专利名称：用于培养饵料线虫的细菌菌株(kg品系)及其线虫培养方法
技术领域：
本发明涉及一种用于培养饵料线虫的细菌及其饵料线虫Panagrellus redivivus的培养方法。
背景技术：
世界范围的水产养殖，特别是对虾的养殖热带动了水产品幼苗培育的发展，也加剧了生物饵料的需求，尤其是卤虫的需求。卤虫一般采自高盐度水域，其集约化养殖尚未形成规模。最初，美国犹他州的大盐湖是盛产卤虫的场地，多年来其卤虫卵产量一直占世界产量的80％以上，左右世界市场的供应。但是，九十年代以来，由于卤虫资源的过度收采以及湖水盐度的改变，盐湖的卤虫产量急剧下降，导致了卤虫的价格不菲。中亚地区也供应卤虫，但是由于所产卤虫质量的不稳定，市场的需求仍未满足。为了满足市场的需要和保护自然卤虫资源，有必要寻找新型的生物饵料以替代或部分替代目前广泛使用的卤虫饵料。
目前，自由生活线虫Panagrellus redivivus(一种小杆目腐生线虫，卵胎生；中文名待定)已用作鱼虾苗的生物饵料〔Schlechtriem et al.(2004)Aquaculture Research 35，547-551；Briedenbach et al.(1989)Journal of World Aquaculture Society 20，61-71；Hofsten et al(1983)Journal of Fish biology 23，419-428.〕。这类线虫作为生物饵料具有体积小，可在海水中生存72小时以上，个体不会过度增大而使幼虾难以消化，营养价值高，世代时间短，繁殖力强，培养方法简单的优点。因此是鱼、虾蟹等水产苗种适宜的高级活生物饵料。P.redivivus线虫的培养一般采用在培养基中加入大肠杆菌或酵母菌实现的。大肠杆菌或酵母菌的加入主要是直接提供线虫繁殖所需要的营养，或者在繁殖过程中转化培养基为线虫提供营养。但是，在商业化应用上，由于大肠杆菌是人类的病原菌，因此，难以用于生物饵料的大规模培养；酵母菌虽然作为生物饵料是安全的，但是，酵母菌的培养，特别是液体培养不如细菌方便。因此，有必要选择新的菌株来培养这种生物饵料线虫。
发明内容
本发明的目的是提出一种可用来培养Panagrellus redivivus这种生物饵料线虫的细菌菌株。
本发明的另一目的是提供一种培养Panagrellus redivivus生物饵料线虫的新方法。
本发明所提出的用于培养Panagrellus redivivus生物饵料线虫的细菌菌株，为Xenorhabdus属的Xenorhabdus poinarii KG品系细菌，该菌株是从专性寄生昆虫的昆虫病原线虫体内分离的，革兰氏阴性，属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)。过氧化氢酶阴性；硝酸盐不能被降解为亚硝酸盐；初生型菌体具有周身鞭毛；不产生生物荧光。在LB固体培养上，Xenorhabduspoinarii KG菌株的菌落呈现呈现浅褐色。
该细菌菌株已保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其保藏编号为CCTCC NOM 206091，保藏日期为2006年9月17日。
本发明提出的生物饵料线虫的培养方法是，采用菌株Xenorhabduspoinarii KG CCTCC M206091作为生产菌，其培养步骤包括将细菌菌株Xenorhabdus poinarii KG CCTCC M 206091在蛋白胨水培养基上，于25-28℃下培养得到细菌液，然后将其加入线虫培养基，再接入无菌的Panagrellus redivivus线虫，置于25-28℃下培养6至15天，即可收获所培养的线虫。
在所述的生物饵料线虫的培养方法中，所述的蛋白胨水培养基推荐采用含有1％(质量百分比)蛋白胨和0.5％(质量百分比)氯化钠的蛋白胨水培养基。
推荐的线虫培养基的组分配比(按质量百分比计)为酵母膏1％，面粉10％，黄豆粉5％，猪油4％，水65％，海绵15％。
昆虫病原线虫是目前新型的生物农药，由于其安全性和有效性，许多工业化国家豁免注册可以释放。Xenorhabduspoinarii KG CCTCC M 206091是利用这类昆虫病原线虫体内分离的Xenorhabdus属共生细菌，利用它来培养P.redivivus线虫不仅对环境和人畜安全，而且容易培养，特别是大型发酵罐的培养。本发明描述的方法可促进P.redivivus线虫的产业化培养，为水产养殖业提供优良的生物饵料。
