专利名称：提高昆虫病原线虫耐寒能力的方法
技术领域：
本发明涉及一种提高病原线虫耐寒能力的方法。
背景技术：
昆虫病原线虫是害虫的重要天敌，具有广谱、高效、对人畜和环境安全等优点，这种新型生物杀虫剂有广阔的应用前景。目前它的繁殖和应用技术很成熟，但引进的大多数昆虫病原线虫产品不适应东北地区田间低温环境，是其推广应用的主要问题。在中国的东北地区，春秋季昼夜温差大，夜间经常降至o°c以下，白天升至十几度，不耐低温的病原线虫存活率降低，进而致病力下降。我国北方的韭菜根蛆每年4、5月份是为害盛期，此时地温较 低，不耐低温的线虫因田间环境温度低使其存活率下降，导致防治效果差。
发明内容
本发明为了解决昆虫病原线虫不适应田间低温环境的技术问题，提供了一种提高昆虫病原线虫耐寒能力的方法。提高昆虫病原线虫耐寒能力的方法按照以下步骤进行一、将7龄黄粉虫幼虫放入8°C 12°C的冰箱中储存6 8天，然后用昆虫病原线虫侵染7龄黄粉虫幼虫，得到受昆虫病原线虫感染的7龄黄粉虫幼虫；ニ、将受昆虫病原线虫感染的7龄黄粉虫幼虫采用White trap培养法进行繁殖，即得提高了耐寒能力的昆虫病原线虫。步骤一中所述昆虫病原线虫是小卷蛾斯氏线虫或芫菁夜蛾斯氏线虫。步骤ニ中所述White trap培养法如下—、在直径为60_的塑料培养皿盖中垫有相同大小的双层中速定性滤纸,姆皿盖中放30头受昆虫病原线虫感染的7龄黄粉虫幼虫，然后倒扣皿底；ニ、用O. 5ml灭菌水浸润培养皿盖中的双层中速定性滤纸,在25°C恒温培养至受昆虫病原线虫感染的7龄黄粉虫幼虫全部死亡后，移去直径为60mm培养皿底，并将直径为60mm培养皿盖置于盛有IOml灭菌水、直径为90mm的玻璃皿内，然后在25°C继续恒温20天，收集直径为90_的玻璃皿内的水，即得提高了耐寒能力的昆虫病原线虫。本发明用物理方法(在8°C 12°C冰箱)处理寄主昆虫，通过低温驯化的寄主昆虫，保护对低温敏感的昆虫病原线虫，即提高其低温存活率。使昆虫病原线虫在_20°C的冰箱中30分钟的存活率从O %提高到12% 15%，进而提高了昆虫病原线虫的耐寒能力。
具体实施例方式本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式
，还包括各具体实施方式
间的任意组合。
具体实施方式
一本实施方式提高昆虫病原线虫耐寒能力的方法按照以下步骤进行
一、将7龄黄粉虫幼虫放入8°C 12°C的冰箱中储存6 8天，然后用昆虫病原线虫侵染7龄黄粉虫幼虫，得到受昆虫病原线虫感染的7龄黄粉虫幼虫；ニ、将受昆虫病原线虫感染的7龄黄粉虫幼虫采用White trap培养法进行繁殖，即得提高了耐寒能力的昆虫病原线虫。
具体实施方式
ニ 本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中所述昆虫病原线虫是小卷蛾斯氏线虫或芫菁夜蛾斯氏线虫。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一或ニ不同的是步骤ニ中所述Whitetrap培养法如下—、在直径为60_的塑料培养皿盖中垫有相同大小的双层中速定性滤纸,姆皿盖中放30头受昆虫病原线虫感染的7龄黄粉虫幼虫，然后倒扣皿底；ニ、用O. 5ml灭菌水浸润培养皿盖中的双层中速定性滤纸,在25°C恒温培养至受昆虫病原线虫感染的7龄黄粉虫幼虫全部死亡后，移去直径为60mm培养皿底，并将直径为60mm培养皿盖置于盛有IOml灭菌水、直径为90mm的玻璃皿内，然后在25°C继续恒温20天，收集直径为90mm的玻璃皿内的水，即得提高了耐寒能力的昆虫病原线虫。其它与具体实施方式
一或二相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一至三之一不同的是步骤一中将7龄黄粉虫幼虫放入9°C 11 °C的冰箱中储存6 8天。其它与具体实施方式
一至三之一相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一至四之一不同的是步骤一中将7龄黄粉虫幼虫放入10°c的冰箱中储存7天。其它与具体实施方式
