生物组织样本切片染色套液的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种生物组织样本切片染色套液，包括：切片脱蜡液包括：D?柠烯、甲基环己烷和表面活性剂；苏木素助染液包括：表面活性剂和饱和柠檬酸溶液；苏木素染色液包括：苏木素、无水乙醇、纯化水、高碘酸、丙三醇、柠檬酸和硫酸铝钾；分化液包括：无水乙醇、纯化水和盐酸；蓝化液包括：纯化水和氢氧化钾水溶液；伊红染色液包括：水溶性伊红、纯化水、无水氯化钙和盐酸水溶液；切片透明液包括：D?柠烯、异丙醇和表面活性剂。发明设计的染色套液不仅可以满足各级医院病理科及科研院所对组织样本处理中对环保型病理学组织学试剂的要求，而且可满足常规病理诊断、免疫组织化学诊断技术、分子生物学诊断技术的要求，处理组织的效果优于传统技术。
【专利说明】
生物组织样本切片染色套液
技术领域
[0001 ]本发明涉及体外诊断试剂，特别涉及一种生物组织样本切片染色套液。
【背景技术】
[0002]组织病理学的诞生已有150多年的历史，在所有的医院，只要有手术，均由医院病理科对手术组织样本作出组织病理学诊断。常规石蜡包埋HE染色制片仍是当前用以处理组织样本的最基本技术，它是病理诊断方法学的基础，也是许多新方法、新技术优劣的评定参照标准。目前，全国乃至全世界依然在使用传统的方法，即:将组织样本放置处理液的缸中，依次倒入或调入不同处理液，样本依次在每个试剂中按规定浸泡不同时间完成处理切片、染色、封片等，全程需要30几个步骤。整个过程大量使用甲醛、二甲苯、氧化汞、氨水有毒害化学试剂，病理技术人员长期置身于有毒环境;试剂宽容度差、操作复杂、不易控制，病理制片质量差，影响诊断；试剂耗量大，过多排放，严重污染环境。同时绝大数医院自行配制试剂，缺乏统一标准。因此病理行业所用产品标准化、规范化、低毒化、低排放，是行业发展的必然趋势。
【发明内容】
[0003]本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
[0004]本发明还有一个目的是提供一种生物组织样本切片染色套液，其不仅可以满足各级医院病理科及科研院所对组织样本处理中对环保型病理学组织学试剂的要求，而且可满足常规病理诊断、免疫组织化学诊断技术、分子生物学诊断技术的要求，处理组织的效果优于传统技术。
[0005]为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种生物组织样本切片染色套液，包括:
[0006]切片脱蜡液、苏木素助染液、苏木素染色液、分化液、蓝化液、伊红染色液和切片透明液；
[0007]切片脱蜡液包括以下质量份数的组分:D-柠烯60份、甲基环己烷40份和表面活性剂0.01?0.03份;
[0008]苏木素助染液包括以下质量份数的组分:表面活性剂0.01?0.03份和饱和柠檬酸溶液0.01份，其中，苏木素助染液的pH值为5.5;
[0009 ]苏木素染色液包括以下质量份数的组分:苏木素7份、无水乙醇100份、纯化水1000份、高碘酸0.25?0.3份、丙三醇85份、柠檬酸5份和硫酸铝钾50份；
[0010]分化液包括以下质量份数的组分:无水乙醇55份、纯化水45份和盐酸0.3?0.5份；
[0011]蓝化液包括以下质量份数的组分:纯化水10000份和浓度为2mol/L的氢氧化钾水溶液500份；
[0012]伊红染色液包括以下质量份数的组分:水溶性伊红8份、纯化水1000份、无水氯化I丐0.3?0.5份和体积百分浓度为0.1 %盐酸水溶液I?1.5份；
[0013]切片透明液包括以下质量份数的组分:D-柠烯95份、异丙醇5份和表面活性剂0.01?0.02份。
[0014]优选的是，所述的生物组织样本切片染色套液中，
