专利名称：水稻盐胁迫相关基因sidp361及其编码蛋白与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及水稻基因，特别涉及水稻耐盐抗性相关基因SIDP361及其编码蛋白与
应用。
背景技术：
农业生产是在自然环境中进行的“开放式”的大生产，经常会遇到不良的环境条件，当土壤中盐碱成分过多时，就会产生盐害。盐害是限制农业生产的一个重要因素。据统计，目前全世界约20%的耕地受到盐害威胁，我国约有I. 4亿亩盐碱化耕地，主要分布在东北、华北、西北内陆地区以及长江以北的沿海地区。随着我国人口的剧增、耕地日趋减少和淡水资源不足等原因，次生盐碱化土壤面积还在继续扩大，给农业生产造成重大损失。水稻是人类赖以生存的主要粮食作物之一，全世界约有50%的人口以稻米为主要食物来源，在我国更高达65%。各种胁迫中，干旱和盐碱是影响水稻生长和产量的主要的环境因子。解决这一问题的一个重要途径就是改良水稻的抗逆性，提高其对非生物逆境的适应性，从而减少产量损失，扩大水稻种植范围。在植物中，通过增强或者干扰某个或某些相关基因，尤其是抗性相关基因的表达可以影响植物对逆境的抗性。超量表达某个基因在植物抗逆改良应用的报道很多，在水稻中，超量表达受低温和高盐诱导的Os⑶PK7 (钙离子依赖型蛋白质激酶)基因使转基因水稻对低温、干旱和盐胁迫的耐性增强，并且Os⑶PK7表达量越高的基因水稻对胁迫的耐性就越强；0s⑶PK7的超量表达还能加强盐胁迫条件下salT、rabl6A等应答基因的诱导(I、SaijoY, Hata S, Kyozuka J, Shimamoto K, Izui K. Overexpression ofa single Ca2+_dependent potein kinase confers both cold and salt/droughttolerance on riee plants[J]. Plant J, 2000，23:319-327 ;2、Sai jo Y, KinoshitaN, Ishiyama K,Hata S,Kyozuka J,HayakawaT, NakamuraT,Shimamoto K,YamayaT,Izui K. A Ca2+-dependent protein kinase that endows rice plants withcold-and salt-stress tolerance functions in vascular bundles [J]. Plant CellPhysiol, 2001, 42:1228-1233.)。有研究报道，分别超量表达 SNAC1、SNAC2 或 NAC6 (转录因子)基因都能提高转基因植株的耐旱性和抗盐性，基因芯片分析，超量表达这些转录因子的水稻中，许多胁迫相关基因的表达都明显的上调(3、Honghong Hu. Overexpressinga NAM, ATAF, and CUC(NAC) transcription factor enhances droug-ht resistance andsalt tolerance in rice[J].Proc Natl Acad Sci USA, 2006，103(35):12987-12992 ;
4、HonghongHu, Jun You, Yujie Fang, Xiaoyi Zhu;Zhuyun Qi,Lizhong Xiong.Characterization of transcription factor gene SNA C2conferring cold andsalt tolerance in rice[J]. Plant Molecular Biology, 2008, 67(1-2):169-181 ；
5、KazuoNakashima, Lam—Son P. Tran,Dong Van Nguyen, Miki Fujita, KyonoshinMaruyama, Daisuke Todaka, Yusuke Ito, Nagao Hayashi, Kazuo Shinozaki, KazukoYamaguchi-Shinozaki. Functional analysis of a NAC—type transcription factorOsNAC6involved in abiotic and biotic stress-responsive gene expression