乙酸中浸润2小 时，用蒸馈水冲洗至中性，并置于烘箱中在6%~条件下烘干。
[0014] 优选的，步骤(3)中将步骤(2)烘干后的粉末用质量浓度81%乙腊提取，提取液振 荡20分钟，在4°C、7000转/分钟条件下离屯、8分钟，取上清液。
[0015] 优选的，步骤(4)中将采用高效液相色谱检测步骤(3)中的上清液，流动相为4mol/ L的醋酸锭与0.2%的乙酸按体积比2:1混合，流速为0.6mL/min，柱溫为26°C，样品溫度为5 °C，进样体积为化L。
[0016] 有益效果：（1)本发明所述方法通过对中药饮片进行预处理，使得真菌壁得到破 碎，从而提高检测的准确性；（2)本发明所述方法检测黄曲霉毒素效率高。
【具体实施方式】 [0017]实施例1
[001引一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，包含W下步骤：
[0019] (1)将中药饮片加入粉碎机中，功率为1.3kw/h、转速为2800转/分钟、每小时投入 饮片量为化g，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为200目；
[0020] (2)将步骤(1)获得的粉末置于质量浓度为0.5% %的乙酸中浸润0.5小时，用蒸馈 水冲洗至中性，并置于烘箱中在56Γ条件下烘干；
[0021] (3)将步骤（2)烘干后的粉末用质量浓度78%乙腊提取，提取液振荡10分钟，在4 °C、6000转/分钟条件下离屯、5分钟，取上清液；
[0022] (4)采用高效液相色谱检测步骤（3)中的上清液，流动相为3mol/L的醋酸锭与 0.1 %的乙酸按体积比1:1混合，流速为0.3mL/min，柱溫为24°C，样品溫度为4°C，进样体积 为化L。实施例2
[0023] -种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，包含W下步骤：
[0024] (1)将中药饮片加入粉碎机中，功率为1.5kW/h、转速为3000转/分钟、每小时投入 饮片量为3.化g，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为300目；
[0025] (2)将步骤(1)获得的粉末置于质量浓度为1.7%的乙酸中浸润2小时，用蒸馈水冲 洗至中性，并置于烘箱中在6%~条件下烘干；
[0026] (3)将步骤（2)烘干后的粉末用质量浓度81 %乙腊提取，提取液振荡20分钟，在4 °C、7000转/分钟条件下离屯、8分钟，取上清液；
[0027] (4)采用高效液相色谱检测步骤（3)中的上清液，流动相为4mol/L的醋酸锭与 0.2%的乙酸按体积比2:1混合，流速为0.6mL/min，柱溫为26°C，样品溫度为5°C，进样体积 为化L。实施例3
[002引一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，包含W下步骤：
[0029] (1)将中药饮片加入粉碎机中，功率为1.7kW/h、转速为3200转/分钟、每小时投入 饮片量为化g，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为400目；
[0030] (2)将步骤(1)获得的粉末置于质量浓度为2.5%的乙酸中浸润3小时，用蒸馈水冲 洗至中性，并置于烘箱中在78Γ条件下烘干；
[0031] (3)将步骤（2)烘干后的粉末用质量浓度84%乙腊提取，提取液振荡25分钟，在4 °C、8000转/分钟条件下离屯、10分钟，取上清液；
[0032] (4)采用高效液相色谱检测步骤（3)中的上清液，流动相为5mol/L的醋酸锭与 0.3 %的乙酸按体积比3:1混合，流速为0.8mL/min，柱溫为28°C，样品溫度为6°C，进样体积 为10化。
[0033] 采用上述实施例1~3所述的检测方法对中药饮片中的黄曲霉毒素进行检测，结果 如下表所示：
[0034]
【主权项】
1. 一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，其特征在于，包含以下步骤： (1) 将中药饮片加入粉碎机中，功率为1.3~1.7kW/h、转速为2800~3200转/分钟、每小 时投入饮片量为2~5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为200~400目； (2) 将步骤（1)获得的粉末置于质量浓度为0.5 %~2.5 %的乙酸中浸润0.5~3小时，用 蒸馏水冲洗至中性，并置于烘箱中在56~78°C条件下烘干； (3) 将步骤（2)烘干后的粉末用质量浓度78~84%乙腈提取，提取液振荡10~25分钟， 在4°C、6000~8000转/分钟条件下离心5~10分钟，取上清液； (4) 采用高效液相色谱检测步骤(3)中的上清液，流动相为3~5mo 1/L的醋酸铵与0.1~ 0.3%的乙酸按体积比1~3:1混合，流速为0.3~0.8mL/min，柱温为24~28°C，样品温度为4 ~6°C，进样体积为5~10yL。2. 根据权利要求1所述的一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，其特征在于，步骤 (1) 中将中药饮片加入粉碎机中，功率为1.5kW/h、转速为3000转/分钟、每小时投入饮片量 为3.5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为300目。3. 根据权利要求1所述的一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，其特征在于，步骤 (2) 中将步骤(1)获得的粉末置于质量浓度为1.7%的乙酸中浸润2小时，用蒸馏水冲洗至中 性，并置于烘箱中在69 °C条件下烘干。4. 根据权利要求1所述的一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，其特征在于，步骤 (3) 中将步骤(2)烘干后的粉末用质量浓度81 %乙腈提取，提取液振荡20分钟，在4°C、7000 转/分钟条件下离心8分钟，取上清液。5. 根据权利要求1所述的一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，其特征在于，步骤 (4) 中将采用高效液相色谱检测步骤(3)中的上清液，流动相为4mol/L的醋酸铵与0.2%的 乙酸按体积比2:1混合，流速为0.6mL/min，柱温为26°C，样品温度为5°C，进样体积为6yL。
【文档编号】G01N30/06GK105823844SQ201610272125
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2016年4月28日
【发明人】李建华
【申请人】苏州市天灵中药饮片有限公司