专利名称：一种水产用预混料及其在饲料添加剂中的应用与其配合料的制作方法
技术领域：
本发明涉及饲用微生态技术领域，尤其是一种水产用预混料及其在制备水产饲料添加剂中的应用与其配合料。
背景技术：
随着水产养殖节约化程度不断提高，养殖水体的理化环境和生态环境日趋恶化；同时，人类生活污水、各种工业废水、农业退水等超量排放，均加剧了养殖水体质量的下降；这些问题造成水产养殖病害日趋严重。如鱼类肝胆综合症是近年来频繁发生的鱼病之一，危害鲤、鲫、草鱼、团头鲂、青鱼、罗非鱼等多种养殖鱼类，如不及时治疗，死亡率可达 60% -90%，给养殖户造成了严重的经济损失。目前，为了防止鱼类疾病的发生，主要采用中草药、化药进行防治或鱼料中添加益生菌，中草药防治其优点是使用安全、无污染、无残留，不易产生耐药性，缺点是见效慢；化药防治的优点是见效快，但副作用大、残留高的鱼药，也不符合当今社会绿色环保的要求；复合微生态制剂由于同时具有改善肠道内环境、增加进食、抑制有害菌群、改善水质等多方面的作用，越来越多的被人们应用到水产养殖业中，但是很多制剂仍存在菌种性能不稳定、功能单一和环境适应性能差等问题，使其不能适应水体复杂多变的环境，施于水体后效果不稳定，从而限制了微生态制剂在水产养殖上的推广应用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种水产用预混料，预混料中包含可防止鱼类疾病发生的复方中草药，尤其是预防鱼类肝胆综合症的发生，同时包含复合微生态制剂，复合微生态制剂主要成分为三种益生菌。不仅具益生功能，也可用于水产养殖水体净化和调理，环境适应性强、功能稳定且能够有效降解水体中的氨氮、硝态氮、亚硝态氮和COD等污染物。为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是一种水产用预混料，每千克预混料中复合维生素80-140g、复合微量元素110-200g、牛磺酸100_300g、植酸酶10_30g、谷氨酰胺100-300g、DMPT 5-20g、复合微生态制剂l_10g、复合中药组合物l_10g，余量为载体。所述的复合维生素由下述重量配比的成分制备而成维生素Al.3%、维生素D30. 4%、维生素E18. 5%、维生素K32. 2%、维生素Bll%、维生素B21. 4%、维生素B61. 1%、维生素B120. 3%、烟酸3. 2%、泛酸钙2. 4%、叶酸O. 2%、生物素1%、维生素C53%、肌醇14%。所述的复合微生态制剂的成分为枯草芽孢杆菌CGMCC No. 4628的菌粉、地衣芽孢杆菌CGMCC No. 5094的菌粉和粪肠球菌CGMCC No. 5092的菌粉。所述的复合中药组合物的药物原料按重量份数配比大黄30-60份、穿心莲30-60份、桅子30-70份、茵陈蒿50-80份、甘草10-30份。所述的复合微量元素由下述重量配比的成分制备而成蛋氨酸铜O. 75%、蛋氨酸铁24. 4%、蛋氨酸锌5%、蛋氨酸锰2. 7%、一水硫酸镁67%、碘化钾O. 02%、酵母硒O. 03%、无水氯化钴O. 1%。所述蛋氨酸铜中铜含量> 10% ;所述蛋氨酸铁中铁含量> 10% ;所述蛋氨酸锌中锌含量≥10% ;所述蛋氨酸锰中锰含量≥10% ;所述酵母硒中硒含量≥1000mg/kg，所述百分比为质量百分比。所述复合微生态制剂中枯草芽孢杆菌CGMCC No. 4628的菌粉、地衣芽孢杆菌CGMCCNo. 5094的菌粉和粪肠球菌CGMCC No. 5092的菌粉质量配比为1_5:1_5:2_7。所述植酸酶为耐高温中性植酸酶，活性为5000U/g ;所述牛磺酸中有效成分含量^ 99% ;所述谷氨酰胺纯度> 99% ;所述DMPT纯度> 99%，所述百分比为质量百分比；所述的载体为稻糠或沸石粉。上述水产用预混料在制备水产饲料添加剂中的应用。包含上述水产用预混料的配合料，预混料在配合料中的添加重量百分比为1-10%0。