[0015]制备苏木素染色液:将苏木素加入到无水乙醇中，搅拌均匀，得到第一预混液;将硫酸铝钾加入纯化水中，搅拌均匀，得到第二预混液;将第二预混液加热至沸腾，向第二预混液中加入第一预混液，搅拌均匀，煮沸10?15min，加入高碘酸和丙三醇，搅拌均匀，冷却至20?30°C，加入柠檬酸，即得到苏木素染色液。
[0016]优选的是，所述的生物组织样本切片染色套液中，
[0017]制备伊红染色液:将无水氯化钙加入到纯化水中，搅拌均匀，再加入水溶性伊红和体积百分浓度为0.1 %盐酸水溶液，搅拌均匀，静置24h，即得到伊红染色液。
[0018]优选的是，所述的生物组织样本切片染色套液中，
[0019]切片脱蜡液、苏木素助染液、苏木素染色液、分化液、蓝化液、伊红染色液和切片透明液；
[0020]切片脱蜡液包括以下质量份数的组分:D-柠烯60份、甲基环己烷40份、表面活性剂
0.02份、四环庚烷1.3份、丁基醚聚二甲基硅氧烷0.05份、二甲基-3-羟丙基甲基0.02份、环氧硬脂酸丁酯0.1份和脱蜡抗原修复液3份，其中，表面活性剂包括以下质量分数的组分:烷基苯磺酸钠40 %、肝胆酸钠30 %和30 %脂肪酸甘油酯；
[0021]苏木素助染液包括以下质量份数的组分:表面活性剂0.02份和饱和柠檬酸溶液
0.01份，其中，苏木素助染液的pH值为5.5;
[0022]苏木素染色液包括以下质量份数的组分:苏木素7份、无水乙醇100份、纯化水1000份、高碘酸0.27份、丙三醇85份、梓檬酸5份和硫酸铝钾50份；
[0023]分化液包括以下质量份数的组分:无水乙醇55份、纯化水45份、盐酸0.4份和异丙醇2份；
[0024]蓝化液包括以下质量份数的组分:纯化水10000份和浓度为2mol/L的氢氧化钾水溶液500份；
[0025]伊红染色液包括以下质量份数的组分:水溶性伊红8份、纯化水1000份、无水氯化钙0.4份和体积百分浓度为0.1 %盐酸水溶液1.3份；
[0026]切片透明液包括以下质量份数的组分:D-柠烯95份、异丙醇5份、表面活性剂0.015份、松节油3份、丙酮10份、I，8_二桉油素3份和抗氧化剂I份，其中，表面活性剂包括以下质量分数的组分:烷基苯磺酸钠40%、肝胆酸钠30 %和30 %脂肪酸甘油酯，抗氧化剂包括以下质量分数的组分:樟脑醌30%、二丁基茴香醚30%和丁羟基茴香醚40%。
[0027]优选的是，所述的生物组织样本切片染色套液中，
[0028]制备切片脱蜡液:向D-柠烯中加入表面活性剂，在水浴温度为35°C下，水浴超声Imin，加入甲基环己烷、四环庚烷、丁基醚聚二甲基硅氧烷、二甲基-3-羟丙基甲基和环氧硬脂酸丁酯，在水浴温度为40 V下，水浴超声40s，加入脱蜡抗原修复液，在水浴温度为30 V下，水浴超声30s，即得到切片脱蜡液。
[0029]优选的是，所述的生物组织样本切片染色套液中，
[0030]制备切片透明液:向异丙醇中加入表面活性剂，搅拌均匀，加入D-柠烯，在水浴温度为30°C下，超声lmin，加入丙酮搅拌均勾，加入松节油、1,8-二桉油素和抗氧化剂，在水浴温度为35°C下，水浴超声2min，即得到切片透明液。
[0031]本发明至少包括以下有益效果:第一、在切片脱蜡液中D-柠烯起到了良好的溶解作用，且可以实现对油脂的洗涤，同时采用四环庚烷、丁基醚聚二甲基硅氧烷、二甲基-3-羟丙基甲基、环氧硬脂酸丁酯代替传统的具有毒害的二甲苯等，不仅能实现对组织的脱蜡，而且也不会造成组织变脆和收缩，同时由于采用了四环庚烷、丁基醚聚二甲基硅氧烷、二甲基-3-羟丙基甲基、环氧硬脂酸丁酯，其保证组织切片的透明度，使得组织细胞结构清楚，背景对比度高，而且可以长期保存，脱蜡抗原修复液起到了对处理过程中被破坏抗原的修复，麝香草酚起到防腐和杀菌的作用；第二、透明液中加入的D-柠烯、异丙醇、松节油和I，8_二桉油素可以保证组织内部折射率均匀一致，减低组织的散射，保证了观察效果，透明液中采用的混合表面活性剂，其保证了各组分在溶液中均匀混合，同时在透明剂中加入的混合抗氧化剂，其不仅不会破坏组织切片的内部结构，而且能有效的防止组织切片氧化变质；第三、本发明提供的套液中不含二甲苯等对人体有害的成分，其全部为无毒无害的化学试剂，有效的保证了工作人员的身体健康。
