专利名称：蝴蝶兰快速繁殖的新方法
技术领域：
本发明涉及一种新的蝴蝶兰(Phalaenopsis hybrid)快速繁殖方法。
目前，采用组织培养快速繁殖蝴蝶兰已在生产上得到广泛应用。主要通过两个途径实现一是将近成熟或成熟的果实消毒后在培养基上无菌播种，组培形成实生苗(见张秀清等，莱阳农学院报，1995年第12卷第1期第44-46页)；二是采用各种营养器官为外植体，通过诱导类原球茎(protocormlike body,PLB)或丛生芽的方法来繁殖获得组培苗(见王怀宇，园艺学报，1989年第16卷第73-77页；刘荣维等，热带作物学报，1993年第14卷第105-107页)。第一种方法是目前采用最为普遍的方法，但需要获得优良品种的果实。而通过杂交获得优良品种果实具有一定的难度。通过丛生芽的方法繁殖组培苗存在着繁殖速度不够快的缺陷，而在诱导类原球茎(protocorm like body,PLB)时，现有的方法是用蝴蝶兰的茎尖或幼叶作为外植体，存在着不同品种的难易程度不同，一些好品种的诱导难度太大的问题。
本发明的目的在于针对上述问题，提供一种获得无菌苗的快速方法，该方法具有稳定性好、操作简便、繁殖速率更快的优点。
本发明的方法是先用蝴蝶兰种子萌发得到无菌实生苗；再用无菌实生苗培养得到试管苗和PLB；最后以PLB为外植体培养出组培苗。
本发明方法的较佳方案如下1、用蝴蝶兰种子萌发得到无菌实生苗蝴蝶兰果实经75-80％乙醇浸泡8-10分钟，在酒精灯火焰上灼烧消毒后，切开果实，将种子萌发在1/2 MS+6-BA 2+NAA 0.2+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上，以培养获得高0.5-1cm的无菌实生苗，培养条件为光照8-12小时/天，光强1500-2000Lx，温度为25-27℃，培养时间2-3个月；2、用无菌实生苗培养得到试管苗和PLB将由步骤1得到的无菌实生苗转接到1/2 MS+6-BA 2-5+NAA 0.1-0.5+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上，生长2-3个月获得试管苗，在此过程中部分试管苗的茎基部(或根、茎结合部)可产生一种片状结构或茎状结构，属于类原球茎(protocorm like body,PLB)；
3、以PLB为外植体培养出组培苗将PLB切割成长为0.25-1.0cm的外植体，培养在1/2MS+6-BA0.5-2+NAA 0-0.5+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上或改良的Kyoto培养基(花宝1号3.5g/L+水解酪蛋白0.1％+NAA2+肌醇100mg/L+活性碳0.05％的固体培养基)上，7-21天就可长出芽点，芽点在原有培养基上生长之后可长成组培苗。
在本方法中，MS培养基是最常用的培养基，一般从有关植物组织培养的书都可找到其配方。6-BA2-5是指在培养基中加入6-BA2-5mg/L，其它类推，6-BA是6-苄基腺嘌呤，NAA是萘乙酸，它们都是常用的植物生长调节剂，在化学或生化试剂商店可购买到。花宝1号是美国生产的化肥，在市面上也可以买到。
统计结果表明，在本方法中，10％-15％试管苗的茎基部(或根、茎结合部)可产生PLB。每株试管苗的PLB数目不同，一至十几个不等。平均长0.5cm的PLB，平均出芽数为16个/每外植体，最多可达42个/每外植体；而平均长0.25cm的PLB，平均出芽数为8.4个/每外植体，最多可达28个/每外植体。
本发明具有如下的优点和效果1、在组织培养实生苗或丛生芽生长过程中，将幼苗基部的PLB切下，进行增殖和扩大培养，既不影响无菌苗的生长，又可从此途径获得大量的无菌苗，使增殖率增加上万倍。这个增殖途径具有简便、快速的优点。以每株植株的茎基部产生3个1cm长的PLB计算，每4个月平均一株无菌苗可增殖为96株无菌苗，准备出瓶移栽。以4个月为一个周期，每株无菌苗产生PLB的概率为10％计算，每年每株实生苗的增殖理论数为8847株。这对于进行杂交育种中，获得极少数果实的优质品种蝴蝶兰的快速繁殖有很大的应用价值。
2、本方法稳定可靠，在3个品种(红花、红花白心、白花)的实生苗培养过程中，都获得了PLB结构，并能增殖产生大量的芽和植株。且可随时从组培中获得PLB，不受季节限制。从此途径获得的无菌苗都能正常生长、出瓶。
下面结合实施例描述本发明的最佳实施方案，但不限于此实施例11、红花蝴蝶兰果实经80％乙醇浸泡10分钟，在酒精灯火焰上灼烧消毒后，切开果实，将种子萌发在1/2 MS+6-BA 2+NAA 0.2+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上，获得高0.5cm的无菌实生苗，培养条件为光照12小时/天，光强1500Lx，温度为25℃，培养时间为2个月；2、将得到的无菌实生苗转接到1/2 MS+6-BA 5+NAA 0.5+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上，生长2个月获得试管苗，在此过程中10％的试管苗的茎基部(或根、茎结合部)可产生PLB；3、将PLB切割成长为0.25cm的外植体，培养在1/2MS+6-BA 0.5+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上21天，将长出的芽点在原有的培养基上进行培养，成功获得所需的组培苗。接种外植体个数为54个，获得的芽数454个，平均每外植体长芽8.4个。