inrice [J], The Plant Journal, 2007, 51 (4) :617-630. ) 另有研究表明在水稻中超量表达P5CS (Λ’ - 二氢吡咯啉-5-羧酸合成酶)基因，转基因植株中的脯氨酸含量明显提高，而且耐盐性也显著增强(6、IGARASHI Y, Y0SHIBA Y, SANADA Y. Characterization ofthe gene forΔ1-pyrroline-5—carboxylate synthetase and correlation betweentheexpression of the gene and salt tolerance in Oryza sativa L[J]. Plant MolBiol, 1997, 33(5) :857-865.)。
发明内容
本发明的第一目的在于提供水稻盐胁迫相关基因SIDP361。本发明的第二目的在于提供水稻盐胁迫相关基因SIDP361编码的蛋白。本发明的第三目的在于提供水稻盐胁迫相关基因SIDP361在培育耐盐抗性增强·的水稻中的应用。所述水稻盐胁迫相关基因SIDP361的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID No 1所
/Jn ο所述水稻盐胁迫相关基因SIDP361编码的蛋白的氨基酸序列如序列表中的SEQ IDNo 2所示。所述水稻盐胁迫相关基因SIDP361可用于提高水稻对盐胁迫的抗性，培育耐盐抗性增强的水稻。所述培育耐盐抗性增强的水稻可采用如下方法构建水稻盐胁迫相关基因SIDP361的超量表达载体，并将其转化到水稻，筛选获得耐盐抗性增强的水稻。所述表达载体可为Ti类质粒载体；所述转化可采用农杆菌介导转化法或基因枪介导转化法等，优选农杆菌介导转化方法。在盐胁迫条件下，本发明中的水稻盐胁迫相关基因SIDP361的超量表达转基因植株株系的生物量和株高平均值显著高于对照，表明该基因的超量表达能够显著提高转基因水稻对盐胁迫的抗性。本发明为培育耐盐抗性增强的水稻提供了一条重要途径。而生产上栽培耐盐抗性增强的水稻，对有效利用盐碱土地、增加粮食产量等具有重要意义。
图I为本发明实施例中SIDP361基因超量表达转基因水稻植株的PCR检测电泳图(扩增Hyg基因1421bp片段)。在图I中，M为DL 2000DNA Marker，编号I以野生型水稻植株DNA为模板扩增，编号2以阳性质粒DNA为模板扩增，编号3 8以转基因水稻植株DNA为模板扩增。根据最终表达载体PH7WG2上潮霉素Hyg基因序列设计引物，用于转基因植株的鉴定。图2为本发明实施例中SIDP361基因超量表达转基因水稻植株的PCR检测电泳图(启动子P35S的942bp片段)。在图2中，M为DL 2000DNA Marker，编号I以野生型水稻植株DNA为模板扩增，编号2以阳性质粒DNA为模板扩增，编号3 8以转基因水稻植株DNA为模板扩增。根据最终表达载体PH7WG2上P35S启动子序列设计引物，用于转基因植株的鉴定。图3为SIDP361基因在T1代超量表达转基因水稻植株中的相对表达水平。在图3中，横坐标为不同水稻植株，其中WT为野生型水稻植株，SI和S2分别为Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株株系；纵坐标为SIDP361基因相对表达水平，柱形图上的竖线代表3个技术重复的标准误差，“**”表示SIDP361基因在超量表达转基因水稻植株与野生型植株之间表达水平存在极显著差异(P〈0. 01)。图4为Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株在Ommol/L，200mmol/L NaCl处理12天后株高平均值。图5为Tl代SIDP361基因超量表达野生型水稻植株在Ommol/L，200mmol/L NaCl处理12天后生物量平均值。在图4和图5中，WT为野生型水稻植株，SI和S2分别Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株株系，柱形图代表生物量或株高的平均值，其上竖线代表标准误差，
