专利名称：一种烟草青枯病田间早期快速检测方法
技术领域：
本发明涉及作物病害防治技术领域，具体是一种烟草青枯病田间早期快速检测方法。
背景技术：
烟草青枯病又称“烟瘟”，是一种典型的烟草维管束病害，近年来在我国主要产烟区呈加重发生趋势，发病率一般在10% 25%，部分烟区高达50% 80%，甚至绝收，对烟叶产量和质量造成无法挽回的巨大损失，是制约我国烟草生产最具威胁的毁灭性病害之一。
烟草青枯病是一种细菌性病害，遇高温多雨天气易暴发流行。该病由青枯劳尔氏菌iRalstonia ■so/aflacea/ )侵染烟株维管束引起全株性系统症状,从苗期到成株期均可侵染发病。烟草青枯病发病早期，在晴天中午可见烟株一侧I片叶凋萎下垂，萎蔫一侧的茎上常有褪绿条斑，因萎蔫迅速叶片仍表现为绿色，故称之为“青枯”。而烟草黑胫病的发病条件及为害症状与烟草青枯病十分相似，黑胫病作为一种真菌性的高温高湿病害，同样呈现为系统性萎蔫，特别是黑胫病田间早期症状也表现为烟株一侧I片叶首先萎蔫、同侧茎杆隐约可见褪绿条斑，这使得青枯病与黑胫病在田间早期检测上极易造成混淆、引起误诊，以至于错过最佳防治时期，为病害准确、及时、有效地防治造成很大困难，这也是烟草青枯病很难防治的原因之一。对于烟草青枯病的检测，传统上采取组织分离法，通过柯赫氏法则进行致病力测定加以明确，也可利用血清学方法如酶联免疫吸附法(ELISA)、间接免疫荧光染色法(WAS)，以及应用分子生物学方法如核酸分子杂交、PCR扩增等技术进行特异性检测等。但是这些方法均不同程度需要借助实验室条件和专业技术人员才能完成，而且其操作流程较为复杂、易遭受外界因素的干扰、运行成本也极高。鉴于此，在生产中有必要建立简便有效、操作性强的烟草青枯病田间早期检测方法，以满足基层技术人员及田间工作实际的需要，为烟草青枯病防治工作提供准确及时的依据。
发明内容
本发明的目的是提供一种烟草青枯病田间早期快速检测方法，该方法基于烟草青枯病是一种细菌性病害，对早期出现的一侧萎蔫叶片叶脉或发生变黑的侧根维管束，通过解剖可观察到烟草黑胫病所没有的、特征性的菌溢现象，从而早期快速准确地检测青枯病。本发明所提供的一种烟草青枯病田间早期快速检测方法，通过如下步骤实现
(1)选取烟田田间具有早期症状的疑似病株，表现为烟株一侧I 2片叶片萎蔫，萎蔫叶片的叶脉横断面变成褐色或黑色，根系一侧1-2条侧根有变黑现象；
(2)沿病健交界处剪下萎蔫叶片，保持病健交界处剪刀切口不变，将萎蔫叶片主叶脉剪成长100mm、宽15mm的条状，或沿黑变侧根病健交界处剪取长IOOmm变黑的侧根；
(3)取常规玻璃试管，加水至4/5试管体积，将剪取的条状主叶脉或变黑的侧根放入盛水玻璃试管中，静置3_5min ；(4)观察主叶脉或侧根维管束的剪刀切口处，是否有乳白色浑浊的液体溢出，即是否有细菌性病害典型的菌溢现象，若出现此现象，则为烟草青枯病。上述方法步骤(3)的常规玻璃试管，长度150mm、管口直径25mm。
本发明的优点是应用该方法田间烟草青枯病早期检测率明显提高，准确率可达95%以上，可及时有效地指导田间病害防治，方法简便明了，易掌握，具有广泛的推广应用价值。
具体实施例方式在重庆主要产烟区6-7月生产季节，疑似青枯病、黑胫病症状陆续开始出现，烟株表现为一侧叶片萎蔫或一侧根系变黑，而且此早期症状集中在田间显现，极易引起混淆和误检，为有的放矢开展病害防治带来巨大困难。从2008-2011年，经过四年的多点试验和实践测试，按照本发明方法进行操作，同时将所取对应样本通过实验室分离检测加以印证，结果表明，选取一侧萎蔫叶片主叶脉作诊断材料和依据，其准确率平均在95%以上，选取一侧变黑根系作诊断材料和依据，其准确率平均在97%以上。在田间早期准确检测的基础上，迅速采取措施，对症下药使用72%农用链霉素开展烟草青枯病防治工作，及时有效地阻止了青枯病在田间的扩散蔓延，病害发生率与烟农常规对照相比下降了 85%，病情指数下降了 80%，单位面积烟叶产量接近健康无病烟田，其产量水平达到健康烟田的90%以上，烟田其经济效益显著提高。
权利要求
1.一种烟草青枯病田间早期快速检测方法，其特征在于通过如下步骤实现 (1)选取烟田田间具有早期症状的疑似病株，表现为烟株ー侧I 2片叶片萎蔫，萎蔫叶片的叶脉横断面变成褐色或黒色，根系ー侧1-2条侧根有变黑现象； (2)沿病健交界处剪下萎蔫叶片，保持病健交界处剪刀切ロ不变，将萎蔫叶片主叶脉剪成长100mm、宽15mm的条状，或沿黑变侧根病健交界处剪取长IOOmm变黑的侧根； (3)取常规玻璃试管，加水至4/5试管体积，将剪取的条状主叶脉或变黑的侧根放入盛水玻璃试管中，静置3_5min ； (4)观察主叶脉或侧根維管束的剪刀切ロ处，是否有乳白色浑浊的液体溢出，即是否有细菌性病害典型的菌溢现象，若出现此现象，则为烟草青枯病。
全文摘要
一种烟草青枯病田间早期快速检测方法，基于烟草青枯病是一种细菌性病害，对早期出现的一侧萎蔫叶片叶脉或发生变黑的侧根维管束，通过解剖可观察到烟草黑胫病所没有的、特征性的菌溢现象，从而早期快速准确地检测青枯病。应用该方法田间烟草青枯病早期检测率明显提高，准确率可达95%以上，可及时有效地指导田间病害防治，方法简便明了，易掌握，具有广泛的推广应用价值。
文档编号A01G7/00GK102668901SQ20121017828
公开日2012年9月19日 申请日期2012年6月1日 优先权日2012年6月1日
发明者肖崇刚, 陈国康, 马冠华 申请人:西南大学