专利名称：用于确定glp-1类似物对2型糖尿病血糖调控机制的设备及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及调控机制研究领域，尤其涉及一种用于确定GLP-I类似物对2型糖尿病血糖调控机制的设备以及将该设备在血糖调控机制中的研究。
背景技术：
21世纪以来2型糖尿病开始在全球范围流行，已然成为全球第四位疾病相关死亡原因，给世界各国带来巨大的经济负担。2型糖尿病是一种遗传和环境因素共同作用而形成的多基因遗传性复杂疾病，以持续高血糖为显著特征。长期持续的血糖升高会导致视网膜、肾脏和神经病变等糖尿病微血管并发症以及大血管并发症,上述并发症的发生风险与高血糖的暴露时间显著相关。2型糖尿病个体高血糖成因有多种机制，其中肝脏、肌肉以及脂肪细胞的胰岛素抵抗(Insulin Resistance, IR)是极为重要的原因,其原因如下(I)肝脏抵抗，主要表现为肝糖产生及输出(Hepatic Glucose Production, HGP)增加，引起空腹高血糖，同时HGP的增加也是餐后血糖升高的重要原因之一。(2)肌肉抵抗，胰岛素介导的葡萄糖摄取、氧化代谢能力障碍，肌糖原生成及贮存减少。(3)脂肪抵抗，胰岛素抑制脂肪分解作用减弱，血游离脂肪酸(FFA)增高。而血浆高FFA水平又可同时促进肝糖产生过多，加重肝胰岛素抵抗。同时抑制肌细胞胰岛素介导的葡萄糖转运及肌糖原的合成，加重已有的肌肉抵抗。研究表明，IR作为2型糖尿病的主要特征之一，在机体出现临床高血糖前就已经存在。当机体出现IR时，由于胰岛素的生物效应减低，机体不仅出现高血糖，也常伴有血脂紊乱。近年来，对于2型糖尿病的研究不断深入，不断有GLP-I的类似物、衍生物和近似物等被合成或发现，例如中国CN1740198A、CN1951965A、CN1918177A中都披露了与GLP-1具有相当高相识度的物质。在对这些物质在正式应用在医疗中，都需要对其进行全方面的了解和研究。在确定调制机制过程中，通常会根据GLP-I衍生物、近似物与GLP-I的相识度而选用测试方式和测试试剂，由于测试试剂品种多种多样，如果选用测试方法和测试试剂不对则该测试得出的结果是失败，但实际测试过程中多数结果是无效的。
发明内容
本发明针对现有技术中存在不足之处，提供适用于在不同动物体上测试GLP-I类似物在确定血糖调控机制的设备，使用该设备能方便，可以便捷、快速确定出2型糖尿病血糖调控机制。为了实现上述目的，本发明提供一种用于确定GLP-I类似物对2型糖尿病血糖调控机制的设备，所述设备包括动物代谢笼、尾部固定夹子；所述动物代谢笼内设有网格板，所述网格板将动物代谢笼分为上下两部分，动物代谢笼还设有进出代谢笼的门，动物代谢笼的侧壁上设有进水孔和尾巴伸出孔。
在本发明提供的一优选实施例中，其中所述进水孔和尾巴伸出孔分别设置在动物代谢笼的相对两个侧壁上。
在本发明提供的一优选实施例中，其中所述设备还包括尾部放置台，所述尾部放置台的上表面与尾巴伸出孔下表面平齐。
在本发明提供的一优选实施例中，其中所述动物代谢笼内网格板下方还设有台板。
在本发明提供的一优选实施例中，其中在动物代谢笼侧面设有卡口，所述网格板和台板通过该卡口插入并固定在动物代谢笼中。
在本发明提供的一优选实施例中，其中所述装置还包括动物保定器，所述动物保定器具有一端开口的筒状形状。
在本发明提供的一优选实施例中，其中所述动物保定器一端开口具有圆形或椭圆形的开口截面，所述开口截面中部向上凸出或向下凹进。
在本发明提供的一优选实施例中，其中所述尾部固定夹子包括相对的两个夹片， 所述夹片中间部具有圆弧形凹部，夹片两端设有连接固件。
