专利名称：一种简单有效的昆虫病原线虫的诱集方法
技术领域：
本发明涉及一种诱集方法，具体地，涉及一种简单有效的昆虫病原线虫的诱集方法。
背景技术：
昆虫病原线虫是指体内携带有具有病原性的共生细菌，因而能引起昆虫致病的一类线虫。昆虫病原线虫以侵染期虫态存活于土壤中，侵染期线虫不取食，独立于昆虫体外自由生活，寻找或入侵昆虫寄主。病原线虫寻找寄主的方式包括潜伏型、攻击型和中间型。线 虫对昆虫寄主有严格的识别机制，此识别行为可能受2次侵染时间间隔的影响。线虫的识别机制可防止大量线虫聚集在同一寄主体内而出现竞争。线虫感染害虫要经过侵染寄主，潜伏释放共生菌及毒素和害虫致死三个阶段，侵染阶段可进一步划分为找寻寄主，识别寄主和入侵寄主。每种病原线虫都有共生细菌，嗜线虫杆菌属(与斯氏线虫属共生)和发光杆菌属(与异小杆线虫属共生)。线虫通过自然开口或节间膜进入昆虫体内，利用病原线虫的保护，释放体内携带的共生细菌，避免了昆虫对细菌的抗性作用。进入昆虫体内后，肠内共生菌会在昆虫的血体腔中大量繁殖，产生毒素致昆虫死亡，并分解昆虫组织，以作为线虫食物来源。这种共生系统有利于生物防治害虫。昆虫病原线虫是20世纪初发展起来的一种很有潜能的生物防治因子，是昆虫的专化性寄生天敌。目前世界上有许多国家，如美国、澳大利亚、德国、新西兰、日本、埃及等国家投入大量的人力和物力研究利用线虫，致力于将线虫产品销售到世界各地。在发达国家的生物农药市场中，昆虫病原线虫这种新型杀虫剂的市场销售额仅次于苏云金芽胞杆菌，己经成功地应用于防治难于用化学农药防治的农林业害虫、地下害虫和卫生害虫，所以昆虫病原线虫这种新型生物杀虫剂具有广阔的应用前景。目前，美国、澳大利亚、荷兰、加拿大及其他一些国家的数十家公司均可提供线虫供实际应用，可商品化生产的线虫株系超过百种。我国在昆虫病原线虫的实际应用方面也进行了大量研究，利用线虫防治土栖性害虫及钻蛀性害虫均取得了较好防治效果。因此，可以预计昆虫病原线虫在未来的农业害虫生物生态控制系统中将会发挥重要的作用。我国幅员辽阔，可以预计昆虫病原线虫资源非常丰富，目前已有部分省份开始对昆虫病原线虫资料进行调查和开发研究，传统的昆虫病原线虫诱集方法需采集大量的土样，再带回实验室进行分离诱集，工作量和时间的损耗都较大，不利于工作的开展。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种简单有效的诱集方法，通过本方法可以有效的节省时间和人力。为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案
一种简单有效的昆虫病原线虫的诱集方法，包括如下步骤
(I)将10*20cm、100目的铁丝袋套进10*20cm的布袋中，防止大蜡螟咬破布袋逃逸；(2)在布袋中放置5头经过滞育处理的大蜡螟幼虫；所述滞育处理为用56°C灭菌水浸洗大蜡螟5龄幼虫15s，漏去热水后立即用自来流水淋洗大蜡螟，冷却后用吸水纸吸干昆虫体表水珠，备用；
(3)在选定的地点将布袋埋在离土表IOcm深处；
(4)每天检查布袋内大蜡螟被侵染情况；