表示SIDP361基因超量表达转基因水稻植株与野生型植株之间的生物量或株高平均值存在极显著差异(P〈0. 01)。图6为盐处理2天后，两个Tl代超量表达转基因水稻植株与野生型植株的脯氨酸含量对比图。在图6中，WT为野生型水稻植株，SI和S2为SIDP361基因超量表达转基因植株株系，柱形图代表脯氨酸平均含量，其上竖线代表标准误；“**”表示SIDP361基因超量表达转基因株系与野生型植株之间的脯氨酸平均含量存在极显著差异(P〈0. 01)。图7为Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株和野生型水稻植株在200mmol/LNaCl处理O小时(横坐标中的unstressed)、3小时(横坐标中的salt stressed)后体内胁迫相关基因(P5CS ( Δ ^pyrroline-S-carboxylate synthetase, Δ 卩比咯啉-5-羧酸合成酶基因))的相对表达量。图8为Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株和野生型水稻植株在200mmol/LNaCl处理O小时(横坐标中的unstressed)、3小时(横坐标中的salt stressed)后体内胁迫相关基因(NCED3 (9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase, 9_顺式-环氧类胡萝
卜素双加氧酶基因))的相对表达量。图9为Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株和野生型水稻植株在200mmol/LNaCl处理O小时(横坐标中的unstressed)、3小时(横坐标中的salt stressed)后体内胁迫相关基因(DSM2 ( β-Carotene Hydroxylase gene, β胡萝卜素轻化酶基因))的
相对表达量。图10为Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株和野生型水稻植株在200mmol/LNaCl处理O小时(横坐标中的unstressed)、3小时(横坐标中的salt stressed)后体内胁迫相关基因(NAC5 (NAC transcription factor gene, NAC转录因子基因))的相
对表达量。图11为Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株和野生型水稻植株在200mmol/LNaCl处理O小时(横坐标中的unstressed)、3小时(横坐标中的salt stressed)后体内胁迫相关基因(SNAC1 (stress-responsive NAC transcription factor lgene,胁迫响应的NAC转录因子基因))的相对表达量。图12为Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株和野生型水稻植株在200mmol/LNaCl处理O小时(横坐标中的unstressed)、3小时(横坐标中的salt stressed)后体内胁迫相关基因(SNAC2 (stress-responsive NAC transcription factor 2gene,胁迫响应的NAC转录因子基因))的相对表达量。图13为Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株和野生型水稻植株在200mmol/LNaCl处理O小时(横坐标中的unstressed)、3小时(横坐标中的salt stressed)后体内胁迫相关基因(DREBIA(dehydration responsive element binding protein IAgene,脱水应答元件结合蛋白IA基因))的相对表达量。图14为Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株和野生型水稻植株在200mmol/LNaCl处理O小时(横坐标中的unstressed)、3小时(横坐标中的salt stressed)后体内胁迫相关基因(DREB2A(dehydration responsive element binding protein 2Agene,脱水应答元件结合蛋白2A基因))的相对表达量。
