专利名称：一种油茶无性系组培快繁方法
技术领域：
本发明涉及一种油茶无性系组培快繁技术，具体是提供一种通过组织培养快速繁殖 获得大量油茶优良无性系苗木的方法。
背景技术：
油茶(Ow7e〃Za5p/ )是山茶科(77^arae)山茶属(0 meWfl)中种子含油量高、具有生 产价值的油用物种的总称，是我国特有的优质木本油料树种，与油棕、椰子和油橄榄并 称为世界四大木本油料树种[1]。我国现有油茶栽培面积4531万亩，主要分布于南方14个 省(区)，油茶种子榨取的茶油风味独特，营养丰富，脂肪酸组成合理，不饱和脂肪酸 含量高达90%，油酸含量80%以上，不含人体难以吸收的芥酸和山俞酸，也不含会引起 人体血压增高而导致血管硬化的胆固醇，油质优于橄榄油等其它食用油，是理想的食用 油[2]。茶油的副产品茶枯和茶壳还可以通过综合利用提取茶皂素、磨制刨光粉和发酵高 蛋白饲料等，油茶果壳可生产活性碳和提取鞣料等，所以通过深加工和综合利用可大幅 度提高油茶产品的附加值。油茶适应性广、耐瘠薄，是南方低山、丘陵和岗地很好的经 济林树种之一，不与粮、棉争地，而且还具有一年种植，多年受益的特点，丰产期长达 80年，在我国南方农村经济和生态建设中占有很重要的地位["，发展油茶生产有利于缓 解我国食用油长期依赖进口，供需紧张的矛盾，对提高我国国民经济和人民生活水平具 有重大意义。
油茶种苗繁育主要采用播种育苗和芽苗砧嫁接法。过去油茶繁殖方法主要是播种 育苗，后代分化严重，难以保持母株的优良性状， 一般6 8年始果，产量高低不一。目 前油茶种苗繁育主要采用无性繁殖方式一芽苗砧嫁接法，该方法技术难度大，嫁接成活 率和合格苗出圃率均较低，出圃时间长达2年，造林成活率不稳定，造林成本高，林相 整齐度差，苗木繁殖系数低，难以满足全国油茶产业发展对油茶优良无性系的需求，迫 切需要研究油茶优良无性系高效组培快繁新技术。
组培快繁技术是一种广泛用于农业、林业的无性繁殖方法，具有繁殖速度快、方 法简单、操作容易，材料消耗少，不受季节和地域限制的特点，同时子代能够保持母株的优良遗传特性。因此，研究油茶优良无性系组培快繁技术，对缓解油茶苗木紧张、加
快油茶产业发展，缓解我国食用油紧张局面，推动农村经济和社会主义新农村建设具有
重大战略意义。植物组织培养需经过初代、继代、生根、移栽四个阶段，得到完整植株。
继代阶段，通过调整基本培养基和植物激素来提高增殖系数；生根阶段， 一般在培养基
中加入促进生根的植物激素，30天左右生根,生根阶段仍是无菌的，需要配制生根培养基，
耗费大量药品费、水电费、劳务费等；生根后把试管苗从无菌条件下移栽在室外环境中，
其适应能力差，移栽成活率低，导致试管苗生产成本比普通苗价格高几倍或几十倍。 20世纪80年代初期,国内有学者对油茶组织培养开展了研究，广西自治区林科所颜
慕勤于1980年报道,主要通过油茶组织培养诱导出了胚状体，将子叶置于含有高浓
度2,4-D(mg/L)SH培养基中进行培养，通过胚状体形成了再生植株[4]; 1981年和
1982年,隆振雄和卢天玲先后分别利用油茶未成熟子叶幼胚离体培养，采用White附加
NAA(0.05)+BA(0.5)，胚状体诱导率达100% ，采用N6附加
IAA(0.5)+BA(2)+LH(500)，分化率达100% [5'6],此后,隆振雄对油茶花药培养进行
了研究，通过组织培养诱导产生了愈伤组织,并获得了绿色芽点和根，但未获得再生植株。随后油茶组织培养基本停滞,2004年,中南林学院毕方铖、张智俊等对油茶的茎段、
幼胚、子叶在离体条件下进行诱导，茎段离体培养以MS为基本培养基，附加6-BA3.0
mg/L+NAA 1.0 mg/L对芽进行诱导，诱导率达到83.33%;继续在此培养基上继代得到
丛生芽，将无菌苗在MS培养基(附加NAA7mg/L)上诱导生根，但获得的再生苗大多只
有一条主根，须根很少，试管苗移栽难以成活，故未能获得移栽成活的植株[8'9]。吴正
凯[1()]等在油茶组织培养过程中发现，MV培养基可以诱导生根，但生根率仅72%，也未
能获得移栽成活的植株。
根据现有技术表明，山茶科山茶属植物油茶的组培快繁较为困难，细胞不易诱导分