在本发明提供的一优选实施例中，其中所述圆弧形凹部内侧面铺设有弹性垫子。
在本发明提供的一优选实施例中，其中所述设备还包括用于插入动物尾部的尾静脉的静脉留置针。
本发明提供的设备适用于在不同动物体上测试GLP-I类似物在确定血糖调控机制，该设备使用方便，可以便捷、快速确定出2型糖尿病血糖调控机制。
图I是本发明提供设备中动物代谢笼的结构示意图。
图2是本发明提供设备中尾部固定夹子的结构示意图。
图3是本发明提供设备中动物保定器的侧视图。
图4是大鼠灌流流程不意图。
图5是Exenatide/对照液干预8周后，各组大鼠空腹膜岛素、HOMA-IR和膜岛素敏感指数比较图。
图6是Exenatide治疗7周后,大鼠腹腔葡萄糖耐量对照试验曲线图。
图7是Exenatide治疗7周后,大鼠腹腔胰岛素耐量对照试验曲线图。
图8是葡萄糖总离子流色谱图。
图9是甲氧胺+硅烷化处理过的葡萄糖的质谱图。
图10是葡萄糖标准曲线。
图11是甘油总离子流色谱图。
图12是硅烷化处理过的甘油的质谱图。
图13是甘油标准曲线。
图14是甘油更新及糖异生相关参数。
图15是高胰岛素正糖钳夹稳态葡萄糖代谢相关参数。
具体实施方式
本发明提供适合在不同动物体上测试GLP-I类似物在确定血糖调控机制的设备， 可以便捷、快速确定出2型糖尿病血糖调控机制。
以下大鼠为实验对象，通过实施例对本发明提供的设备作进一步详细的说明，以便更好理解本发明创造的内容，但实施例的内容并不限制本发明创造的保护范围。
实验设备用于确定GLP-I类似物对2型糖尿病血糖调控机制的设备包括动物代谢笼I、动物保定器3、尾部固定夹子2。如图I所示的动物代谢笼，动物代谢笼I中内从上往下分别设有网格板11和台板12，网格板11和台板12通过设置在动物代谢笼侧面的卡口，插入并固定在动物代谢笼中。在动物代谢笼上设有进去代谢笼的活动门15，动物代谢笼的侧壁上设有进水孔13和尾巴伸出孔14，所述进水孔和尾巴伸出孔分别设置在动物代谢笼的相对两个侧壁上。在进行动物的示踪灌流时，实验动物置于动物代谢笼I中，动物的尾部从尾巴伸出孔 14内伸出。伸出的尾部放置在尾部放置台18上，尾部放置台18的上表面与尾巴伸出孔14 下表面平齐。
如图2所示的尾部固定夹子2，该固定夹子2用于固定插入静脉留置针处的动物尾部。尾部固定夹子2由相对称形状的夹片21组成，在夹片21中间部具有圆弧形凹部，夹片 21两端设有连接固件23。圆弧形凹部内侧面铺设有弹性垫子22，弹性垫子22用于保护动物的尾部不会被固定夹子夹伤。如图3所示的动物保定器3，该动物保定器3具有圆柱形的容器侧壁，顶部具有椭圆形的开口截面31，底部设有动物透气通孔32。动物保定器3 —端开口具有圆形或椭圆形的开口截面，所述开口截面中部向上凸出或向下凹进。
将实验用的动物置于保定器内，防止实验过程中动物乱动。在进一步的实施例中， 在整个设备中还包括用于插入动物尾部的尾静脉的静脉留置针，静脉留置针插入动物的尾部尾静脉中用于示踪灌流。
实验溶液配置配置下列用于确定GLP-I类似物对2型糖尿病血糖调控机制的试剂，包括链脲佐菌素注射液、磷酸盐缓冲溶液、闪烁液和衍生化试剂。其中，链脲佐菌素注射液中含有链脲佐菌素、柠檬酸和柠檬酸钠。所述磷酸盐缓冲溶液中含有氯化钠、氯化钾、十二水合磷酸氢二钠和无水磷酸二氢钾。所述闪烁液中含有b-PBD ;所述衍生化试剂中含有甲氧基胺盐酸盐链脲佐菌素注射液配制将取一定量朽1檬酸和朽1檬酸钠，将其加入双蒸水中配置成朽1 檬酸缓冲液，将柠檬酸缓冲的PH值调节至4. 5，用高压蒸汽消毒，保存在4°C冰箱备用。待需要使用时，称取的链脲佐菌素加入之前配置的柠檬酸缓冲液中混合，充分搅拌后即配置成链脲佐菌素注射液。