实施例2操作同实施例1，在步骤1中使用的蝴蝶兰为白花品种，乙醇浓度为75％浸泡8分钟，培养条件为光照8小时/天，光强2000 Lx，温度为27℃，培养时间为2个月，得到的无菌实生苗高1.0cm。在步骤2中，固体培养基采用1/2 MS+6-BA 3+NAA 0.3+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％，无菌实生苗在固体培养基上生长的时间为3个月，有15％的试管苗的茎基部(或根、茎结合部)可产生PLB。在步骤3中，切成的外植体长度为0.5cm，培养基采用改良的Kyoto培养基，培养时间为7天，结果成功获得所需的组培苗。接种外植体个数91个，获得的芽为1456个，平均每外植体长芽16个。
实施例3操作同实施例1，在步骤1中使用的蝴蝶兰品种为白花红心，乙醇浓度为77％浸泡9分钟，培养条件为光照10小时/天，光强1700Lx，温度为27℃，培养时间为2个月，得到的无菌实生苗高0.5cm。在步骤2中，固体培养基采用1/2 MS+6-BA 2+NAA 0.1+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％，无菌实生苗在固体培养基上生长的时间为2个半月，有10％的试管苗的茎基部(或根、茎结合部)可产生PLB。在步骤3中，切成的外植体长度为0.5cm，培养基采用1/2MS+6-BA 0.5+NAA 0.1+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基，培养时间为15天，结果成功获得所需的组培苗。接种外植体个数30个，获得的芽为477个，平均每外植体长芽15.9个。
实施例4
操作同实施例1，步骤1、步骤2与实施例1相同。在步骤3中，切成的外植体长度为0.5cm，培养基采用1/2MS+6-BA 1+NAA 0.1+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基，培养时间为15天，结果成功获得所需的组培苗。
实施例5操作同实施例1，步骤1、步骤2与实施例1相同。在步骤3中，切成的外植体长度为0.5cm，培养基采用1/2MS+6-BA 2+NAA 0.2+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基，培养时间为15天，结果成功获得所需的组培苗。
实施例6操作同实施例1，步骤1、步骤2与实施例1相同。在步骤3中，切成的外植体长度为0.5cm，培养基采用改良的Kyoto培养基，培养时间为15天，结果成功获得所需的组培苗。
权利要求
1.一种蝴蝶兰快速繁殖的方法，其特征在于先用蝴蝶兰种子萌发得到无菌实生苗；再用无菌实生苗培养得到试管苗和PLB；最后以PLB为外植体培养出组培苗。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于-在用蝴蝶兰种子萌发得到无菌实生苗的步骤中，蝴蝶兰果实先经75-80％乙醇浸泡8-10分钟，在酒精灯火焰上灼烧消毒后，切开果实，再将种子萌发在1/2MS+6-BA2+NAA0.2+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上获得高0.5-1cm的无菌实生苗，培养条件为光照8-12小时/天，光强1500-2000Lx，温度为25-27℃，培养时间为2-3个月；-在用无菌实生苗培养得到试管苗和PLB的步骤中，将无菌实生苗转接到1/2MS+6-BA2-5+NAA0.1-0.5+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上，生长2-3个月获得试管苗，在此过程中部分试管苗的茎基部或根、茎结合部可产生PLB；-在以PLB为外植体培养出组培苗的步骤中，将PLB切割成长为0.25-1.0cm的外植体，培养在1/2MS+6-BA0.5-2+NAA0-0.5+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基上或改良的Kyoto培养基上，7-21天后长出芽点，芽点在原培养基上培养长成组培苗。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于在以PLB为外植体培养出组培苗的步骤中，所用的培养基为1/2MS+6-BA 0.5-2+NAA0.1-0.2+香蕉泥50g/L+活性碳0.05％的固体培养基。
全文摘要
蝴蝶兰快速繁殖的新方法，先用蝴蝶兰种子萌发得到无菌实生苗；再用无菌实生苗培养得到试管苗和PLB；最后以PLB为外植体培养出组培苗。每一步骤均必须使用专用培养基。本方法具有稳定性好、操作简便、繁殖速率快的优点。
文档编号A01H4/00GK1317231SQ01114730
公开日2001年10月17日 申请日期2001年5月25日 优先权日2001年5月25日
发明者王小菁, 叶庆生, 潘瑞炽 申请人:华南师范大学