化再生植株，而且生根困难，试管苗移栽难以成活，至今未获得移栽成活的试管苗。本
发明针对现有技术的不足，提供一种操作简单，繁殖系数高、生根率和成活率高、组培
苗生产成本低的油茶组培快繁新技术。
发明内容
本发明提供了一种油茶无性系组培快繁方法，包括初代、继代、生根、移栽四个阶 段，于获得生根材料后，将生根和移栽步骤合二为一，其中组培苗扦插生根以及生根基质的配制由黄心土、炭化谷壳灰、细沙按体积比1 : 2 3 : 1配制成生根基质；将基质装入扦插容器中，将组培苗扦插其中，并用透光薄膜封口。
进一步的优选方案是把组培苗从培养瓶中取出后，对组培苗进行消毒。优选在0.1% 瑞毒霉一锰锌溶液中浸泡2-4分钟。
根据本发明的实施例，还对组培苗进行生根材料的激素预处理。优选将组培苗的基 部在500 8000ppm的KIBA溶液中浸泡34秒。进一步优选，对扦插组培苗的基质也 进行消毒。
本发明还公开了对组培苗生根期管理的优化。将扦插组培苗的扦插容器置于具间歇 喷雾设施的温室大棚中管理，温度保持20 30度，30 40天后，组培苗生根形成完整 植株。
实施本发明时，上述方法中所用的组培苗可以依据现有技术中公布的方法获得。同 时本发明还提供优选的获得组培苗的方法。 本发明提供的获得组培苗的方法中
(1) 继代培养基及激素配比为WPM+BA 3-7mg/L+IBA 0.1-2mg/L+ZT 0.05-2mg/
L进行增殖，；
(2) 壮苗培养基及激素配比为WPM+IBA0.1-lmg/L+GA5-20mg/L;诱导生根。
本发明提供的一种油茶无性系组培繁殖方法，能实现组培苗生根形成完整植株，并 省去组培苗移栽的环节，生根率和成活率达87%以上。
图1-2是油茶组培苗增殖状态的实验结果图； 图3是油茶组培苗壮苗状态的实验结果图； 图4是油茶组培苗生根状的实验结果图； 图5是油茶组培苗生根成活状的结果图。
具体实施方式
实施例1
从油茶健壮植株上剪取当年生新稍，取顶端4-6cm进行消毒处理；将初代获得的无 菌苗转移到WPM+BA3mg/L+IBA1.0mg/L+ZT0.5mg/L继代培养，增殖周期为30天，增殖系数达4.6;将增殖过程中获得的无菌苗采用WPM+IBA0.1mg/L+GA10mg/L进行壮 苗，20天组培苗长至2-3cm时从培养瓶中取出，将其基部在500ppm的KIBA溶液中浸 泡4s，将苗木扦插于黄心土、炭化谷壳灰、细沙按体积比h 3: 1的基质中，30天后 生根率87%。
具体操作如下
(1) 将获得的无菌苗转移到继代培养基上进行增殖，培养基用300ml的广口 瓶分装，每瓶30ml，封口膜包扎，在121。C和1.1kg.cn^条件下，用高 压蒸汽灭菌锅灭菌20min。培养条件的筛选在培养温度为25±2°C，光 照1500 2000LX，每日光照时间为12h的培养室中培养。结果参见图
(2) 将增殖获得的无菌苗转移到壮苗培养基上进行壮苗，培养基用300ml的 广口瓶分装，每瓶30ml，封口膜包扎，在121'C和1.1kg.cmJ条件下， 用高压蒸汽灭菌锅灭菌20min。培养条件同(1)。结果参见图3。
(3) 将无菌苗从培养瓶中取出，洗净根部培养基，并将其基部在KIBA溶液 中浸泡，将苗木扦插于一次性塑料杯中，杯中基质由黄心土、炭化谷壳 灰、细沙按一定比例配制，杯口使用封口膜覆盖保湿，将杯子置于具间 歇喷雾设施的温室大棚中生根管理，温度保持20 3(TC，喷雾间歇时间 IO分钟，喷雾时间10秒，生根率87%。结果参见图4-5。
实施例2
从油茶健壮植株上剪取当年生新稍，取顶端4-6cm进行消毒处理；将初代获得的无 菌苗转移到WPM+BA7mg/L+IBA0.1mg/L+ZT0.05mg/L继代培养，增殖周期为40天， 增殖系数达7.0;将增殖过程中获得的无菌苗采用WPM+IBA1.0mg/L+GA20mg/L进行壮 苗，25天组培苗长至2-4cm时从培养瓶中取出，将其基部在8000ppm的KIBA溶液中 浸泡3s，将苗木扦插于黄心土、炭化谷壳灰、细沙按体积比1: 2: 1的基质中，40天 后生根率89%。
具体操作参见实施例1。