磷酸盐缓冲溶液(PBS)配制取一定量氯化钠、氯化钾、十二水合磷酸氢二钠和无水磷酸二氢钾加入双蒸水中，用高压蒸汽消毒，保存在4°C冰箱备用。其中加入各物质的重量为氯化钠7、份、氯化钾O. I、. 3份、十二水合磷酸氢二钠3 4份、无水磷酸二氢钾O.2 O. 4 份。
闪烁液配制用微量分析天平称取适量闪烁物质溶于二甲苯中，轻轻振荡混匀，室温保存备用。优选用b-PBD作为闪烁物质，配制的b-PBD闪烁液的浓度为O. 6^1. 2%。
衍生化试剂配制用微量分析天平称取适量衍生化物质溶于吡啶中，轻轻振荡混勻，室温保存备用。优选用甲氧基胺盐酸盐(Methoxyamine hydrochloride, Μ0Χ),配制的 Μ0Χ)衍生化试剂中MOX的浓度为94 96%。
以下通过将上述试剂应用在确定GLP-I类似物对2型糖尿病血糖调控机制中，来详细说明该试剂在确定GLP-I类似物对2型糖尿病血糖调控机制中的应用，以下GLP-I类似物以艾塞那肽(Exenatide)为例子。
大鼠建模以大鼠为实验对象，以便更好说明本发明提供的设备。选用28只平均体重在 123. 5±8. 5 g左右的SPF级雄性SD大鼠，基础饲料适应性喂养I周后，随机分为以下四组 以基础饲料喂养的正常对照组(记为C组)、N=6，以基础饲料喂养的正常对照+Exenatide干预组(记为C+E组)、N=6，以高脂饲料喂养的2型糖尿病大鼠组(记为D组)、N=8，以高脂饲料喂养的2型糖尿病大鼠+Exenatide干预组(记为D+E组)、N=8。
所有大鼠按照SPF级动物房饲养要求于室温18 25°C、相对湿度50 80%条件下喂养、自由摄食、饮水。喂养10周后，所有大鼠均过夜空腹12小时，于次日早晨9时始，D组与D+E组大鼠予以1%STZ注射液(临用前现配)30mg/kg腹腔一次性注射，在30秒内注射完毕。C组与C+E组大鼠等体积腹腔一次性注射O. 1M、pH值为4. 5的柠檬酸缓冲液。
采用快速血糖仪检测给药72 h后大鼠尾静脉随机血糖，连续三次以上测得血糖 ^ 16.7 mmol/L作为糖尿病大鼠成模标准。STZ腹腔注射后，每天观察大鼠的体重、活动状态、摄食饮水、尿量变化。每天监测尿糖，当尿糖< +++时(阳性反应)，不予处理；当尿糖 ^ +++时，给予f 3u甘精胰岛素皮下注射预防大鼠发生高渗性昏迷甚至死亡。每周针刺鼠尾取血，用快速血糖仪测定血糖。
糖尿病模型建立后第3天起，C+E组与D+E组大鼠每日腹部皮下注射Exenatide 5 μ g。C组与D组大鼠腹部皮下注射等体积生理盐水作为对照，治疗8周。
腹腔葡萄糖耐量试验在开始Exenatide干预后第7周进行腹腔葡萄糖耐量试验。进行试验前一天，暂停 Exenatide及其相应对照液注射一次，所有大鼠过夜空腹12 16小时，次晨9时始，给予20% 葡萄糖注射液lg/kg体重一次性腹腔注射。分别在注射前(Omin)以及注射后30min、60min 及120min由鼠尾取血,快速血糖仪测定血糖。
腹腔胰岛素耐量试验在腹腔葡萄糖耐量试验后3天进行腹腔胰岛素耐量试验。在试验前一天，暂停 Exenatide及其相应对照液注射一次，所有大鼠过夜空腹12 16小时，次晨9时始，将生物合成人胰岛素诺和灵R溶于无菌PBS液，予大鼠腹腔一次性注射(O. 75Iu/kg体重)。分别在注射前(Omin)以及注射后30min、60min及90 min由鼠尾取血,快速血糖仪测定血糖。