图15为Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株和野生型水稻植株在200mmol/LNaCl处理O小时(横坐标中的unstressed)、3小时(横坐标中的salt stressed)后体内胁迫相关基因(LEA3 (late embryogenesis abundant protein gene,晚期胚胎富集蛋白基因))的相对表达量。图16为Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株和野生型水稻植株在200mmol/LNaCl处理O小时(横坐标中的unstressed)、3小时(横坐标中的salt stressed)后体内胁迫相关基因(LEA3-1 (late embryogenesis abundant protein gene,晚期胚胎富集蛋白基因))的相对表达量。图17为Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株和野生型水稻植株在200mmol/LNaCl处理O小时(横坐标中的unstressed)、3小时(横坐标中的salt stressed)后体内胁迫相关基因(Rabl6a(abscisic acid-responsive rice gene,脱落酸应答基因))的相对表达量。图18为Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株和野生型水稻植株在200mmol/LNaCl处理O小时(横坐标中的unstressed)、3小时(横坐标中的salt stressed)后体内胁迫相关基因(Rabl6b (abscisic acid-responsive rice gene,脱落酸应答基因))的相对表达量。在图7 18中，WT为野生型水稻植株，SI和S2分别Tl代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株株系，标记柱形代表胁迫相关基因的平均表达量，其上竖线代表标准误差，
表示SIDP361基因超量表达转基因水稻植株与野生型植株之间胁迫相关基因平均表达量存在显著差异(P〈0. 05)。“**”表示SIDP361基因超量表达转基因水稻植株与野生型植株之间胁迫相关基因平均表达量存在极显著差异(P〈0. 01)。
具体实施例方式以下实施例将对本发明作进一步的说明实施例I水稻盐胁迫相关基因SIDP361的获得与超量表达载体的构建通过生物信息学分析从植物中鉴定出了一类新的未知功能的基因家族DUF1644，该家族有可能作为一类新的转录因子，在水稻的胁迫应答中发挥了重要的作用。但是，DUF1644家族基因与抗逆的关系目前尚未有任何报道。基因SIDP361是水稻DUF1644基因家族的成员之一。根据SIDP361基因cDNA核酸序列，合成一对引物SIDP361-S和SIDP361-A SIDP361-S :5’CACCATGCCAAAGGACAGGAGC 3’SIDP361-A :5’TCAATGTGCAGGATCACCA 3’其中正向引物SIDP361-S中引入TOPO克隆识别位点，以便用TOPO克隆方法将基因DNA片断克隆于pENTR/D-TOPO载体上。用上述引物，并以水稻叶片cDNA为模板，进行PCR扩增，以获得SIDP361基因cDNA片断。PCR 的扩增条件为 95°C预变性 5min ;95°C变性 30s，63°C退火 30s，72°C 60s, 30 个 循环；72°C延伸7min。回收目标981bp cDNA 片断，按照 pENTR Directional TOPO Cloning Kits(购自Invitrogen，USA)试剂盒的操作说明将此DNA片断克隆于pENTR/D-T0P0载体上，挑选阳性重组克隆进行测序，将测序结果正确的阳性克隆命名为T0P0-GL-SIDP361 ;提取T0P0-GL-SIDP361 和超量表达载体 pH7WG2 质粒 DNA，取 50ng 的 T0P0-GL-SIDP361 和 IOOng的 pH7WG2 质粒 DNA,参考 Gateway LR clonase II Enzyme Mix (Invitrogen, USA)操作说明书配制反应体系，通过Gateway LR重组反应将SIDP361基因981bp的cDNA片断连接于超量表达盒中。pH7WG2表达载体资料参见文献(Karimi, M. , Inze, D. , Depicker, A.,Gateway vectors for Agobacterium—mediated plant transformation. Trends PlantSci. 2002May;7(5) :193-195.)。用SIDP361-S和SIDP361-A引物进行菌落PCR鉴定筛选阳性重组克隆，并将阳性重组克隆命名为PH7WG2-SIDP361 ;取I μ g pH7WG2_SIDP361质粒DNA转化农杆菌EHA105 ；菌落PCR鉴定抗性平板上的农杆菌克隆，可得到阳性农杆菌克隆，向其菌液中加入20%甘油，保存于_80°C备用。实施例2水稻盐胁迫相关基因SIDP361基因超量表达载体转化水稻及PCR检测鉴