本发明的有益效果是I、本发明将复合微生态制剂与复药药物组合物结合，制剂含三种高质量的益生菌，其菌种室严格按照微生态学规律进行选种、选育的，保证菌种的优良，活菌含量高，具有良好的微生态调节、优化水质、促进水产动物的生长、增强免疫力的作用，防治鱼类疾病的同时还可修护受损伤的肝胆细胞，疗效好，见效快；使用安全、无毒副作用，不会产生危害人类健康的药物残留、不易产生耐药性、引发药源性疾病；且质量稳定，安全可靠，绿色环保，无污染。2、本发明制剂能够显著促进水产动物的个体增重，提高单位面积产量和总量，从而增加水产养殖的收入，提高效益。3、本发明活菌含量高、保质期长、作用范围大、生产成本低，是专门改善水质、增加水产动物免疫力及防治水产类病害发生的理想饲料。4、本发明提供的预混料可使饲料中鱼粉的用量从6%降低至2%，减少了约67%的鱼粉用量，减小了鱼用饲料对鱼粉的依赖，同时降低成本，还使用了氨基酸螯合微量元素和植酸酶，可有效提高微量元素和植酸磷的消化利用率，鲤鱼使用后效果良好；同时，减少了对水环境的排放和污染，符合当今绿色养殖的要求。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明作进一步详细说明本发明的水产用预混料，每千克预混料中复合维生素80_140g、复合微量元素110-200g、牛磺酸100-300g、植酸酶10_30g、谷氨酰胺100-300g、DMPT5-20g、重量百分比为1-10%。复合微生态制剂、重量百分比为I 一 10%。的复合中药组分物，余量为载体。进一步，每千克预混料中复合维生素120g、复合微量元素150g、牛磺酸200g、植酸酶20g、谷氨酰胺200g、DMPT 10g、重量百分比为1_5%。复合微生态制剂、重量百分比为
I— 5%。的复合中药组合物,余量为载体。其中，所述的复合维生素由下述重量配比的成分制备而成维生素Al. 3%、维生素D30. 4%、维生素E18. 5%、维生素K32. 2%、维生素Bll%、维生素B21. 4%、维生素B61. 1%、维生素B120. 3%、烟酸3. 2%、泛酸钙2. 4%、叶酸O. 2%、生物素1%、维生素C53%、肌醇14%。复合微生态制剂的主要成分为枯草芽孢杆菌CGMCC No. 4628、地衣芽孢杆菌CGMCCNo. 5094 和粪肠球菌 CGMCC No. 5092。复合中药组合物主要由大黄30-60份、穿心莲30-60份、桅子30_70份、茵陈蒿50-80份、甘草10-30份组成。进一步，大黄50份、穿心莲50份、桅子50份、茵陈蒿70份、甘草20份。其中，本发明制剂中枯草芽孢杆菌CGMCC No. 4628、地衣芽孢杆菌CGMCCNo. 5094和粪肠球菌CGMCC No. 5092的菌粉质量配比为1-5:1_5:2-7。进一步，本发明制剂中枯草芽孢杆菌CGMCC No. 4628、地衣芽孢杆菌CGMCCNo. 5094和粪肠球菌CGMCC No. 5092的菌粉质量配比为1:1:2。 其中，所述的复合微量元素由下述重量配比的成分制备而成蛋氨酸铜O. 75%、蛋氨酸铁24. 4%、蛋氨酸锌5%、蛋氨酸锰2. 7%、一水硫酸镁67%、碘化钾O. 02%、酵母硒O. 03%、无水氯化钴O. 1%。其中，所述蛋氨酸铜中铜含量> 10% ;所述蛋氨酸铁中铁含量> 10% ;所述蛋氨酸锌中锌含量彡10% ;所述蛋氨酸锰中锰含量彡10%;所述酵母硒中硒含量彡1000mg/kgo其中，为了保证本发明中植酸酶的使用效果，所述植酸酶为耐高温中性植酸酶，活性为5000U/g。为了保证本产品的诱食性和营养均衡性，上述牛磺酸中有效成分含量^ 99% ;上述谷氨酰胺纯度> 99% ;上述DMPT纯度> 99%。其中，所述的载体为稻糠或沸石粉。预混料在配合料中的添加重量百分比为1-10%0。本发明的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)为申请人从牛肠道中分离、经定向初筛和复筛得到。其营养细胞杆状，其芽孢为椭圆或长筒形，为中生或次端生，孢囊稍膨大。孤立或呈短链，杆端半圆形。在12 16h内能形成菌落，菌落为圆形，或不规则，边缘毛发状，菌落白色，不透明，无褶皱。