大鼠示踪灌流将大鼠腹面向上平放，用动物保定器固定大鼠。将鼠尾轻轻拉直，以一胶带固定鼠尾于操作台板上。用一细针刺激大鼠尾部，如果鼠尾无反应，则提示麻醉良好，如鼠尾对针刺有疼痛反应，则可以于尾根部追加O. 5%利多卡因O. 5 lml。术者持一尖锐的三角形外科手术刀距离鼠尾根部2. 5cm处，作一长约Icm纵行切口，不能太深，以免伤及皮下之尾动脉。然后垂直于前纵行切口底端，向左做一 2mm横向切口，呈一反向的L形。
用一小止血钳在上述L形切口的游离端小心分离皮下组织，暴露覆盖于尾动脉上方的白色结缔组织层。用三角形外科手术刀刀尖在动脉上方白色结缔组织层轻轻刺一小洞，然后从该小洞中伸入小眼科剪尖端，紧贴结缔组织正下方，剪开结缔组织层，暴露其正下方约5mm之尾动脉。
使用一眼科镊小心分离尾动脉周围附着的深层结缔组织，注意避免损伤周围小血管。分离完毕后，在动脉下方近心端放置一丝线备用。术者左手持一眼科镊夹住暴露尾动脉的远端，略用力向后上方提起，使动脉绷紧，血流被阻断而进一步扩张动脉。右手持预先使用肝素钠溶液湿润的一次性使用静脉留置针(美国BD Insyte, 22GX I. 0ΙΝ),近心端方向， 与尾动脉呈约15°置入充血扩张的尾动脉。与尾静脉穿刺相似，注意穿刺针尖刺破动脉管壁进入O. 5cm左右后，即将穿刺针稍稍向后退出少许，以免导管继续深入时，锋利的穿刺针刺破动脉管壁，造成穿刺失败。当静脉导管进入大鼠尾动脉Icm左右后，向后拔出穿刺针， 如见鲜红色的动脉血快速充满导管，即说明置管成功。继续置入O. 5cm后，立即以肝素钠湿润的无菌输液接头封闭导管尾部备用。将前述动脉下方近心端放置的备用丝线打结扎紧， 将置入的动脉导管固定于血管内。为防止导管滑脱，再用缝合针将内有导管的尾动脉部分与血管附近的结缔组织缝合广2针，加强固定。术中，创面如有少量出血，可喷撒少量肾上腺素后压迫数分钟止血。
当导管安全固定于大鼠尾动脉内后，在创口处喷撒长效局部麻醉药布比卡因适量，缝合皮肤后，于皮肤创面处再喷撒适量布比卡因，对置管创面进行长时镇痛。最后在大鼠尾根部放置一自制的尾夹备用，同时经尾动脉导管注射少量肝素钠溶液，以防止导管堵塞。
将置管完毕的大鼠从自制的保定器中取出，放入实验用的特制代谢笼。通过大鼠尾根部固定的尾夹将大鼠尾部固定于笼外。大鼠静息半小时以上，将手术应激降到最低，以利后续相关实验操作。尾静脉置管处用高精度恒速灌流泵予生理盐水 ο μ l/rnin持续输注，以保持尾静脉开放。
在大鼠尾动脉置管处采集一基础血样(O. 5ml)后,使用Harvard泵由大鼠尾静脉恒速灌流3」H-葡萄糖(O. 5 μ Ci/kg/min)和U-13C-甘油(O. 84 μ mol/kg/min)，速度均为 10 μ 1/min,恒速灌流75分钟。在基础期灌流结束的最后10分钟(第65 75分钟)内，每隔 3分钟于大鼠尾动脉置管处取动脉血样O. 5ml。
取完血后，继续以Harvard泵由大鼠尾静脉恒速灌流3_3H_葡萄糖(O. 5 μ Ci/kg/ min, 10 μ 1/min),同时以另一 Harvard泵由大鼠尾静脉恒速灌流生物合成人胰岛素诺和灵 R (5mu/kg/min, 10 μ 1/min)，共持续90分钟。每10分钟从大鼠尾动脉置管处取血10 μ 1， 以手持血糖仪监测大鼠血糖一次，当大鼠血糖开始下降且低于6mmol/l左右时，以另一高精度恒速灌流泵从大鼠尾静脉处输注50%葡萄糖溶液，根据所测得的血糖值调整其灌流速度，保持大鼠血糖稳定在6-7mmol/l左右。在钳夹结束前的20分钟(即整个实验的第145分钟)时，由大鼠尾静脉一次性注射I μ Ci 2-脱氧-D-I-14C-葡萄糖，用来测定肌肉组织平均葡萄糖摄取率。在胰岛素钳夹期灌流结束前的10分钟开始(第155 165分钟)，每隔3分钟于大鼠尾动脉置管处取动脉血样Iml。灌流结束时，予3%的戊巴比妥钠(50mg/kg)由尾静脉输入全身麻醉大鼠后，打开胸腔，心脏穿刺取血，并迅速采取胰腺、肝脏、骨骼肌(腓肠肌)， 一部分置于液氮后，-80°C保存。另取部分上述组织以2%戊二醛溶液固定以备后续组织超微结构观察。上述所得动脉血样离心，弃去血球部分，将血浆转入含有抗凝剂的试管，-80°C保存待测。图4为整个大鼠灌流流程的示意图。
