专利名称：促进甘薯种质资源间基因交流的方法
技术领域：
本发明涉及一种种子改良技术，具体是一种促进甘薯种质资源间基因交流的方法。
背景技术：
甘薯作为重要的饲料、加工、粮食及生物能源作物，并具有高产、稳产、适应性广、 抗病性强的特点，目前在我国仍然是广泛种植的主要作物之一。由于我国不是甘薯起源中 心，甘薯资源比较匮乏，优良新品种的选育要求有丰富的优异种质资源，种质的创新与利用 是育种的基础。目前甘薯种质创新主要采用有性杂交、遗传转化、体细胞杂交、诱变等；由于 甘薯通常情况下自交不亲和、部分种间杂交不亲和、甚至同群内品种间杂交不亲和和结实 率低、基因型依赖性等原因，一定程度上延缓了甘薯遗传改良。
发明内容
本发明提供一种促进甘薯种质资源间基因交流的方法，打破种间及不亲和群品种 间杂交障碍，具有操作方便快捷，为甘薯种质创新提供新的技术方法，加快甘薯遗传改良。本发明是通过如下技术方案实现的一种促进甘薯种质资源间基因交流的方法， 其特征是通过甘薯组织培养获得供体和受体植株；将供体和受体植株在离体、无菌条件 下，进行无性嫁接，促使甘薯品种间基因渗透，创新甘薯种质，为甘薯种间及不同不亲和群 品种间基因交流，进而创新及丰富甘薯种质资源。所述的通过甘薯组织培养获得供体和受体植株是通过茎尖分生组织培养基茎尖 分生组织培养，得到再生嫁接所需的供体和受体植株。所述的供体和受体植株在离体、无菌条件下进行无性嫁接，是将粗细程度比较相 近的供体和受体植株，在超净工作台即无菌条件下，切取接穗植株2-3节，切口呈契型；砧 木材料去所有叶片和萌发的腋芽，接口处从中间劈开，然后将接穗插入，用无菌Parafilm 对嫁接伤口进行包裹，完成嫁接的植株接种在MS固体培养基中，嫁接后20-30天，将嫁接成 活植株，自接口部位切开，去掉接口处0. 5-lcm茎段，将接穗和砧木分别接种在MS固体培养 基中。本发明的有益效果是本发明主要是利用供体和受体试管组培培养植株，在离体、 无菌条件下，通过无性嫁接，促进甘薯品种间基因渗透，有助于甘薯种间及不同不亲和群品 种间基因交流，丰富了甘薯种质创新方法，该方法操作方便、快捷，不受季节限制。
图1是嫁接后砧木和接穗的ISSR检测；图2是部分砧木和接穗ISSR检测，在图1中鉴定的基因渗透株系及部分非基因渗 透株系的ISSR重复鉴定，进一步证实了扩增的可靠性及济薯18和郑薯20间基因渗透的真 实性。
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图3是部分砧木和接穗RAPD检测，在图1中鉴定的基因渗透株系及部分非基因渗 透株系的RAPD (引物BA0023)扩增结果。图4是整个离体嫁接操作流程。
具体实施例方式下面结合实施例进一步说明本发明的方法和效果，但限制本发明的保护范围。实施例1本实验首先是通过茎尖分生组织培养，再生嫁接所需的济薯18和郑薯20。茎尖 分生组织培养基条件为ILMS基本培养基添加NAAO. lmg/L和6_BA2mg/L、蔗糖30g/L、琼脂 9g/L，灭菌前PH值为5. 8-6. 0.培养条件为光照2000Lux，温度25士2°C .选用济薯18和郑薯20茎尖分生组织培养再生植株，粗细程度比较相近或者砧木 较接穗粗些。在超净工作台(无菌条件下)，以郑薯20作为砧木，以济薯18作为接穗；切 取接穗植株2-3节，切口呈契型；砧木材料去所有叶片和萌发的腋芽，接口处从中间劈开， 深度约0. 