一至四之一相同。采用下述试验验证本发明效果实验ー一、将7龄黄粉虫幼虫放入10°C的冰箱中储存7天，然后用小卷蛾斯氏线虫侵染7龄黄粉虫幼虫，得到受小卷蛾斯氏线虫感染的7龄黄粉虫幼虫；ニ、在直径为60_的塑料培养皿盖中垫有相同大小的双层中速定性滤纸，每皿盖中放30头受小卷蛾斯氏线虫感染的7龄黄粉虫幼虫，然后倒扣皿底，用O. 5ml灭菌水浸润培养皿盖中的双层中速定性滤纸，在25°C恒温培养26天，收集从黄粉虫体内繁殖出的小卷蛾斯氏线虫；三、取500条繁殖后的小卷蛾斯氏线虫和500条未经低温处理的黄粉虫中繁殖出的小卷蛾斯氏线虫分别放入含水量为5%、过20目筛的5g细沙中，然后将细沙放入-20°C冰箱中30分钟,取出后置于室温,24小时后,加IOml水,得悬浮液。将本实验所得悬浮液倒入有格的培养皿中，显微镜下调查线虫存活率。调查结果显示，本实验方法繁殖出的小卷蛾斯氏线虫存活率为12. I %。未经低温处理的黄粉虫中繁殖出的小卷蛾斯氏线虫存活率为0%。实验ニ一、将7龄黄粉虫幼虫放入10°C的冰箱中储存7天，然后用芫菁夜蛾斯氏线虫侵染7龄黄粉虫幼虫，得到受芫菁夜蛾斯氏线虫感染的7龄黄粉虫幼虫；ニ、在直径为60mm的塑料培养皿盖中垫有相同大小的双层中速定性滤纸，每皿盖 中放30头受芫菁夜蛾斯氏线虫感染的7龄黄粉虫幼虫，然后倒扣皿底，用O. 5ml灭菌水浸润培养皿盖中的双层中速定性滤纸，在25°C恒温培养24天，收集从黄粉虫体内繁殖出的芫菁夜蛾斯氏线虫；三、取500条繁殖后的芫菁夜蛾斯氏线虫和500条未经低温处理的黄粉虫中繁殖出的芫菁夜蛾斯氏线虫分别放入含水量为5%、过20目筛的5g细沙中，然后将细沙放入-20°C冰箱中30分钟，取出后置于室温，24小时后，加IOml水，得悬浮液。 将本实验所得悬浮液倒入有格的培养皿中，显微镜下调查线虫存活率。调查结果显示，本实验方法繁殖出的芫菁夜蛾斯氏线虫存活率为14.7%。未经低温处理的黄粉虫中繁殖出的芫菁夜蛾斯氏线虫存活率为O%。
权利要求
1.提高昆虫病原线虫耐寒能力的方法，其特征在于提高昆虫病原线虫耐寒能力的方法按照以下步骤进行 一、将7龄黄粉虫幼虫放入8°C 12°c的冰箱中储存6 8天，然后用昆虫病原线虫侵染7龄黄粉虫幼虫，得到受昆虫病原线虫感染的7龄黄粉虫幼虫； ニ、将受昆虫病原线虫感染的7龄黄粉虫幼虫采用White trap培养法进行繁殖，即得提高了耐寒能力的昆虫病原线虫。
2.根据权利要求I所述提高昆虫病原线虫耐寒能力的方法，其特征在于步骤一中所述昆虫病原线虫是小卷蛾斯氏线虫或芫菁夜蛾斯氏线虫。
3.根据权利要求I所述提高昆虫病原线虫耐寒能力的方法，其特征在于步骤ニ中所述White trap培养法如下 一、在直径为60_的塑料培养皿盖中垫有相同大小的双层中速定性滤纸，每皿盖中放30头受昆虫病原线虫感染的7龄黄粉虫幼虫，然后倒扣皿底； ニ、用O. 5ml灭菌水浸润培养皿盖中的双层中速定性滤纸，在25°C恒温培养至受昆虫病原线虫感染的7龄黄粉虫幼虫全部死亡后，移去直径为60mm培养皿底，并将直径为60mm培养皿盖置于盛有IOml灭菌水、直径为90mm的玻璃皿内，然后在25°C继续恒温20天，收集直径为90_的玻璃皿内的水，即得提高了耐寒能力的昆虫病原线虫。
4.根据权利要求1、2或3所述提高昆虫病原线虫耐寒能力的方法，其特征在于步骤一中将7龄黄粉虫幼虫放入9°C 11 °C的冰箱中储存6 8天。
5.根据权利要求1、2或3所述提高昆虫病原线虫耐寒能力的方法，其特征在于步骤一中将7龄黄粉虫幼虫放入10°C的冰箱中储存7天。
全文摘要
提高昆虫病原线虫耐寒能力的方法，它涉及一种提高病原线虫耐寒能力的方法。本发明要解决引进的昆虫病原线虫不适应田间低温环境的技术问题。本方法如下一、将7龄黄粉虫幼虫放入8℃～12℃的冰箱中储存6～8天，然后用昆虫病原线虫侵染7龄黄粉虫幼虫，得到受昆虫病原线虫感染的7龄黄粉虫幼虫；二、将受昆虫病原线虫感染的7龄黄粉虫幼虫采用White trap培养法进行繁殖，即得提高了耐寒能力的昆虫病原线虫。本发明方法得到的昆虫病原线虫在-20℃的冰箱中30分钟的存活率从0％提高到12％～15％。
文档编号A01K67/033GK102657142SQ201210168059
公开日2012年9月12日 申请日期2012年5月28日 优先权日2012年5月28日
发明者李春杰 申请人:中国科学院东北地理与农业生态研究所