血浆样品测定(酸性消化法)取50 μ I大鼠同位素示踪剂灌流前采集之血浆(基础血浆)，置低钾玻璃测量杯。加入 50 μ I的60% HClO4,再加入100 μ I的30%Η202。加盖密闭后置70°C水浴中消化I. 5小时(注意仅将测量杯下半部浸入水中)。取出测量杯，加入3ml乙二醇甲醚和3ml含O. 8%b-PBD的二甲苯。液体闪烁计数仪经过淬灭校正，测量该血浆样本的本底3H dpm值。再取相同大鼠同位素灌流后所采集之血浆，按照上述方法测量该血浆样本的总3H dpm值。采用氧化酶法测定该50 μ I血浆样本的总葡萄糖量(μ mol),并计算该血浆样本的3-3H-葡萄糖的比活度 (SA)0
肌肉组织2-脱氧-D-I-14C-葡萄糖比活度测定(酸性消化法)称取待测湿肌组织约O. Ig,置低钾玻璃测量杯。加入200 μ I的60%HC104，再加入 400 μ I的30% Η202。加盖密闭后置70°C水浴中消化I. 5小时(注意仅将测量杯下半部浸入水中)，将待测肌肉组织消化成为无色液体。取出测量杯，加入IOml乙二醇甲醚和8ml 含0.8%b-PBD的二甲苯。液体闪烁计数仪经过淬灭校正，测量该样本的总14C dpm值。取 50 μ I同只大鼠同位素示踪剂灌流前采集之血浆(基础血浆)按照之前血浆样品测定中采用的方法，测定该血浆样本的本底14C dpm值，并计算该组织样本单位质量(g)的2-脱氧-D-I-14C-葡萄糖放射活性。
血浆U-13C甘油和1，2，3-13C-葡萄糖丰度测定将I, 2，3-13C-葡萄糖(彡99%，Sigma公司)与普通葡萄糖(彡99%，Sigma公司)分别配制成96 μ g/ml和202 μ g/ml的溶液，互相掺入成理论质量比为0%、0. 5%、1%、2%、4%和6%等数量级的溶液，离心浓缩真空抽干后备衍生化用。
与葡萄糖标准品处理相似，将U-13C-甘油(彡99%,美国Cambridge Isotope)与普通甘油O 99%, Sigma公司)分别配制成117 μ g/ml和214 μ g/ml的溶液,互相掺入成理论质量比为0%、0. 5%、1%、2%、4%、6%及10%等数量级的溶液，离心浓缩真空抽干后备衍生化用。
取20 μ I血浆置于I. 5ml的干净EP管内，在上述EP管内加入50ul蒸馏水，在振荡器上振荡5秒钟混合均匀。加O. 5ml预冷的无水乙醇后振荡I分钟混合均匀，以3000转 /分钟速度离心10分钟。取上清液转移入I. 5ml新EP管中，将含有上清液的新EP管开口状态下放入离心浓缩仪，65°C下，离心浓缩2小时，真空抽干。在真空抽干的EP管内，加入 100 μ I预先配制的MOX衍生化试剂，振荡混匀60秒后，转移入标准螺纹口 4ml透明样品瓶内(带Teflon隔垫)，注意密闭。将上述密闭的透明样品瓶置于80°C烘箱内加热2小时，取出透明样品瓶，待冷却后加入100 μ I BSTFA+1%TMCS,再加入300 μ I吡啶，振荡混匀15 30 秒后，置于80°C烘箱内再加热30分钟。从烘箱内取出样品瓶后，转移瓶内液体入钳口 2ml 透明进样瓶(带Teflon隔垫)内，密闭瓶盖后，置入GC-MS仪待测。
