专利名称：无菌兔的饲料配方及灭菌方法
技术领域：
本发明公开了一种无菌兔的饲料配方及灭菌方法，属于生物学领域。
背景技术：
动物通常是在开放系统条件下饲养的，常受到自然界微生物和寄生虫的侵袭，一般都带细菌、病毒和寄生虫，有的动物外观看起来健康，其实都隐藏着某些疾病或有微生物与寄生虫的感染。因此用通常动物进行实验敏感性差、反应性不一致，实验结果缺乏再现性。要提高动物实验的准确性，就必须对实验动物在遗传和微生物两个方面加以控制，培养出标准的合格动物，才能使实验结果正确可靠，达到反应均一性和重复性。
随着科学的发展，向实验动物提出了更高的要求，实验证明，消除实验动物自身疾病对实验结果的干扰，除了剖腹产所获得的仔畜，饲养在严格的无菌隔离屏障内，没有另外的办法可以消除实验动物本身所带的传染性疾患。
无菌动物，就是指不能检出任何活的微生物和寄生虫的动物。从微生物学的观点看，通常实验动物的体内和体外带有寄生虫，体内还常带有细菌和病毒，难于排除某些潜在的传染病。此外，普通实验动物的血清中含有抗体。所以用普通动物进行医学科学研究，会存在各种各样的干扰，实验结果往往不确切。使用无菌动物作实验就可以克服普通实验所存在缺点，使实验结果正确可靠。如对无细菌、病毒感染的无菌兔与普通兔之间的骨髓嗜多染性红细胞微核率进行实验分析比较。带菌环境对兔的遗传物质的稳定性均有一定影响，普通兔骨髓嗜多染性细胞核核率分别比无菌兔高11倍和8倍多。在遗传背景、环境理化因子作用相同情况下，微生物是引起微核率升高的直接原因。而无菌兔自发微核率低，可作为检测环境中致癌、致畸和致突变物的优选实验动物。因此，在精度要求高的实验中，无菌动物、悉生动物和无特殊病原体动物就成了理想的实验动物。无菌动物大规模地生产和广泛应用于医学研究的各个领域，取得了普通动物实验所无法发现的丰硕成果，丰富了无菌动物的研究内容。
自从1943年Reyniers Trexler获得无菌兔以来。无菌兔的获得技术已经非常成熟，但无菌兔饲料，始终未能彻底解决，已成为无菌兔发展的瓶颈问题。Baeot和Harden发现无菌蝇蛆必须饲喂B族维生素才能正常生长，证明了无菌动物对B族维生素的需要，因为无菌动物肠内没有细菌存在，自身不能合成B族维生素，从而找到了过去饲养无菌动物失败的原因。1937年Balzam在无菌鸡的维生素B族缺乏症及在鸡体内能否合成B族维生素的研究中，更加清楚地证明了这个问题。无菌动物对B族维生素需要的发现是很有价值的，推动了无菌动物培养工作的发展。
无菌兔的饲料，必须经过充分的灭菌，无菌兔饲料的灭菌方法，目前多用高压灭菌，或放射线灭菌，或环氧乙烷灭菌法灭菌，营养成份破坏显著，饲料保存时间短，须补充因高压灭菌而破坏的营养成份，如维生素B1、维生素C、泛酸等。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术存在的问题，而提供的一种安全经济，营养均衡全面，灭菌充分，适口性好的无菌兔饲料。
本发明的积极效果1、本饲料根据兔饮食结构进行组方，营养均衡全面，饲料的适口性好；2、用本饲料喂养无菌兔的成活率高，效果好，提高了科研经费的使用效率；3、用本饲料喂养的无菌兔，没有活的微生物和寄生虫或虫卵感染，使实验结果正确可靠；4、饲料的组成、形态和气味适合兔的习性和嗜好；5、饲料制作过程简单，价格较低廉，便于推广，为全面提升实验兔的微生物质量，满足生产、科研、检定的需要，搭建了平台。
家兔是由野兔经长期驯化而来的，无菌兔是在无菌屏障系统中，剖腹取出胎儿，饲养繁育在无菌隔离器中，无菌兔外观和普通动物相同，但是其机能、结构和普通动物有很大的不同。
无菌兔是素食动物，对饲料非常挑剔，粒状精料比粉状饲料，无论对兔的生长效果和饮料效能都为优越。兔对粗饲料中的蛋白质消化率较高，能充分利用饲料中如蛋白质等其他物质，如兔与猪相比，兔能有效地利用粉蛋白质约75％，而猪低于50％。
因为无菌动物肠内没有细菌存在，自身不能合成B族维生素，过去饲养的无菌动物失败的原因之一，就是饲料中没有补充维生素，本饲料圆满地解决这一问题，本饲料配方是进行大量试验得出的，各组分用量在下述重量份范围都具有较好疗效。
蛋白质55-65份、脂肪60-70份、乳糖78-88份、矿物质10-20份、维生素0.25-0.35份。
优选为蛋白质60份、脂肪65份、乳糖83份、矿物质16份、维生素0.3份。
本发明的另一方面，涉及一种无菌兔饲料的灭菌方法。