革兰氏阳性。申请人对此株地衣芽孢杆菌进行了耐酸性、耐胆盐、耐高温性、发酵特性和抑菌活性等实验，此株地衣芽孢杆菌具有对逆环境耐受性强、粘附性强、生长快、生物量大、抑菌活性好等特点。本发明的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)申请人已于2011年7月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCCJia :北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo. 5094。本发明的粪肠球菌(Enterococcus faecalis)为申请人从猪大肠中分离得到，其生物学特征如下菌落圆整，表面光滑，不透明，乳白色，边缘光滑，革兰氏阳性菌；单个菌体为球状或椭圆状。本发明的粪肠球菌经过人工胃液、胆汁液及耐热性的筛选；又经过产酶能力筛选和抑菌能力筛选，可以耐受pH2.0，l%胃蛋白酶的人工胃液，可以耐受O. 3%的人工胆汁液，可以耐受85°C的制粒温度，也可以抑制致病性大肠杆菌K88，K99和金黄色葡萄球菌，具有较强的产酸和抑制豆柏、棉柏、玉米秸杆中霉菌的能力。本发明的粪肠球菌(Enterococcus faecalis)申请人已于2011年7月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址同上，保藏编号为CGMCCNo. 5092。本发明所用的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)为申请人从传统发酵豆豉中分离得到，其生物学特征如下菌落表面粗糙，不透明，污白色，菌落圆形，边缘呈锯齿状，革兰氏阳性菌；芽孢形态为椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。本发明的枯草芽孢杆菌显著区别于现有的枯草芽孢杆菌，可以耐受PH2. O，1%胃蛋白酶的人工胃液，可以耐受O. 3%的人工胆盐，可以耐受80°C的制粒温度，可以抑制致病性大肠杆菌K88，K99和金黄色葡萄球菌，具有较强的产纤维素酶的能力，可以降解纤维素。本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)已于2011年3月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址同上，保藏编号为CGMCC No. 4628。上述菌种在本申请人以前申请的案子中已将公开。下面结合具体实施例进行详细说明下述实施例中复合维生素由下述重量配比的成分制备而成维生素Al. 3%、维生素D30. 4%、维生素E18. 5%、维生素K32. 2%、维生素Bll%、维生素B21. 4%、维生素B61. 1%、维生素B120. 3%、烟酸3. 2%、泛酸钙2. 4%、叶酸O. 2%、生物素1%、维生素C53%、肌醇14%。
复合中药组合物的制备方法按重量配比称取各中药原料，大黄30-60份、穿心莲30-60份、桅子30-70份、茵陈蒿50-80份、甘草10-30份，超微粉碎，过筛，得小于50微米粉末，均匀混合，即得。枯草芽孢杆菌CGMCC No. 4628、地衣芽孢杆菌CGMCC No. 5094和粪肠球菌CGMCCNo. 5092的菌粉的制备方法如下粪肠球菌CGMCC 5092菌粉的制备种子培养基为商品MRS肉汤(乳酸菌专用培养基)。培养条件37°C，lOOrpm，12h。粪肠球菌发酵培养基3. 5%蛋白胨，6. 0%牛肉粉，O. 50%柠檬酸二铵，3. 5%蔗糖，