空腹胰岛素测定使用前轻轻的彻底混匀磁分离试剂，确保磁性微粒悬浮均匀备用，清洗浓缩液4. 3ml 加纯化水至45ml混合均勻备用。
准备各浓度标准品用试管各2只，血清、血浆、质控品用试管各2只，放置于试管架上。测定前将各试剂放至室温(18 25°C)，加样前充分混匀。设定恒温水浴锅温度为 370C ±1°C。准备好磁分离免疫测定仪。
第一次孵育(免疫反应)用微量移液器吸取30 μ I各浓度标准品、质控品、及待测大鼠血浆，加至标记好的相应试管的底部。用微量移液器加15 μ I Insulin抗试剂一FITC 至各试管，用微量移液器加15 μ I Insulin抗试剂一ALP至各试管。用塑料薄膜覆盖试管架，置于生化摇摆平台上，轻轻往复震荡试管架，使试管内试剂彻底混匀。试管连架置37°C 水浴30分钟。
磁分离①向各试管中加入60 μ I磁分离试剂。磁分离试剂使用前应充分摇匀， 确保磁性微粒均匀悬浮。每加液10支试管摇匀磁分离试剂瓶一次。操作全过程小于5分钟。②再次用塑料薄膜覆盖试管，置于生化摇摆平台上，轻轻往复震荡试管架，使试管内试剂轻轻地彻底混匀。③试管连架置37°C水浴6分钟。④试管连架放入磁分离器，磁场中沉淀2分钟。确保每支试管底部都与分离器表面接触。⑤用一大而缓慢的圆周运动倒转分离器倒出上清液，把倒转的试管放在滤纸上，用强有力的动作拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴。⑥放正分离器，加150 μ I稀释后的清洗液至各试管。⑦从分离器取出试管架放至摇摆平台，激烈振荡，彻底混匀。⑧试管连架放入磁分离器，磁场中沉淀2分钟。 确保每支试管底部都与分离器表面接触。⑨用一大而缓慢的圆周运动倒转分离器倒出上清液，把倒转的试管放在滤纸上，用强有力的动作拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴。⑩重复上述⑥ ⑨步骤一次。
第二次孵育(酶反应)①准备一支空白试管，做好标记放置试管架上，为磁分离酶联免疫测定仪校零。②从分离器中取出试管架，迅速加90μ I基质至各试管，包括空白管。 ③再次用塑料薄膜覆盖试管，置于生化摇摆平台上，往复震荡试管架，使试管内试剂彻底混匀。④试管连架置37°C水浴30分钟。⑤加300 μ I终止液至各试管包括空白管，其加液顺序与加基质顺序相同，5分钟内加完。⑥把试管架放入磁分离器，沉淀15分钟。⑦用空白管在550nm校零。在550nm、492nm读取标准品、质控品、血浆样本的吸光值。
根据标准品的浓度与所测OD值绘制标准曲线，并计算出标准曲线的直线回归方程式，将待测样品的OD值代入方程式，算出待测样品的浓度，再乘以稀释倍数，即为待测样品的浓度。
血脂测定使用Dimension Rel MAX自动生化分析仪测定。其中甘油三酯(triglyceride,TG)采用 LPL酶终点法测定，总胆固醇(total cholesterole，TC)采用胆固醇氧化酶法(CHOD-PAP) 测定，高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterole, HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(lower density lipoprotein-cholesterole, LDL-C),均米用直接法测定。
数据分析所有数据使用SPSS 17. O统计分析软件包进行统计分析。所有计量数据均采用均数土标准差(土s)表示，多组间均数比较首先采用方差分析(AN0VA)，若方差分析有显著性则进一步行均数间的两两比较。同一血浆参数前后比较采用配对样本t检验。P〈0.05为有统计学意义，P〈0.01为有显著统计学意义。