5cm,然后将接穗插入，用无菌Parafilm对嫁接伤口进行包裹，完成嫁接的植株接 种在MS固体培养基中，所用的固体培养基是1LMS基本培养基+蔗糖15g+琼脂9g，PH值 5.8。嫁接后20-30天，将嫁接成活植株，自接口部位切开，去掉接口处0.5-lcm茎段(嫁接 部位)，将接穗和砧木分别接种在MS固体培养基中。嫁接具体操作流程见图4。图中，1 从中间劈开的砧木和契型接穗；2 接穗和砧木 的嫁接；3 接口的包裹；4 嫁接好的植株；5 嫁接植株的培养；6 嫁接成活的植株。对嫁接后的砧木和接穗叶片分别进行取样提取DNA，进行ISSR和RAPD扩增，鉴定 品种间基因渗透。选用的ISSR引物和RAPD引物个5条，具体见表1.表1 =ISSR引物和RAPD引物
权利要求
一种促进甘薯种质资源间基因交流的方法，其特征是通过甘薯组织培养获得供体和受体植株；将供体和受体植株在离体、无菌条件下，进行无性嫁接，促使甘薯品种间基因渗透，创新甘薯种质，为甘薯种间及不同不亲和群品种间基因交流，进而创新及丰富甘薯种质资源。
2.根据权利要求1所述的促进甘薯种质资源间基因交流的方法，其特征是所述的通 过甘薯组织培养获得供体和受体植株是通过茎尖分生组织培养基茎尖分生组织培养，再生 嫁接所需的供体和受体植株。
3.根据权利要求2所述的促进甘薯种质资源间基因交流的方法，其特征是茎尖分生 组织培养基条件为1LMS基本培养基添加NAAO. lmg/L、6-BA2mg/L、蔗糖30g/L和琼脂9g/ L，灭菌前PH值为5. 8-6. 0 ；培养条件为光照2000LUX，温度25士2°C。
4.根据权利要求1所述的促进甘薯种质资源间基因交流的方法，其特征是所述的供 体和受体植株在离体、无菌条件下进行无性嫁接，是将粗细程度相近的供体和受体植株，在 超净工作台即无菌条件下，切取接穗(受体)植株2-3节，切口呈契型；砧木(供体)材料去 所有叶片和萌发的腋芽，接口处从中间劈开，然后将接穗插入，用无菌Parafilm对嫁接伤 口进行包裹，完成嫁接的植株接种在MS固体培养基中，嫁接后20-30天，将嫁接成活植株， 自接口部位切开，去掉接口处0. 5-lcm茎段，将接穗和砧木分别接种在MS固体培养基中。
5.根据权利要求4所述的促进甘薯种质资源间基因交流的方法，其特征是接口处从 中间劈开的深度为0. 5cm。
6.根据权利要求4所述的促进甘薯种质资源间基因交流的方法，其特征是所述的MS 固体培养基是1LMS基本培养基+蔗糖15g+琼脂9g，PH值5. 8。
全文摘要
本发明公开了一种促进甘薯种质资源间基因交流的方法，属通过甘薯组织培养获得供体和受体植株；将供体和受体植株在离体、无菌条件下，进行无性嫁接，促使甘薯品种间基因渗透，创新甘薯种质，为甘薯种间及不同不亲和群品种间基因交流，进而创新及丰富甘薯种质资源。有益效果是本发明打破种间及不亲和群品种间杂交障碍，为甘薯种质创新提供了新的技术方法，加快甘薯遗传改良。该方法操作方便、快捷，不受季节限制。
文档编号A01H4/00GK101933458SQ20101022840
公开日2011年1月5日 申请日期2010年7月5日 优先权日2010年7月5日
发明者史新敏, 周志林, 唐君, 曹清河, 赵冬兰 申请人:江苏徐州甘薯研究中心