I.0%酵母浸粉，O. 4%磷酸氢二钾，O. 1%乙酸钠，O. 02%硫酸镁，O. 005%硫酸锰，O. 05%吐温80。培养条件37°C，50rpm,12h。所得发酵液用高速冷冻离心机离心，离心条件5000rpm，4°C，lOmin。离心后弃上清液，得菌泥。用5. 0%蔗糖，I. 0%谷氨酸钠，I. 0%抗坏血酸的水溶液搅拌菌泥混匀，再加入50%进口脱脂奶粉。先置于-80°C超低温冰箱冷冻，再置于真空冷冻干燥机干燥24-30h，取出粉碎，过60目筛。地衣芽孢杆菌CGMCC 5094 ；种子培养基0. 5%牛肉膏，I. 0%蛋白胨，O. 5%氯化钠。培养条件37°C，180rpm,24h。地衣芽孢杆菌培养基3. 0%红糖，I. 0%玉米粉，3. 0%豆饼粉，O. 25%尿素，O. 15%磷
酸二氢钠。培养条件3rC，180rpm,24h0所得发酵液用高速冷冻离心机离心，离心条件5000rpm，4°C，lOmin。离心后弃上清液，得菌泥。用5. 0%蔗糖，I. 0%谷氨酸钠，I. 0%抗坏血酸的水溶液搅拌菌泥混匀，再加入50%进口脱脂奶粉。先置于-80°C超低温冰箱冷冻，再置于真空冷冻干燥机干燥24h，取出粉碎，过60目筛。枯草芽孢杆菌CGMCC 4628菌粉的制备。种子培养基0. 5%牛肉膏，I. 0%蛋白胨，O. 5%氯化钠。培养条件3rC，180rpm,24h0
枯草芽孢杆菌培养基2. 0%葡萄糖，4. 0%大豆蛋白胨，O. 16%硫酸镁，O. 3%磷酸氢二钾，O. 3%磷酸二氢钾。培养条件3rC，180rpm,24h0 所得发酵液用高速冷冻离心机离心，离心条件5000rpm，4°C，lOmin。离心后弃上清液，得菌泥。用5. 0%蔗糖，I. 0%谷氨酸钠，I. 0%抗坏血酸的水溶液搅拌菌泥混匀，再加入50%进口脱脂奶粉。先置于-80°C超低温冰箱冷冻，再置于真空冷冻干燥机干燥24h，取出粉碎，过60目筛。实施例I配方(Ikg含量):复合维生素80g、复合微量元素200g、牛磺酸300g、植酸酶IOgj氨酰胺100g、DMPT(二甲基-β -丙酸噻亭)5g、5g复合中药组合物(大黄30份、穿心莲60份、桅子70份、茵陈蒿50份、甘草10份)、5g复合微生态制剂(枯草芽孢杆菌CGMCC No. 4628、地衣芽孢杆菌CGMCCNo. 5094和粪肠球菌CGMCC No. 5092的菌粉质量配比为1: 1: 2，质量比)，
余量稻糠。先用180g稻糠将复合维生素进行预稀释，加入到剩余的稻糠中，然后再依次加入DMPT、植酸酶、牛磺酸、谷氨酰胺、复合微量元素、复合中药组合物、复合微生态制剂；混合(变异系数不大于5%)匀后，即得本发明的鱼用复合预混料。实施例2配方(Ikg含量):复合维生素110g、复合微量元素170g、牛磺酸200g、植酸酶20g、谷氨酰胺200g、DMPT (二甲基-β-丙酸噻亭)10g、lg复合中药组合物(大黄60份、穿心莲30份、桅子30份、茵陈蒿80份、甘草130份组成)、10g复合微生态制剂(枯草芽孢杆菌CGMCC No. 4628、地衣芽孢杆菌CGMCC No. 5094和粪肠球菌CGMCC No. 5092的菌粉质量配比为5:5:7)，余量稻糠。先用180g稻糠将复合维生素进行预稀释，加入到剩余的稻糠中，然后再依次加入DMPT、植酸酶、牛磺酸、谷氨酰胺、复合微量元素、复合中药组合物、复合微生态制剂；混合匀后，即得本发明的鱼用复合预混料。实施例3配方(Ikg含量):复合维生素140g、复合微量元素110g、牛磺酸100g、植酸酶30g、谷氨酰胺300g、DMPT (二甲基-β-丙酸噻亭)20g、复合中草药4g (大黄50份、穿心莲50份、桅子50份、茵陈蒿70份、甘草20份)、复合微生态制剂4g(CGMCC No. 4628、地衣芽孢杆菌CGMCC No. 5094和粪肠球菌CGMCC No. 5092的菌粉质量配比为1:1:2)，余量为载体。先用180g稻糠将复合维生素进行预稀释，加入到剩余的稻糠中，然后再依次加入DMPT、植酸酶、牛磺酸、谷氨酰胺、复合微量元素、复合中药组合物、复合微生态制剂；混合匀后，即得本发明的鱼用复合预混料。实验例I本试验在唐山大北农水产试验基地进行，共4个试验组，I个对照组和3个实施例组，对照组和实施例组基础配方相同，但饲料中未添加复方药物组合物和复方微生态制剂。三个实施例组使用的预混料分别为本发明实施例1、2、3制备的预混料。每个试验组设4个重复，共16个养殖桶(800L/桶)，每桶放30尾鲤鱼(50. 13±0. 15克)。养殖期间日投饲率为体重的3%，上下午各投喂一次，每两周称重调整一次投喂量。每天下午换水1/3，以保证养殖水体符合渔业养殖水质标准要求，试验结束后每桶随机取3尾鱼测定体长、体重等生长指标。试验结束后各组鲤鱼的成活率均为100%，其生长数据测定结果见表2 表I各试验组生长指标