[0032]本发明设计的制备方法中采用分步在不同的温度下加入组分，其不仅保证了各个溶液的均质性，而且能防止结块等现象的出现，同时采用超声的方法增加了各组分之间的混合以及组分的溶解性。
[0033]发明设计的生物组织样本切片染色套液，不仅可以满足各级医院病理科及科研院所对组织样本处理中对环保型病理学组织学试剂的要求，而且可满足常规病理诊断、免疫组织化学诊断技术、分子生物学诊断技术的要求，处理组织的效果优于传统技术。
[0034]本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解
【具体实施方式】
[0035]下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0036]应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
[0037]实施例1、
[0038]—种生物组织样本切片染色套液，包括:
[0039]切片脱蜡液、苏木素助染液、苏木素染色液、分化液、蓝化液、伊红染色液和切片透明液；
[0040]切片脱蜡液包括:D-柠烯60g、甲基环己烷40g和表面活性剂0.0lg;
[0041 ]苏木素助染液包括:表面活性剂0.0Ig和饱和柠檬酸溶液0.0lg,苏木素助染液的pH值为5.5;
[0042]苏木素染色液包括:苏木素7g、无水乙醇100g、纯化水1000g、高碘酸0.25g、丙三醇85g、柠檬酸5g和硫酸铝钾50g;
[0043]分化液包括:无水乙醇55g、纯化水45g和盐酸0.3g;
[0044]蓝化液包括:纯化水1000g和浓度为2mol/L的氢氧化钾水溶液500g ；
[0045]伊红染色液包括:水溶性伊红8g、纯化水100g、无水氯化妈0.3g和体积百分浓度为0.1 %盐酸水溶液1.5g ；
[0046]切片透明液包括:D-柠烯95g、异丙醇5g和表面活性剂0.0lg。
[0047]实施例2、
[0048]—种生物组织样本切片染色套液，包括:
[0049]切片脱蜡液、苏木素助染液、苏木素染色液、分化液、蓝化液、伊红染色液和切片透明液；
[0050]切片脱蜡液包括:D-柠烯60g、甲基环己烷40g和表面活性剂0.03g;
[0051 ]苏木素助染液包括:表面活性剂0.03g和浓度为饱和柠檬酸溶液0.0Ig，其中，苏木素助染液的pH值为5.5 ；
[0052]苏木素染色液包括:苏木素7g、无水乙醇100g、纯化水1000g、高碘酸0.3g、丙三醇85g、柠檬酸5g和硫酸铝钾50g;
[0053]分化液包括:无水乙醇55g、纯化水45g和盐酸0.5g;
[0054]蓝化液包括:纯化水1000g和浓度为2mol/L的氢氧化钾水溶液500g ；
[0055]伊红染色液包括:水溶性伊红8g、纯化水100g、无水氯化|丐0.5g和体积百分浓度为0.1 %盐酸水溶液1.5g ；
[0056]切片透明液包括:D-柠烯95g、异丙醇5g和表面活性剂0.02g。
[0057]实施例3
[0058]制备实施例1和实施例2中苏木素染色液和伊红染色液