结果各组大鼠体重监测结果实验开始时(O周)，四组大鼠体重无明显统计学差异 (P=0. 407)。C组及C+E组大鼠予普通饲料，D组及D+E组大鼠予高脂饲料喂养10周后，四组大鼠体重组间比较出现统计学差异。高脂饲料喂养的D组及D+E组大鼠体重均较普通饲料喂养的C组及C+E组大鼠体重显著增加(P〈0. 01)。而在小剂量STZ注射(30mg/kg体重) 诱导模型组大鼠成糖尿病并予Exenatide或者等体积生理盐水皮下注射8周后，C+E组大鼠体重较C组显著降低(P〈0. 01), D+E组大鼠体重较D组显著降低(P〈0. 01),详细数据如表 I所示。
表I实验过程中大鼠体重变化吋同 C周)C组 (n=6)C+E组 (n=6)D组 (n=5)D+E组 (η =5)POMAAtll122.5±3.2121.3±4.4126.4±5.20.40710448.4±34.2467.3±8.7557.2±25.fA534.0±24.2'*0.00018531.9±37.6474.3+24.9"468.2+29.0"397.6±13./*φ0.000同一时间点内，与C组比，*p < 0.01 ;与C+E组比，aP < 0.01 ;与0组比，p <0.05。 备注C组为正常对照组、C+E组为正常对照加用Exenatide处理组、D组为糖尿病模型组、 D+E组为糖尿病加用Exenatide处理组,其中C+E组及D+E组从第10周起开始予Exenatide 5 μ g/d,皮下注射一日一次处理。
各组大鼠血糖监测结果实验开始时，四组大鼠基础空腹血糖无明显统计学差异 (P =0.663)。10周后，给予高脂饲料喂养的D组和D+E组大鼠空腹血糖与随机血糖均较普通饲料喂养的C组及C+E组大鼠血糖升高，但四组大鼠血糖无明显统计学差异(P =0.091和 P =0. 135)。而在小剂量STZ注射(30mg/kg体重)后，D组与D+E组大鼠随机血糖均较注射前显著升高，稳定在> 16.7mmol/L的水平，两组之间无明显统计学差异(P>0. 05)。而采用柠檬酸缓冲液等体积注射后的C组及C+E组大鼠其血糖注射前后无明显变化。同一时间点比较(STZ注射后3天)，D组与D+E组大鼠随机血糖也较C组与C+E组显著升高(P〈0. 01)。 诱导模型组大鼠成糖尿病后8周，D组大鼠空腹血糖持续升高，显著高于其他三组大鼠空腹血糖(P〈0. 01)。而D+E组大鼠经过Exenatide皮下注射干预8周后，血糖显著低于未受干预的D组大鼠(P〈0. 01),但仍高于C组及C+E组(P〈0. 01)。而经过Exenatide皮下注射干预8周后的C+E组大鼠空腹血糖也低于C组，出现统计学意义(P〈0. 05)，详细数据如表2所/Jn ο
表2实验过程中大鼠体重变化吋间C组C+E组D组D+E组η(M)(η=6)(η 二 6)(η 二 5)(η=5)ΓO124.4 ±7,7122.5±3.2121.3±4.4126.4±5.20.40710448.4±34.2467.3±8.7557.2±25.f0.00018531.9±37.6474.3±24.9"468.2±29.ι 397.6±13./αφ0.000同一时间点内，与C组比*P < 0.01 ;与C+E组比aP < 0.01 ;与D组比p < O. 05。备注C组为正常对照组，C+E组为正常对照加用Exenatide处理组，D组为糖尿病模型组，D+E 组为糖尿病加用Exenatide处理组；其中C+E组及D+E组从第10周起开始予Exenatide 5 μ g/d,皮下注射一日一次处理。