将饲料用塑料袋密封包装，经20-30KGY剂量60钴照射灭菌，再经灭菌渡槽传入无菌隔离器；溶解饲料的无菌水，经高压118-124摄氏度和40-50分钟灭菌。
用60钴照射饲料灭菌效果显著，保存时间长，能保持无菌状态达6个月以上，营养成份如维生素B1、维生素B2、维生素C、蛋白质、胱氨酸、赖氨酸、泛酸等破坏较高压灭菌法显著减少。
人工哺乳装置50ml注射器和输液管剪接所需部位和长度，12～16号针头，自制人工乳头等部分连接即成。
无菌检测用人工哺乳方法将仔兔培育成熟，在30～35天离乳时，用硫乙醇酸钠培养基(TGC)和脑心津液培养基(TSA)检测新鲜粪便和咽拭子，25℃和37℃培养18天。
微生物接种第一批无菌兔离乳后，接种5种微生物无菌兔没有微生物的攻击，身体抵抗力较弱，因此首先接种乳酸杆菌，双歧杆菌，一周后再接种肠球菌，肠杆菌和拟杆菌，接种途径为口服，接种量为106。经检验后确定已定植于兔体，并不带有特别指定的微生物即视该动物为无菌动物。
微生物检测用本灭菌方法灭菌后的无菌兔的新鲜粪便、活兔样品(包括所产后代的成年兔)，送中国药品生物制品检定所实验动物中心实验动物标准化室按GB1 492_94和GB/T14926 1_41_94每月检测微生物状态，包括寄生虫(弓形体、兔脑原虫、爱美尔球虫、卡氏肺孢子虫、蠕虫、鞭毛虫)，细菌(沙门菌、单核细胞增多性李斯特杆菌、假结核耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌、皮肤病原真菌、念珠状链球菌、多杀巴斯德杆菌、泰泽病原体、嗜肺巴斯德杆菌、肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶性链球菌、绿脓杆菌)，病毒(兔出血热病毒、仙台病毒、呼肠孤病毒III型、轮状病毒)，无菌兔检验结果符合无菌兔的等级标准。
用高压灭菌的人工乳和60Co灭菌的饲料饲喂无菌兔，其体重增长曲线及成活率结果如下
两种饲料对兔生长曲线的影响
由此可知，用高压灭菌的动物体重增长慢，成活率低，一周后动物全都死去。
本发明将通过实施例进一步说明具体实施方式
实施例一按照下述重量配比称取各原料蛋白质55份、脂肪60份、乳糖78份、矿物质10份、维生素0.25份。
将蛋白质、脂肪、乳糖、矿物质、维生素用塑料袋密封包装，经20-30KGY剂量60钴照射灭菌，再经灭菌渡槽传入无菌隔离器；溶解饲料的无菌水，经高压118-124摄氏度和40-50分钟灭菌后存放于无菌间，喂养时再经高压118-124摄氏度和40-50分钟灭菌。
人工哺乳左手持仔畜头颈部，右手持乳头插入仔畜口中，轻轻挤压人工乳头，使流出一滴乳汁，诱导动物吮吸，哺乳时，注意力要集中，时刻注意动物口中的乳，如果动物口中的乳过多，应控制流速，防止动物呛着。
哺乳次数 每天早8:00，下午2:00，晚8:00定时哺乳。
哺乳量动物哺乳量的估计，按体重的20％计算一天的哺乳总量，除以3后即为每次的哺乳量，并视情况而决定具体的哺乳量。
实施例二按照下述重量配比称取各组分原料蛋白质65份、脂肪70份、乳糖88份、矿物质20份、维生素0.35份。
哺乳方法、哺乳次数、哺乳量同实施例一。
实施例三按照下述重量配比称取各组分原料蛋白质60份、脂肪65份、乳糖83份、矿物质16份、维生素0.3份。
哺乳方法、哺乳次数、哺乳量同实施例一。
权利要求
1.一种无菌兔的饲料配方，其特征在于该配方由以下重量配比的原料制成蛋白质55-65份、脂肪60-70份、乳糖78-88份、矿物质10-20份、维生素0.25-0.35份。
2.根据权利要求1所述的一种无菌兔饲料配方，其特征在于各原料的优选用量为蛋白质60份、脂肪65份、乳糖83份、矿物质16份、维生素0.3份。
3.一种无菌兔饲料配方的灭菌方法，其特征在于饲料用塑料袋密封包装，经20-30KGY剂量60钴照射灭菌。
4.根据权利要求3所述的一种无菌兔饲料配方的灭菌方法，其特征在于溶解饲料的无菌水，经高压118-124摄氏度和40-50分钟灭菌。
全文摘要
本发明公开了一种无菌兔的饲料配方及灭菌方法。发明人根据兔饮食结构，以蛋白质、脂肪、乳糖、矿物质、维生素为原料制成饲料，经
文档编号A23K1/16GK1748551SQ20051008658
公开日2006年3月22日 申请日期2005年10月11日 优先权日2005年10月11日
发明者王荫槐, 涂新明, 李红, 秦川, 寿克让, 何伏秋 申请人:中国医学科学院实验动物研究所