专利名称：一种抑制致病性大肠杆菌生长的复合微生态制剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于微生态制剂技术领域，具体涉及了一种抑制致病性大肠杆菌生长的复 合微生态制剂及其制备方法。
背景技术：
由于抗生素具有抗药性、耐药性、残留性、二重感染等特性，并导致最近全球“超级 病菌”的出现，因而各国都在考虑如何来限制抗生素的应用及寻找合适的抗生素替代产品。 欧盟已于2006年全面禁止抗生素作为动物的饲料添加剂，其他各国也在加大对抗生素的 限制。大量的研究证实，微生态制剂是抗生素的最佳替代品。微生态制剂是指一类通过调 节动物胃肠道微生态区系平衡，达到预防疾病、促进动物生长和提高饲料利用率的活性微 生物、培养物以及其它物质的统称。但是，目前现有技术中还没有一种能够对大肠杆菌具有 有效抑制作用的微生态制剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抑制致病性大肠杆菌生长的复合微生态制剂及其制 备方法。为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下一种抑制致病性大肠杆菌生长的复合微生态制剂，所述复合微生态制剂由下述 体积配比的至少两种原料菌制成枯草芽孢杆菌(Basillus subtilis)组合乳酪杆 菌(Lactobacillus casei)异常汉逊酵母(Hansenula anomala) = (0 3) (0 3) (0 3)，其中所述枯草芽孢杆菌组合为下述体积配比的至少两种枯草芽孢杆菌的 组合物发酵用枯草芽孢杆菌产蛋白酶枯草芽孢杆菌产淀粉酶枯草芽孢杆菌=(0 3) (0 3) (0 3)。较好地，所述复合微生态制剂由下述体积配比的原料菌制成枯草芽孢杆菌组 合乳酪杆菌异常汉逊酵母=0 1:1或1:3:0或2:2:3或2:3: 2，其中 所述枯草芽孢杆菌组合为下述体积比的两种枯草芽孢杆菌的组合物产蛋白酶枯草芽孢杆 菌产淀粉酶枯草芽孢杆菌=1 1。—种抑制致病性大肠杆菌生长的复合微生态制剂的制备方法首先将枯草芽孢杆 菌组合、乳酪杆菌、异常汉逊酵母分别扩大培养活化后，再按体积配比混合均勻即制成复合 微生态制剂。进一步，枯草芽孢杆菌组合接种枯草芽孢杆菌培养基进行扩大培养活化，乳酪杆 菌接种MRS培养基进行扩大培养活化，异常汉逊酵母接种YPD培养基进行扩大培养活化。枯 草芽孢杆菌培养基、MRS培养基、YPD培养基均为本领域公知常用培养，扩大培养活化亦为 本领域技术人员常规技术。本发明微生态制剂的使用方法将本发明微生态制剂，与载体(次粉)按体积/重量比(体积单位为ml，重量单位为g) 1 1的比例混合均勻，在45 50°C的条件下烘干， 然后按每吨全价料添加1 2公斤的添加量添加到畜禽日粮中。本发明的有益效果本发明不同配比的复合微生态制剂对大肠杆菌均有抑制作用，并且都要大于金 霉素的抑制作用，尤其当枯草芽孢杆菌组合为产蛋白酶枯草芽孢杆菌产淀粉酶枯草芽 孢杆菌=1 1体积比的组合物，枯草芽孢杆菌组合乳酪杆菌异常汉逊酵母分别以 0 1 1,1 3 0,2 2 3,2 3 2的体积比复合成微生态制剂时，对大肠杆菌有 很强的抑制作用，使得大肠杆菌在48小时内就不再生长。
具体实施例方式以下结合具体实施措施对本发明的技术方案做进一地详细介绍，但本发明的保护 范围并不局限于此发酵用枯草芽孢杆菌、产蛋白酶枯草芽孢杆菌、产淀粉酶枯草芽孢杆菌、乳酪杆 菌、异常汉逊酵母，均是从北京的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC) 购买，并由河南农业大学饲料生物技术研究室保藏和提供。实施例1一种抑制致病性大肠杆菌生长的复合微生态制剂，由下述原料菌制成乳酪杆菌 30ml、异常汉逊酵母30ml。制备方法乳酪杆菌的培养MRS培养基组成为胰蛋白胨10g、牛肉蛋白胨10g、酵母浸出物 5g、葡萄糖20g、吐温(80) 1ml、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、柠檬酸钠2g、硫酸镁200mg、硫酸 锰50mg，用蒸馏水定容至1L，pH为6. 