权利要求
1.一种水产用预混料，其特征在于，每千克预混料中复合维生素80-140g、复合微量元素110-200g、牛磺酸100-300g、植酸酶10_30g、谷氨酰胺100_300g、DMPT 5_20g、复合微生态制剂Ι-lOg、复合中药组合物Ι-lOg，余量为载体。
2.根据权利要求I所述的水产用预混料，其特征在于，所述的复合维生素由下述重量配比的成分制备而成维生素A I. 3%、维生素D30. 4%、维生素E18. 5%、维生素K32. 2%、维生素Bll%、维生素B21. 4%、维生素B61. 1%、维生素B120. 3%、烟酸3. 2%、泛酸钙2. 4%、叶酸O.2%、生物素1%、维生素C53%、肌醇14%。
3.根据权利要求I所述的水产用预混料，其特征在于，所述的复合微生态制剂的成分为枯草芽孢杆菌CGMCC No. 4628的菌粉、地衣芽孢杆菌CGMCC No. 5094的菌粉和粪肠球菌 CGMCC No. 5092 的菌粉。
4.根据权利要求I所述的水产用预混料，其特征在于，所述的复合中药组合物的药物原料按重量份数配比大黄30-60份、穿心莲30-60份、桅子30-70份、茵陈蒿50-80份、甘草10-30份。
5.根据权利要求I所述的水产用预混料，其特征在于，所述的复合微量元素由下述重量配比的成分制备而成蛋氨酸铜O. 75%、蛋氨酸铁24. 4%、蛋氨酸锌5%、蛋氨酸锰2. 7%、一水硫酸镁67%、碘化钾O. 02%、酵母硒O. 03%、无水氯化钴O. 1%。
6.根据权利要求5所述的水产用预混料，其特征在于，所述蛋氨酸铜中铜含量>10% ； 所述蛋氨酸铁中铁含量> 10%;所述蛋氨酸锌中锌含量> 10% ;所述蛋氨酸锰中锰含量彡10% ;所述酵母硒中硒含量彡1000mg/kg,所述百分比为质量百分比。
7.根据权利要求3所述的水产用预混料，其特征在于，所述复合微生态制剂中枯草芽孢杆菌CGMCC No. 4628的菌粉、地衣芽孢杆菌CGMCC No. 5094的菌粉和粪肠球菌CGMCC No. 5092的菌粉质量配比为1-5:1-5:2-7。
8.根据权利要求I所述的水产用预混料，其特征在于，所述植酸酶为耐高温中性植酸酶，活性为5000U/g ;所述牛磺酸中有效成分含量> 99% ;所述谷氨酰胺纯度> 99% ;所述 DMPT纯度> 99%，所述百分比为质量百分比；所述的载体为稻糠或沸石粉。
9.一种权利要求1-8任一项的水产用预混料在制备水产饲料添加剂中的应用。
10.一种包含权利要求1-8任一项所述的水产用预混料的配合料，其特征在于，预混料在配合料中的添加重量百分比为1-10%。。
全文摘要
本发明公开了一种水产用预混料及其在饲料添加剂中的应用与其配合料，每千克预混料中复合维生素80-140g、复合微量元素110-200g、牛磺酸100-300g、植酸酶10-30g、谷氨酰胺100-300g、DMPT 5-20g、复合微生态制剂1-10g、复合中药组合物1-10g，余量为载体。所述的复合微生态制剂的成分为枯草芽孢杆菌CGMCC No.4628的菌粉、地衣芽孢杆菌CGMCCNo.5094的菌粉和粪肠球菌CGMCC No.5092的菌粉。复合微生态制剂主要成分为三种益生菌。不仅具益生功能，也可用于水产养殖水体净化和调理，环境适应性强、功能稳定且能够有效降解水体中的氨氮、硝态氮、亚硝态氮和COD等污染物。
文档编号A23K1/14GK102696923SQ20121019729
公开日2012年10月3日 申请日期2012年6月15日 优先权日2012年6月15日
发明者冯雪芳, 王丽英, 王松, 贠桂玲 申请人:天津昌农科技有限责任公司