定农杆菌悬浮液的配制取20 μ L含pH7WG2-SIDP361质粒的农杆菌甘油保存液，接种于IOmL LB (含50mg/L卡那霉素和50mg/L利福平)中，28°C振荡培养过夜，离心收集菌体，用适当体积AAM培养液重悬,使农杆菌悬浮液OD6tltl值在0. 3 I之间,最后加入乙酰丁香酮使之最终浓度达到50mg/L。取台北309成熟种子，脱壳后，用体积比例为1/3的次氯酸钠溶液(活性氯约为3%)，表面消毒30min，用无菌水清洗2 5遍；在无菌滤纸上晾干后，接种于NBD的诱导培养基中，在28°C黑暗的条件下诱导愈伤组织，2周后将愈伤组织在新鲜诱导培养基上继代培养。取新鲜生长旺盛的愈伤组织，浸泡在农杆菌悬浮液中，静置30min，倒去农杆菌悬浮液，将愈伤组织置于无菌滤纸上晾干，然后转移到NBD-AS共培养培养基上(加50mg/L乙酰丁香酮，并预先在共培养培养基上垫一张无菌滤纸)，接着置于19 23°C黑暗条件下共培养3天。3天后，将共培养愈伤组织取出，用无菌水洗净农杆菌，并置于无菌滤纸上晾干，然后转移到NBD-S筛选培养基(加50mg/L潮霉素和400mg/L羧苄青霉素)上，于28°C黑暗条件下培养若干周，期间大部分愈伤组织逐渐褐化，少部分愈伤组织可以长出淡黄色、松散的生长较旺盛的新鲜抗性愈伤组织。将此抗性愈伤组织在筛选培养基上继代培养I周后，转移至MS-R分化培养基上，进行分化培养，抗性愈伤组织在2周左右可以开始分化出绿色的再生苗，分化的再生苗继续在MS-HF生根培养基上培养，待根基本长成，可移栽到营养土中，随后移栽至田间。其中所述AAM培养液、NBD-AS共培养培养基、NBD-S筛选培养基、MS-R分化培养基和MS-HF生根培养基配方可参考文献(Nishimura，A.，I.Aichi, et al. (2006) · 〃A protocol for Agrobacterium-mediated transformation inrice. "Nature Protocols I (6):2796-2802)。分别取上述转化苗的叶片，提取基因组DNA，并以基因组DNA为模板，用以下2对特异引物Hyg-S/A和P35S-S/A进行PCR检测Hyg-S :5’TATGATAATCATCGCAAGAC 3’Hyg-A :5’ TTCAAAAGTCGCCTAAGGTC 3’·
P35S-S :5’CTCCAAATGAAATGAACTTCCT 3’P35S-A :5’AAGCTGATCTCCTTTGCCC 3’由于引物Hyg-S/A靶向潮霉素基因DNA，引物P35S-S/A靶向花椰菜花叶病毒(CaMV) 35S启动子DNA，因而可以用于检测阳性转基因植株，而在检测野生型植株时预期结果呈阴性。在对转基因植株进行PCR检测鉴定后，琼脂糖凝胶电泳结果显示，编号3 8的转基因植株检测结果为阳性，即能分别特异扩增到大约1421bp (潮霉素基因DNA)和942bp (花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子DNA)的目标DNA条带，而以野生型植株(编号I)基因组DNA为模板的PCR的检测结果均为阴性，即不能特异扩增到大约1421bp (潮霉素基因DNA)和942bp (花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子DNA)的目标DNA条带(参见图I和图2)。实施例3T1代SIDP361基因超量表达转基因水稻植株中的SIDP361基因表达及其对盐胁迫的抗性分析分别对两个Tl代超量表达转基因植株株系和野生型植株的SIDP361基因表达进行定量分析和耐盐抗性鉴定。取Tl代SIDP361基因超量表达转基因植株的种子和野生型水稻种子，分别播种后，按常规栽培方法进行栽培，待植株长两星期后，对野生型植株和两个Tl代SIDP361基因超量表达转基因植株的SIDP361基因表达进行定量分析，并鉴定转基因植株对盐胁迫的抗性。