2 6. 6，在0. 15MPa高压下蒸汽灭菌20min，接种乳 酪杆菌后，37 °C静止培养24h。异常汉逊酵母的培养YPD培养基组成为酵母浸提物10g、蛋白胨20g、葡萄糖 20g、用蒸馏水定容至1L、pH为7. 0 7. 2，在0. 15MPa高压下蒸汽灭菌20min，接种异常汉 逊酵母后，30°C振荡(150转/分)培养24h。按比例取上述扩大培养后的乳酪杆菌、异常汉逊酵母，混合均勻即制成复合微生 态制剂。实施例2一种抑制致病性大肠杆菌生长的复合微生态制剂，由下述原料菌制成枯草芽孢 杆菌组合10ml、乳酪杆菌30ml，其中所述枯草芽孢杆菌组合为下述枯草芽孢杆菌的组合 物产蛋白酶枯草芽孢杆菌5ml、产淀粉酶枯草芽孢杆菌5ml。制备方法枯草芽孢杆菌组合的培养培养基组成为20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化钠、 0. 5g牛肉膏，用蒸馏水定容至1L，pH为7. 0 7. 2，在0. 15MPa高压下蒸汽灭菌20min ；分别 接种产蛋白酶枯草芽孢杆菌和产淀粉酶枯草芽孢杆菌后，37°C振荡(150转/分)培养24h。乳酪杆菌的培养MRS培养基组成为胰蛋白胨10g、牛肉蛋白胨10g、酵母浸出物 5g、葡萄糖20g、吐温(80) 1ml、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、柠檬酸钠2g、硫酸镁200mg、硫酸 锰50mg，用蒸馏水定容至1L，pH为6. 2 6. 6，在0. 15MPa高压下蒸汽灭菌20min，接种乳酪杆菌后，37 °C静止培养24h。按比例取上述扩大培养后的产蛋白酶枯草芽孢杆菌、产淀粉酶枯草芽孢杆菌、乳 酪杆菌，混合均勻即制成复合微生态制剂。实施例3—种抑制致病性大肠杆菌生长的复合微生态制剂，由下述原料菌制成枯草芽孢 杆菌组合20ml、乳酪杆菌20ml、异常汉逊酵母30ml，其中所述枯草芽孢杆菌组合为下述枯 草芽孢杆菌的组合物产蛋白酶枯草芽孢杆菌10ml、产淀粉酶枯草芽孢杆菌10ml。制备方法枯草芽孢杆菌组合的培养培养基组成为20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化钠、 0. 5g牛肉膏，用蒸馏水定容至1L，pH为7. 0 7. 2，在0. 15MPa高压下蒸汽灭菌20min ；分别 接种产蛋白酶枯草芽孢杆菌和产淀粉酶枯草芽孢杆菌后，37°C振荡(150转/分)培养24h。乳酪杆菌的培养MRS培养基组成为胰蛋白胨10g、牛肉蛋白胨10g、酵母浸出物 5g、葡萄糖20g、吐温(80) 1ml、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、柠檬酸钠2g、硫酸镁200mg、硫酸 锰50mg，用蒸馏水定容至1L，pH为6. 2 6. 6，在0. 15MPa高压下蒸汽灭菌20min，接种乳 酪杆菌后，37 °C静止培养24h。异常汉逊酵母的培养YPD培养基组成为酵母浸提物10g、蛋白胨20g、葡萄糖 20g、用蒸馏水定容至1L、pH为7. 0 7. 2，在0. 15MPa高压下蒸汽灭菌20min，接种异常汉 逊酵母后，30°C振荡(150转/分)培养24h。按比例取上述扩大培养后的产蛋白酶枯草芽孢杆菌、产淀粉酶枯草芽孢杆菌、乳 酪杆菌、异常汉逊酵母，混合均勻即制成复合微生态制剂。实施例4一种抑制致病性大肠杆菌生长的复合微生态制剂，由下述原料菌制成枯草芽孢 杆菌组合20ml、乳酪杆菌30ml、异常汉逊酵母20ml，其中所述枯草芽孢杆菌组合为下述枯 草芽孢杆菌的组合物产蛋白酶枯草芽孢杆菌10ml、产淀粉酶枯草芽孢杆菌10ml。制备方法枯草芽孢杆菌组合的培养培养基组成为20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化钠、 0. 