具体实施例方式
下列实验及操作实例是进一步对本发明的说明，不应该当作对本发明的限制。
1.将菌株Xenorhabdus poinarii KG CCTCC M 206091在含有1％(质量百分比)蛋白胨，0.5％(质量百分比)氯化钠的蛋白胨水培养基上，于26℃下培养得到Xenorhabdus属的细菌液；2.将线虫培养基在121℃下灭菌40分钟，线虫培养基的组分配比(按质量百分比计)为酵母膏1％，面粉10％，黄豆粉5％，猪油4％，水65％，海绵15％；3.将100克经灭菌的线虫培养基加到500ml的三角瓶中，再加入所培养的Xenorhabdus属的细菌液，然后接入无菌的P.redivivus线虫，置于25-28℃下培养，6至15天后收获所培养的线虫，即可收获培养物中的线虫。
在做上述用Xenorhabdus poinarii KG CCTCC M 206091菌株培养Panagrellus redivivus生物饵料线虫实验时，发明人作了在同样培养基中接入大肠杆菌(Escherichia coli)EPI100品系和啤酒酵母菌的Invscl，Gim2.8和R12品系的对比试验，这些培养物同样置于25-28℃下培养。6至15天计算培养物中线虫的产量。
结果显示分别接入Xenorhabdus poinarii KG CCTCC M 206091菌株、大肠杆菌EPI100品系、啤酒酵母菌的Invscl、Gim2.8和R12品系菌液的培养瓶中，每瓶含100克培养基的产量分别是2365，2839，3470，3000，和1140万条P.redivivus线虫。可见，Xenorhabdus poinariiKG CCTCC M 206091的细菌菌株可支持P.redivivus线虫的繁殖，而且获得较高的产量。
权利要求
1.一种用于培养生物饵料线虫的细菌菌株，其特征在于该细菌菌株为保藏于中国典型培养物保藏中心的Xenorhabdus poinarii KG CCTCC M 206091。
2.一种生物饵料线虫的培养方法，其特征在于采用细菌菌株Xenorhabdus poinarii KGCCTCC M 206091作为生产菌，其培养步骤包括将细菌菌株Xenorhabdus poinarii KG CCTCCM 206091在蛋白胨水培养基上，于25-28℃下培养得到细菌液，然后将其加入线虫培养基，再接入无菌的Panagrellus redivivus线虫，置于25-28℃下培养6至15天，即可收获所培养的线虫。
3.根据权利要求1所述的生物饵料线虫的培养方法，其特征在于所述的蛋白胨水培养基含有质量百分比为1％的蛋白胨和质量百分比为0.5％的氯化钠。
4.根据权利要求1所述的生物饵料线虫的培养方法，其特征在于所述的线虫培养基的组分配比按质量百分比计为酵母膏1％，面粉10％，黄豆粉5％，猪油4％，水65％，海绵15％。
全文摘要
本发明提供一种用于培养饵料线虫的细菌菌株(KG品系)及其线虫培养方法，所提供的细菌菌株为Xenorhabdus poinarii KG CCTCC M 206091。其线虫培养方法是以Xenorhabduspoinarii KG CCTCC M 206091菌株为生产菌，其培养步骤包括将细菌菌株Xenorhabduspoinarii KG CCTCC M 206091在蛋白胨水培养基上，于25－28℃下培养得到细菌液，然后将其加入线虫培养基，再接入无菌的Panagrellus redivivus线虫，置于25－28℃下培养6至15天，即可收获所培养的线虫。本发明所提供的菌株是从昆虫病原线虫体内分离的Xenorhabdus属共生细菌，利用它培养得到的P.redivivus线虫，对环境和人畜安全，为水产养殖业优良的生物饵料。
文档编号A23K1/18GK101041810SQ20061012279
公开日2007年9月26日 申请日期2006年10月17日 优先权日2006年10月17日
发明者韩日畴, 丘雪红, 曹莉, 刘小芬, 刘秀玲, 陈镜华 申请人:广东省昆虫研究所