具体操作方法如下分别从野生型植株和SIDP361基因超量表达转基因植株各取适量叶片，并从中提取总RNA，然后将其反转录成cDNA。分别以这些cDNA为模板，用基因特异引物对Actin-rq-S/Actin-rq-A 和 SIDP361-rq-S/SIDP361_rq-A 分别对样品中 Actin 基因和SIDP361基因进行定量分析。分析基因表达水平时，以Actin基因为内标基因，用相对表达量计算方法(Pfaffl MW. A new mathematical model for relative quantification inreal-time RT-PCR[J]. Nucleic Acids Res. 2001, 29(9) :2002-2007.)分析SIDP361 基因在不同转基因植株中的相对表达水平。在基因表达的定量分析中，每个基因至少重复2次荧光定量PCR实验，每次实验设置3个技术重复。通过上述方法分析SIDP361基因在Tl代SIDP361基因超量表达转基因植株和野生型植株中的相对表达水平，结果显示，SIDP361基因在两个Tl代SIDP361基因超量表达转基因植株株系中的相对表达水平分别约为野生型植株的4. 99和6. 23倍(参见图3)。由此可见，在Tl代SIDP361基因超量表达转基因植株中，SIDP361基因的表达水平明显提高。所用引物序列为Actin-rq-S 5’TGTATGCCAGTGGTCGTACCA 3’Actin-rq-A 5，CCAGCAAGGTCGAGACGAA 3’SIDP361-rq-S 5’GTTTCGCCGTACCCCTCC 3’SIDP361-rq-A 5，CCTCCCATTCCGCAGCCT 3，将野生型和Tl代种子播种到含Ommol/L和200mmol/L NaCI的1/2MS液体培养基上，生长12天后统计生物学产量株高和幼苗的生物量，鉴定这些转基因植株对盐胁迫 的抗性。株高和生物量数据的统计分析用origin 8. O软件附带的统计程序进行平均值差异显著性或极显著分析。对两个Tl代SIDP361基因超量表达转基因植株株系和野生型植株的株高和生物量数据进行统计分析，每个株系至少测量30个植株，设置3次重复实验。结果显示，200mmol/LNaCl处理12天后，两个Tl代SIDP361基因超量表达转基因植株株系SI和S2的平均株高分别为3. 13±0. 20cm、3. 93±0. 20cm，而野生型植株株高平均长度约为O. 89±0. 03cm，极显著(“**”，P〈0. 01)短于转基因植株株系株高的平均长度(参见图4);两个Tl代SIDP361基因超量表达转基因植株株系SI和S2的生物量平均值分别为59. 46±1. 34mg、62. 81 ± I. 04mg，而野生型植株生物量平均值约为38. 99±0. 90mg，极显著(“**”，？〈0.01)小于转基因植株株系生物量的平均值(参见图5)。结果表明，与野生型水稻植株相比，Tl代SIDP361基因超量表达转基因植株对高盐胁迫的抗性显著增强。实施例4SIDP361超量表达植株的游离脯氨酸含量检测分别检测了超量表达转基因株系和野生型在正常条件下和逆境条件处理后体内游离脯氨酸含量的变化。正常条件下，两个SIDP361超量表达转基因植株株系SI和S2体内的游离脯氨酸含量分别为52. 57±4. 01 μ g · g_1Fw,49. 93±3· 06μ g · g^Fw ;野生型植株体内的游离脯氨酸含量为50. 24±2. 79μ g · g^Fw。200mmol/L NaCl处理2天后，两个SIDP361超量表达转基因植株株系SI和S2体内的游离脯氨酸含量分别为421. 78 ±12. 43μ g · g^Fw,455. 11 ± 11. 08 μ g · g—Vw，野生型植株体内的游离脯氨酸含量为132. 32±5. 98μ g · g—Vw。在盐胁迫条件下，SIDP361超量表达转基因植株内累计的游离脯氨酸含量极显著(“**”，P〈0. 01)的高于野生型植株的游离脯氨酸含量(参见图6)，说明盐胁迫下，转基因植株可以通过更快更多的合成渗透保护物质来提高其耐盐性。实施例5SIDP361超量表达对非生物胁迫相关基因表达的影响分别从正常培养条件下和200mmol/L NaCl处理3小时后的野生型植株和SIDP361基因超量表达转基因植株取适量叶片，并提取总RNA，然后将其反转录成cDNA。分别以这些cDNA为模板，用胁迫相关基因特异引物对样品中胁迫相关基因进行定量分析。