5g牛肉膏，用蒸馏水定容至1L，pH为7. 0 7. 2，在0. 15MPa高压下蒸汽灭菌20min ；分别 接种产蛋白酶枯草芽孢杆菌、产淀粉酶枯草芽孢杆菌后，37°C振荡(150转/分)培养24h。乳酪杆菌的培养MRS培养基组成为胰蛋白胨10g、牛肉蛋白胨10g、酵母浸出物 5g、葡萄糖20g、吐温(80) 1ml、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、柠檬酸钠2g、硫酸镁200mg、硫酸 锰50mg，用蒸馏水定容至1L，pH为6. 2 6. 6，在0. 15MPa高压下蒸汽灭菌20min，接种乳 酪杆菌后，37 °C静止培养24h。异常汉逊酵母的培养YPD培养基组成为酵母浸提物10g、蛋白胨20g、葡萄糖 20g、用蒸馏水定容至1L、pH为7. 0 7. 2，在0. 15MPa高压下蒸汽灭菌20min，接种异常汉 逊酵母后，30°C振荡(150转/分)培养24h。按比例取上述扩大培养后的产蛋白酶枯草芽孢杆菌、产淀粉酶枯草芽孢杆菌、乳 酪杆菌、异常汉逊酵母，混合均勻即制成复合微生态制剂。本发明复合微生态制剂对大肠杆菌的抑制作用1.材料和方法
1. 1菌种发酵用枯草芽孢杆菌、产蛋白酶枯草芽孢杆菌、产淀粉酶枯草芽孢杆 菌、乳酪杆酸菌、异常汉逊酵母、猪致病性大肠杆菌，均是从北京的中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心(CGMCC)购买，并由河南农业大学饲料生物技术研究室保藏和提{共。1. 2试验设计见表1和表2。表1三种枯草芽孢杆菌不同的添加比例对大肠杆菌抑制作用的试验设计
权利要求
1.一种抑制致病性大肠杆菌生长的复合微生态制剂，其特征在于所述复合微生态制剂 由下述体积配比的至少两种原料菌制成枯草芽孢杆菌组合乳酪杆菌异常汉逊酵母= (0 3) (0 3) (0 3)，其中所述枯草芽孢杆菌组合为下述体积配比的至少两种枯 草芽孢杆菌的组合物发酵用枯草芽孢杆菌产蛋白酶枯草芽孢杆菌产淀粉酶枯草芽孢 杆菌=(0 3) (0 3) (0 3)。
2.如权利要求1所述的抑制致病性大肠杆菌生长的复合微生态制剂，其特征在于所 述复合微生态制剂由下述体积配比的原料菌制成枯草芽孢杆菌组合乳酪杆菌异常汉 逊酵母=0 :1:1或1:3:0或2:2:3或2:3: 2，其中所述枯草芽孢杆菌组合 为下述体积比的两种枯草芽孢杆菌的组合物产蛋白酶枯草芽孢杆菌产淀粉酶枯草芽孢 杆菌=1:1。
3.一种制备如权利要求1或2所述的抑制致病性大肠杆菌生长的复合微生态制剂的方 法，其特征在于首先将枯草芽孢杆菌组合、乳酪杆菌、异常汉逊酵母分别扩大培养活化后， 再按体积配比混合均勻即制成复合微生态制剂。
4.如权利要求3所述的抑制致病性大肠杆菌生长的复合微生态制剂的制备方法，其 特征在于枯草芽孢杆菌组合接种枯草芽孢杆菌培养基进行扩大培养活化，乳酪杆菌接种 MRS培养基进行扩大培养活化，异常汉逊酵母接种YPD培养基进行扩大培养活化。
全文摘要
本发明属于微生态制剂技术领域，公开了一种抑制致病性大肠杆菌生长的复合微生态制剂及其制备方法。由下述体积配比的至少两种原料菌制成枯草芽孢杆菌组合∶乳酪杆菌∶异常汉逊酵母＝(0～3)∶(0～3)∶(0～3)，其中所述枯草芽孢杆菌组合为下述体积配比的至少两种枯草芽孢杆菌的组合物发酵用枯草芽孢杆菌∶产蛋白酶枯草芽孢杆菌∶产淀粉酶枯草芽孢杆菌＝(0～3)∶(0～3)∶(0～3)。本发明不同配比复合微生态制剂对大肠杆菌均有抑制作用，且都要大于金霉素的抑制作用，最佳配比枯草芽孢杆菌组合为产蛋白酶枯草芽孢杆菌∶产淀粉酶枯草芽孢杆菌＝1∶1，枯草芽孢杆菌组合∶乳酪杆菌∶异常汉逊酵母分别以0∶1∶1，1∶3∶0，2∶2∶3，2∶3∶2。
文档编号A23K1/17GK101999531SQ20101028746
公开日2011年4月6日 申请日期2010年9月20日 优先权日2010年9月20日
发明者刘俊熙, 尹清强, 常娟, 王潇, 范国歌, 郑秋红 申请人:河南农业大学, 河南普爱饲料股份有限公司