实施例3从油茶健壮植株上剪取当年生新稍，取顶端4-6cm进行消毒处理；将初代获得的无 菌苗转移到WPM+BA5mg/L+IBA2.0mg/L+ZT2.0mg/L继代培养，增殖周期为35天，增 殖系数达5.2;将增殖过程中获得的无菌苗采用WPM+IBA0.1mg/L+GA5mg/L进行壮苗， 23天组培苗长至2-3cm时从培养瓶中取出，将其基部在2000ppm的KIBA溶液中浸泡 4s，将苗木扦插于黄心土、炭化谷壳灰、细沙按体积比l: 3: l的基质中，30天后生根 率94%。
具体操作参见实施例1。
参考文献庄瑞林.中国油茶[M].北京中国林业出版社,1988陈永忠，杨小胡，彭邵锋.我国油茶良种选育研究现状及发展策略[J].林业科技开发，2005， 19 (4): l-4黎先胜.我国油茶资源的开发利用研究[J].湖南科技学院学报，2005 ,26 (11) :127— 129颜慕勤.油茶体细胞胚状体的发生[J].实验生物学报，1980,3 (3):343-347隆振雄.油茶幼胚离体培养初获完整植株[J].林业科技通讯,1981 (1) :12-16卢天玲.油茶未成熟子叶幼胚离体培养成苗的研究[J].实验生物学报,1982，5(4):393-403隆振雄.油茶花药培养获得绿芽点和根[J].林业科技通讯，1981 (5) :6-9毕方铖,谭晓风,张智俊,等.油茶离体培养诱导再生植株的研究[J].经济林研究,2004,22(2) :5-9 [9]张智俊,罗淑萍,李亚玲,等.油茶优良无性系子叶体细胞胚植株再生[J].植物学通报,2005，22(增 干U) :43-49吴正凯，郑晓峰.油茶组织培养技术研究[J].内蒙古农业科技2008(1): 63-6权利要求
1、一种油茶无性系组培繁殖方法，包括初代、继代获得组培苗、生根、移栽四个阶段，其特征在于获得生根材料后，将生根和移栽步骤合二为一，其中组培苗扦插生根以及生根基质的配制由黄心土、炭化谷壳灰、细沙按体积比1∶2～3∶1配制成生根基质；将基质装入扦插容器中，将组培苗扦插其中，并用透光薄膜封口。
2、 根据权利要求1所述的繁殖方法，其特征在于把组培苗从培养瓶中取出后，对组培苗进行消毒。
3、 根据权利要求2所述的繁殖方法，其特征在于是在0.1%瑞毒霉一锰锌溶液中浸泡2-4 分钟。
4、 根据权利要求2或3所述的繁殖方法，其特征在于对扦插组培苗的基质也进行消毒。
5、 根据权利要求1至3之一所述的繁殖方法，其特征在于还对组培苗进行生根材料的 激素预处理。
6、 根据权利要求5所述的繁殖方法，其特征在于将组培苗的基部在500 8000ppm的 KIBA溶液中浸泡3~4秒。
7、 根据权利要求1至3之一所述的繁殖方法，其特征在于将扦插组培苗的扦插容器置 于具间歇喷雾设施的温室大棚中管理，温度保持20 30度，30 40天后，组培苗生根形成完整植株。
8、 根据权利要求1至3之一所述的繁殖方法，其特征在于获得组培苗步骤中(1) 继代培养基及激素配比为WPM+BA 3-7mg/L+IBA 0.1-2mg/L+ZT 0.05-2mg/ L进行增殖，；(2) 壮苗培养基及激素配比为WPM+IBA0.1-lmg/L+GA5-20mg/L;诱导生根。
9、 组培苗扦插生根以及生根基质，其特征在于由黄心土、炭化谷壳灰、细沙按体积比1 : 2 3 : 1配制成。
全文摘要
本发明涉及一种油茶无性系组培快繁方法。本发明提供了一种油茶无性系组培快繁方法，包括初代、继代、生根、移栽四个阶段，其中组培苗扦插生根以及生根基质的配制由黄心土、炭化谷壳灰、细沙按体积比1∶2～3∶1配制成生根基质；将基质装入扦插容器中，将组培苗扦插其中，并用透光薄膜封口。将组培苗生根与移栽融为一体，30～40d后，组培苗生根形成完整植株，省去组培苗移栽的环节，生根率和成活率达87％以上。
文档编号A01G31/00GK101530063SQ200910043029
公开日2009年9月16日 申请日期2009年4月3日 优先权日2009年4月3日
发明者彭邵锋, 曾慧杰, 李永欣, 杨小胡, 瑞 王, 王晓明, 王湘南, 王玉娟, 能 蔡, 陈永忠 申请人:湖南省林业科学院