分析基因表达水平时，以Actin基因为内标基因，用相对表达量计算方法(如实施例3所述)分析胁迫相关基因在不同环境下的野生型和转基因植株中的相对表达水平。在基因表达的定量分析中，每个基因至少重复2次荧光定量PCR实验，每次实验设置3个技术重复。通过上述方法分析胁迫相关基因在Tl代SIDP361基因超量表达转基因植株和野生型植株中的相对表达水平，结果显示，在正常条件下或盐胁迫后，胁迫相关基因在两个Tl代SIDP361基因超量表达转基因植株株系中的相对表达水平均有不同程度的上调表达(参见图T图18)，说明SIDP361基因能通过上调胁迫相关基因的表达水平增强转基因植株的耐盐性。所用引物序列为SNACl-rq-S5’ATCCCTCACAACCCACAA 3’SNACl-rq-A5’GTCCCTCTCCCTCCTCAT 3’SNA C2-rq-S5’ CAAGGGCGAGAAGACCAA 3’SNAC2-rq-A5’CAGCACCCAATCATCCAAC 3’NAC5-rq-S5’AAGGGCGTCAAGACCAAC 3’NAC5-rq-A5’AACACCCAATCATCCAACC 3’ DREBIA-rq-S5’GCCTCTTTTTTCTCTCTTTTC 3’DREBIA-rq-A5’AACTTGTTCCATCACATTACC 3’DREB2A-rq-S5’GGAGGAATAGGAAGAAGGGA 3’DREB2A-rq-A5' GAGCGGGAACAAGAAAGAGA 3，NCED3-rq-S5’GGTTTGTGGCGAATGTC 3’NCED3-rq-A5’TCGTGGTGTGTTTCTG 3’DSM2-rq-S5’TGGTGGCAGCGGTGATGT 3’DSM2-rq-A5’ATGCGAGCGGGAGTTTGG 3’P5CS-rq-S5’AGCCACAGATGGAGTTAGATG 3’P5CS-rq-A5’GTCGGTGACAAGAAGTTGAGAT 3’Rabl6a-rq-S 5’GCTCAAGCTCGGTACAACA 3’Rabl6a-rq-A 5’CCTCCCATTCCATCATCCT 3’Rabl6b-rq-S 5’CATCTTACTGATAGCAACAACACT 3’Rabl6b-rq-A 5’GTCCATCCTCTCAAGCAAAT 3’LEA3-rq-S 5’GAATGATTTCCCTTTGGGTCTA 3’LEA3-rq-A 5，ACTCTGACGAAAACAACTGAAC 3’LEA3-l-rq-S 5’CGGCAGCGTCCTCCAACAG 3’LEA3-l-rq-A 5’ GCCTCGTCTTCGGTCATCC 3’。
权利要求
1.水稻盐胁迫相关基因SIDP361，其特征在于其核苷酸序列为序列表中的SEQID No:Io
2.如权利要求I所述水稻盐胁迫相关基因SIDP361编码的蛋白，其特征在于其氨基酸序列为序列表中的SEQ ID No 2o
3.如权利要求I所述水稻盐胁迫相关基因SIDP361在培育耐盐性增强的水稻中的应用。
4.如权利要求3所述水稻盐胁迫相关基因SIDP361在培育耐盐抗性增强的水稻中的应用，其特征在于采用如下方法 构建所述水稻盐胁迫相关基因SIDP361的超量表达载体，并将其转化到水稻，筛选获得所述耐盐抗性增强的水稻。
5.如权利要求4所述水稻盐胁迫相关基因SIDP361在培育耐盐抗性增强的水稻中的应用，其特征在于所述表达载体为Ti类质粒载体。
6.如权利要求4所述水稻盐胁迫相关基因SIDP361在培育耐盐抗性增强的水稻中的应用，其特征在于所述转化采用农杆菌介导转化法或基因枪介导转化法。
全文摘要
水稻盐胁迫相关基因SIDP361及其编码蛋白与应用。涉及水稻基因，提供水稻盐胁迫相关基因SIDP361及其编码蛋白与应用。水稻盐胁迫相关基因SIDP361可用于提高水稻对盐胁迫的抗性，培育高盐抗性增强的水稻。水稻盐胁迫相关基因SIDP361的超量表达转基因植株株系T1代在200mmol/L高盐环境下的株高和生物量的平均值均显著高于对照，表明超量表达该基因的转基因植株能够显著提高水稻对高盐环境的抗性。该基因为培育高盐抗性增强的水稻提供了一条重要途径。高盐抗性水稻的栽培，对有效利用盐碱土地、增加粮食产量等具有重要意义。
文档编号A01H5/00GK102899332SQ20121043970
公开日2013年1月30日 申请日期2012年11月7日 优先权日2012年11月7日
发明者陈亮, 李敏, 郝国静, 赵婷婷, 崔欣欣, 郭小玲 申请人:厦门大学