[0059]制备苏木素染色液:将苏木素加入到无水乙醇中，搅拌均匀，得到第一预混液;将硫酸铝钾加入纯化水中，搅拌均匀，得到第二预混液;将第二预混液加热至沸腾，向第二预混液中加入第一预混液，搅拌均匀，煮沸10?15min，加入高碘酸和丙三醇，搅拌均匀，冷却至20?30°C，加入柠檬酸，即得到苏木素染色液。
[0060]制备伊红染色液:将无水氯化钙加入到纯化水中，搅拌均匀，再加入水溶性伊红和体积百分浓度为0.1 %盐酸水溶液，搅拌均匀，静置24h，即得到伊红染色液。
[0061 ] 实施例4、
[0062]—种生物组织样本切片染色套液，包括:
[0063]切片脱蜡液、苏木素助染液、苏木素染色液、分化液、蓝化液、伊红染色液和切片透明液。
[0064]切片脱蜡液:D-柠烯60g、甲基环己烷40g、表面活性剂0.02g、四环庚烷1.3g、丁基醚聚二甲基硅氧烷0.05g、二甲基-3-羟丙基甲基0.02g、环氧硬脂酸丁酯0.lg和脱蜡抗原修复液3g;
[0065]其中，切片脱蜡液中的表面活性剂包括以下质量分数的组分:烷基苯磺酸钠40%、肝胆酸钠30 %和30 %脂肪酸甘油酯；
[0066]苏木素助染液包括:表面活性剂0.02g和饱和柠檬酸溶液0.0 Ig，其中，苏木素助染液的pH值为5.5;
[0067]苏木素染色液包括:苏木素7g、无水乙醇100g、纯化水1000g、高碘酸0.27g、丙三醇85g、柠檬酸5g和硫酸铝钾50g;
[0068]分化液包括:无水乙醇55g、纯化水45g、盐酸0.4g和异丙醇2g;
[0069]蓝化液包括:纯化水1000g和浓度为2mol/L的氢氧化钾水溶液500g ；
[0070]伊红染色液包括:水溶性伊红8g、纯化水100g、无水氯化妈0.4g和体积百分浓度为0.1 %盐酸水溶液1.3g ；
[0071]切片透明液包括:D-柠烯95g、异丙醇5g、表面活性剂0.015g、松节油3g、丙酮10g、I，8-二桉油素3g和抗氧化剂Ig;
[0072]其中，切片透明液中的表面活性剂包括以下质量分数的组分:烷基苯磺酸钠40%、肝胆酸钠30 %和30 %脂肪酸甘油酯；
[0073]切片透明液中的抗氧化剂包括以下质量分数的组分:樟脑醌30%、二丁基茴香醚30%和丁羟基茴香醚40 %。
[0074]实施例5
[0075]制备实施例4中脱蜡液和切片透明液。
[0076]制备切片脱蜡液:向D-柠烯中加入表面活性剂，在水浴温度为35°C下，水浴超声Imin，加入甲基环己烷、四环庚烷、丁基醚聚二甲基硅氧烷、二甲基-3-羟丙基甲基和环氧硬脂酸丁酯，在水浴温度为40 V下，水浴超声40s，加入脱蜡抗原修复液，在水浴温度为30 V下，水浴超声30s，即得到切片脱蜡液。
[0077]制备切片透明液:向异丙醇中加入表面活性剂，搅拌均匀，加入D-柠烯，在水浴温度为30°C下，超声lmin，加入丙酮，搅拌均勾，加入松节油、1,8-二桉油素和抗氧化剂，在水浴温度为35°C下，水浴超声2min，即得到切片透明液。
[0078]尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
【主权项】
1.一种生物组织样本切片染色套液，其特征在于，包括: 切片脱蜡液、苏木素助染液、苏木素染色液、分化液、蓝化液、伊红染色液和切片透明液； 切片脱蜡液包括以下质量份数的组分:D-柠烯60份、甲基环己烷40份和表面活性剂0.01 ?0.03 份； 苏木素助染液包括以下质量份数的组分:表面活性剂0.01?0.03份和饱和柠檬酸溶液0.01份，其中，苏木素助染液的pH值为5.5; 苏木素染色液包括以下质量份数的组分:苏木素7份、无水乙醇100份、纯化水1000份、高碘酸0.25?0.3份、丙三醇85份、柠檬酸5份和硫酸铝钾50份； 分化液包括以下质量份数的组分:无水乙醇55份、纯化水45份和盐酸0.3?0.5份；蓝化液包括以下质量份数的组分:纯化水10000份和浓度为2mol/L的氢氧化钾水溶液500份； 伊红染色液包括以下质量份数的组分:水溶性伊红8份、纯化水1000份、无水氯化钙0.3?0.5份和体积百分浓度为0.1 %盐酸水溶液I?1.5份； 切片透明液包括以下质量份数的组分:D-柠烯95份、异丙醇5份和表面活性剂0.01?0.02 份。