各组大鼠血糖监测结果实验开始时，四组大鼠基础空腹血糖无明显统计学差异9/17 页iP =0. 663)。10周后，予高脂饲料喂养的D组和D+E组大鼠空腹血糖与随机血糖均较普通饲料喂养的C组及C+E组大鼠血糖升高，但四组大鼠血糖无明显统计学差异Gd =0. 091和 P =0. 135)。而在小剂量STZ注射(30mg/kg体重)后，D组与D+E组大鼠随机血糖均较注射前显著升高，稳定在> 16.7mmol/L的水平，两组之间无明显统计学差异O°>0. 05)。而采用柠檬酸缓冲液等体积注射后的C组及C+E组大鼠其血糖注射前后无明显变化。同一时间点比较(STZ注射后3天)，D组与D+E组大鼠随机血糖也较C组与C+E组显著升高G°〈0. 01)。 诱导模型组大鼠成糖尿病后8周，D组大鼠空腹血糖持续升高，显著高于其他三组大鼠空腹血糖(7X0. 01)。而D+E组大鼠经过Exenatide皮下注射干预8周后，血糖显著低于未受干预的D组大鼠0°〈0. 01),但仍高于C组及C+E组(/X0. 01)。而经过Exenatide皮下注射干预8周后的C+E组大鼠空腹血糖也低于C组，出现统计学意义0°〈0. 05)，详细数据如表3和表4所示。
表3实验过程中大鼠空腹血糖变化
权利要求
1.一种用于确定GLP-I类似物对2型糖尿病血糖调控机制的设备，其特征在于，所述设备包括动物代谢笼、尾部固定夹子；所述动物代谢笼内设有网格板，所述网格板将动物代谢笼分为上下两部分，动物代谢笼还设有进出代谢笼的门，动物代谢笼的侧壁上设有进水孔和尾巴伸出孔。
2.根据权利要求I所述的设备，其特征在于，所述进水孔和尾巴伸出孔分别设置在动物代谢笼的相对两个侧壁上。
3.根据权利要求I所述的设备，其特征在于，所述设备还包括尾部放置台，所述尾部放置台的上表面与尾巴伸出孔下表面平齐。
4.根据权利要求I所述的设备，其特征在于，所述动物代谢笼内网格板下方还设有台板。
5.根据权利要求I或4所述的设备，其特征在于，在动物代谢笼侧面设有卡口，所述网格板和台板通过该卡口插入并固定在动物代谢笼中。
6.根据权利要求I所述的设备，其特征在于，所述装置还包括动物保定器，所述动物保定器具有一端开口的筒状形状。
7.根据权利要求I所述设备，其特征在于，所述动物保定器一端开口具有圆形或椭圆形的开口截面，所述开口截面中部向上凸出或向下凹进。
8.根据权利要求I所述的设备，其特征在于，所述尾部固定夹子包括相对的两个夹片，所述夹片中间部具有圆弧形凹部，夹片两端设有连接固件。
9.根据权利要求8所述的设备，其特征在于，所述圆弧形凹部内侧面铺设有弹性垫子。
10.根据权利要求I所述的设备，其特征在于，所述设备还包括用于插入动物尾部的尾静脉的静脉留置针。
全文摘要
本发明提供一种用于确定GLP-1类似物对2型糖尿病血糖调控机制的设备及其应用，所述设备包括动物代谢笼、尾部固定夹子；所述动物代谢笼内设有网格板，所述网格板将动物代谢笼分为上下两部分，动物代谢笼还设有进出代谢笼的门，动物代谢笼的侧壁上设有进水孔和尾巴伸出孔。本发明提供的设备适用于在不同动物体上测试GLP-1类似物在确定血糖调控机制，该设备使用方便，可以便捷、快速确定出2型糖尿病血糖调控机制。
文档编号A01K15/02GK102920526SQ20121044044
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月7日 优先权日2012年11月7日
发明者陆颖理, 夏芳珍, 吴晖, 翟华玲, 杜世春, 孟盈, 许潇 申请人:上海交通大学医学院附属第九人民医院