一种用于防治烟草青枯病菌的植物源提取物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物源农药技术领域，具体涉及一种用于防治烟草青枯病菌的植物源 提取物。 技术背景
[0002] 养菜（Capsella bursa-pastoris)属十字花科养菜属草本植物，同时，养菜还可入 药，也是药食同源植物。荠菜主要分布于亚热带和温带地区，我国从南到北均可生长，尤其 在沟边、田埂、路边等处十分常见。
[0003] 荠菜富含有机酸、延胡索酸、多肽、丹宁、类黄酮、生物碱、氨基酸、麦角克碱等多种 活性成分，具有镇痛、解痉、明目、强筋健骨、降压、消炎、抗菌、抗癌、抗心律失常、抗脂质过 氧化、抗病毒、防衰老等预防疾病和治疗疾病的功效。尽管荠菜医用方面的研宄较多，但利 用荠菜在防治植物病原细菌病害方面的研宄报道鲜见。因此，本发明以荠菜对植物病原细 菌是否具有抑制作用这一科学问题，以烟草青枯病菌为指示菌，探索荠菜抑菌物的提取方 法，明确不同部位产抑菌物质的量、提取效率以及MIC值，评估荠菜的开发潜力，旨在为今 后研制植物源农药提供理论依据和实践基础。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是：针对荠菜防治植物病害技术上的空白，提供了一 种用于防治烟草青枯病菌的植物源提取物。
[0005] 为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种用于防治烟草青枯病 菌的植物源提取物，其特点是，所述植物源提取物为荠菜提取物。
[0006] 上述荠菜提取物为荠菜的乙酸乙酯提取物或水提取物。
[0007] 上述荠菜提取物是取新鲜荠菜洗净，晒干至含水量为0. 5-3. 5%，粉碎，用乙酸乙 酯或无菌水对荠菜粉进行提取，所得滤液入旋转蒸发仪浓缩至膏状得到。其中，用乙酸乙酯 或无菌水对荠菜粉进行提取是指按Ig荠菜粉加20-25mL乙酸乙酯或无菌水的比例，于荠菜 粉中加入乙酸乙酯或无菌水，于25-26°C以80-120r/min震荡24-48h，过滤，收集滤液，滤渣 重复提取1次，合并两次滤液。所指的粉碎是以8000-12000r/min的转速粉碎至100-120 目细粉。所述的旋转蒸发条件：压力为0.09-0.1 MPa，水浴温度为60°C，冷凝温度为6-8°C， 转速为 80-110r/min。
[0008] 本发明的荠菜提取物（乙酸乙酯提取物或水提取物）对烟草青枯病菌具有抑制作 用，表明荠菜具有防治植物病害的新功能；同时本发明的实现，为开发利用荠菜天然活性物 质以及研宄与开发制备新生物农药提供了科学依据。
【附图说明】
[0009] 图1是荠菜的乙酸乙酯提取物对烟草青枯病菌的抑制作用。
[0010] 其中：A代表荠菜的乙酸乙酯提取物；B代表乙酸乙酯。
[0011] 图2是荠菜的水提取物对烟草青枯病菌的抑制作用。
[0012] 其中：A代表荠菜的水提取物；B代表无菌水。
【具体实施方式】
[0013] 供试植物和菌株
[0014] 新鲜荠菜来自湖南农业大学浏阳科研基地；烟草青枯病菌（Ralstonia solanacearum)，由湖南农业大学生物安全检测中心II提供。
[0015] 烟草青枯病菌菌种的活化：采用接种环刮取3环菌种接入牛肉膏蛋白胨斜面培养 基（NA)，26-28°C下连续培养24-48h，待菌落长出后，制成浓度I. lX108CFU/mL的菌悬液 (以下简称菌悬液），备用。
[0016] 供试培养基