2.如权利要求1所述的生物组织样本切片染色套液，其特征在于， 制备苏木素染色液:将苏木素加入到无水乙醇中，搅拌均匀，得到第一预混液;将硫酸铝钾加入纯化水中，搅拌均匀，得到第二预混液;将第二预混液加热至沸腾，向第二预混液中加入第一预混液，搅拌均匀，煮沸10?15min，加入高碘酸和丙三醇，搅拌均匀，冷却至20?30°C，加入柠檬酸，即得到苏木素染色液。3.如权利要求1所述的生物组织样本切片染色套液，其特征在于， 制备伊红染色液:将无水氯化钙加入到纯化水中，搅拌均匀，再加入水溶性伊红和体积百分浓度为0.1 %盐酸水溶液，搅拌均匀，静置24h，即得到伊红染色液。4.如权利要求1所述的生物组织样本切片染色套液，其特征在于， 切片脱蜡液、苏木素助染液、苏木素染色液、分化液、蓝化液、伊红染色液和切片透明液； 切片脱蜡液包括以下质量份数的组分:D-柠烯60份、甲基环己烷40份、表面活性剂0.02份、四环庚烷1.3份、丁基醚聚二甲基硅氧烷0.05份、二甲基-3-羟丙基甲基0.02份、环氧硬脂酸丁酯0.1份和脱蜡抗原修复液3份，其中，表面活性剂包括以下质量分数的组分:烷基苯磺酸钠40%、肝胆酸钠30%和30%脂肪酸甘油酯； 苏木素助染液包括以下质量份数的组分:表面活性剂0.02份和饱和柠檬酸溶液0.01份，其中，苏木素助染液的PH值为5.5; 苏木素染色液包括以下质量份数的组分:苏木素7份、无水乙醇100份、纯化水1000份、高碘酸0.27份、丙三醇85份、柠檬酸5份和硫酸铝钾50份； 分化液包括以下质量份数的组分:无水乙醇55份、纯化水45份、盐酸0.4份和异丙醇2份； 蓝化液包括以下质量份数的组分:纯化水10000份和浓度为2mol/L的氢氧化钾水溶液500份； 伊红染色液包括以下质量份数的组分:水溶性伊红8份、纯化水100份、无水氯化钙0.4份和体积百分浓度为0.I %盐酸水溶液1.3份； 切片透明液包括以下质量份数的组分:D-柠烯95份、异丙醇5份、表面活性剂0.015份、松节油3份、丙酮10份、I，8_二桉油素3份和抗氧化剂I份，其中，表面活性剂包括以下质量分数的组分:烷基苯磺酸钠40%、肝胆酸钠30%和30%脂肪酸甘油酯，抗氧化剂包括以下质量分数的组分:樟脑醌30%、二丁基茴香醚30%和丁羟基茴香醚40%。5.如权利要求4所述的生物组织样本切片染色套液，其特征在于， 制备切片脱蜡液:向D-柠烯中加入表面活性剂，在水浴温度为35°C下，水浴超声lmin，加入甲基环己烷、四环庚烷、丁基醚聚二甲基硅氧烷、二甲基-3-羟丙基甲基和环氧硬脂酸丁酯，在水浴温度为40 V下，水浴超声40s，加入脱蜡抗原修复液，在水浴温度为30 °C下，水浴超声30s，即得到切片脱蜡液。6.如权利要求4所述的生物组织样本切片染色套液，其特征在于， 制备切片透明液:向异丙醇中加入表面活性剂，搅拌均匀，加入D-柠烯，在水浴温度为30°C下，超声Imin，加入丙酮搅拌均勾，加入松节油、I，8-二桉油素和抗氧化剂，在水浴温度为35°C下，水浴超声2min，即得到切片透明液。
【文档编号】G01N1/30GK106053187SQ201610341259
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月20日
【发明人】李明, 王德田
【申请人】北京九州柏林生物科技有限公司