[0017] 牛肉膏蛋白胨培养基（NA):牛肉膏5g、蛋白胨8g、氯化钠 5g、琼脂20g、蒸馏水 1000 mL, pH 7. 0-7. 2 ；
[0018] 实施例1荠菜乙酸乙酯提取物和水提取物对烟草青枯病菌的抑制作用
[0019] 取新鲜荠菜（包括根、茎、叶、籽）洗净，晒干至含水量为2. 5%，以8000-12000r/ min的转速粉碎至100-120目细粉。称取定量的荠菜干粉样品，加入500mL乙酸乙酯，于 25-26°C以lOOr/min震荡36h，过滤，收集滤液，滤渣重复提取1次，合并两次滤液，将滤液置 于压力为0. 09-0.1 Mpa，水浴温度为60°C，冷凝温度为6°C，转速为80r/min的旋转蒸发仪中 浓缩至膏状，得乙酸乙酯提取物。用乙酸乙酯定容乙酸乙酯提取物，4°C保存，备用。
[0020] 照上述方法，以无菌水为提取溶剂制备荠菜的水提取物，水提取物采用无菌水定 容。
[0021] 采用抑菌圈法测定荠菜提取物对烟草青枯病菌的抑菌效果，灭菌的NA培养基倒 入培养皿中待其冷却，移液枪移取200 μ L菌悬液，涂布均匀，打孔器（7_)在培养基上打 孔，注入100 μ L乙酸乙酯或无菌水提取物，以乙酸乙酯或无菌水为对照，重复3次，将平皿 置于分别置于26-28?细菌培养箱培养24h，观察结果，十字交叉法测量抑菌圈直径，计算 抑制率，结果见下表1。
[0022]
【主权项】
1. 一种用于防治烟草青枯病菌的植物源提取物，其特征在于，所述植物源提取物为荠 菜提取物。
2. 如权利要求1所述的一种用于防治烟草青枯病菌的植物源提取物，其特征在于，所 述荠菜提取物为荠菜的乙酸乙酯提取物或水提取物。
3. 如权利要求2所述的一种用于防治烟草青枯病菌的植物源提取物，其特征在于，所 述荠菜提取物是取新鲜荠菜洗净，晒干至含水量为〇. 5-3. 5 %，粉碎，用乙酸乙酯或无菌水 对荠菜粉进行提取，所得滤液入旋转蒸发仪浓缩至膏状得到。
4. 如权利要求3所述的一种用于防治烟草青枯病菌的植物源提取物，其特征在于，所 述用乙酸乙酯或无菌水对荠菜粉进行提取是指按1克荠菜粉加20-25mL乙酸乙酯或无菌水 的比例，于荠菜粉中加入乙酸乙酯或无菌水，于25-26°C以80-120r/min震荡24-48h，过滤， 收集滤液，滤渣重复提取1次，合并两次滤液。
5. 如权利要求3所述的一种用于防治烟草青枯病菌的植物源提取物，其特征在于，所 述粉碎是以8000-12000r/min的转速粉碎至100-120目细粉。
6. 如权利要求1-5中任一项所述的植物源提取物在制备防治烟草青枯病生物农药中 的应用。
【专利摘要】一种用于防治烟草青枯病菌的植物源提取物，该提取物为干荠菜的乙酸乙酯提取物或水提取物，该荠菜乙酸乙酯提取物和水提取物对烟草青枯病菌均具有抑制作用，其中乙酸乙酯提取物的抑制效果最好，其抑制率为56.9％，采用乙酸乙酯分别提取荠菜根、茎、籽、叶中的活性物，发现根和叶的抑菌效果最强，籽和茎提取物的抑菌效果较弱；同时，本发明的研究结果还显示，干荠菜提取物的抑菌效果明显高于新鲜荠菜提取物。本发明的荠菜提取物对烟草青枯病菌具有的抑制作用表明荠菜具有防治植物病害的新功能，为开发利用荠菜天然活性物质以及研究与开发新的生物农药提供了科学依据。
【IPC分类】A01P1-00, A01N65-08
【公开号】CN104782669
【申请号】CN201510210103
【发明人】张亚, 刘双清, 廖晓兰, 谢燕
【申请人】湖南农业大学
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2015年4月29日