(5)如发现有死亡大蜡螟，将袋内死亡的大蜡螟放入有滤纸的无菌培养皿中干燥36h-48h后，将其横排在收集盘中的滤纸条上，倒入浓度为质量比O. 1%的甲醛溶液；置于于室温条件下，待线虫游入甲醛溶液时即可收集，此时收集的昆虫病原线虫即为抗逆性3龄幼虫，保存于4°C的冰箱中。具体地，所述方法还包括步骤(6)昆虫病原线虫的检验用诱集到的线虫侵染大 蜡螟或其他寄主昆虫，观察测定该线虫对害虫的致死症状和致病力；观察供试大蜡螟或其他寄主昆虫是否死亡,如果死亡,是否有线虫从虫尸内爬出，如有线虫从虫尸内爬出，用收集到的线虫再侵染大蜡螟，观察大蜡螟是否死亡，如果死亡，则为昆虫病原线虫。本发明中，昆虫病原线虫也简称线虫。本发明的有益效果
本发明的方法能够大量减小诱集的工作量和时间的损耗，具有简单有效、节省人力物力的优点。
具体实施例方式一种简单有效的昆虫病原线虫的诱集方法，包括如下步骤
(1)将10*20cm、100目的铁丝袋套进10*20cm的布袋中，防止大蜡螟咬破布袋逃逸；
(2)在布袋中放置5头经过滞育处理的大蜡螟幼虫；所述滞育处理为用56°C灭菌水浸洗大蜡螟5龄幼虫15s，漏去热水后立即用自来流水淋洗大蜡螟，冷却后用吸水纸吸干昆虫体表水珠，备用；
(3)在选定的地点将布袋埋在离土表IOcm深处；
(4)每天检查布袋内大蜡螟被侵染情况；
(5)如发现有死亡大蜡螟，将袋内死亡的大蜡螟放入有滤纸的无菌培养皿中干燥36h-48h后，将其横排在收集盘中的滤纸条上，倒入浓度为质量比O. 1%的甲醛溶液；置于于室温条件下，待线虫游入甲醛溶液时即可收集，此时收集的昆虫病原线虫即为抗逆性3龄幼虫，保存于4°C的冰箱中。诱集之后，为检验有效性，本发明还包括步骤(6)昆虫病原线虫的检验用诱集到的线虫侵染大蜡螟或其他寄主昆虫，观察测定该线虫对害虫的致死症状和致病力；观察供试大蜡螟或其他寄主昆虫是否死亡，如果死亡，是否有线虫从虫尸内爬出，如有线虫从虫尸内爬出，用收集到的线虫再侵染大蜡螟，观察大蜡螟是否死亡，如果死亡，则为昆虫病原线虫。本发明的方法能够大量减小诱集的工作量和时间的损耗、具有简单有效、节省人力物力的优点。最后应说明的是以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的 保护范围之内。
权利要求
1.一种简单有效的昆虫病原线虫的诱集方法，其特征在于，包括如下步骤 (1)将10*20cm、100目的铁丝袋套进10*20cm的布袋中，防止大蜡螟咬破布袋逃逸； (2)在布袋中放置5头经过滞育处理的大蜡螟幼虫；所述滞育处理为用56°C灭菌水浸洗大蜡螟5龄幼虫15s，漏去热水后立即用自来流水淋洗大蜡螟，冷却后用吸水纸吸干昆虫体表水珠，备用； (3)在选定的地点将布袋埋在离土表IOcm深处； (4)每天检查布袋内大蜡螟被侵染情况； (5)如发现有死亡大蜡螟，将袋内死亡的大蜡螟放入有滤纸的无菌培养皿中干燥36h-48h后，将其横排在收集盘中的滤纸条上，倒入浓度为质量比0. 1%的甲醛溶液；置于于室温条件下，待线虫游入甲醛溶液时即可收集，此时收集的昆虫病原线虫即为抗逆性3龄幼虫，保存于4°C的冰箱中。
2.根据权利要求1所述的简单有效的昆虫病原线虫的诱集方法，其特征在于，所述方法还包括步骤(6)昆虫病原线虫的检验用诱集到的线虫侵染大蜡螟或其他寄主昆虫，观察测定该线虫对害虫的致死症状和致病力；观察供试大蜡螟或其他寄主昆虫是否死亡，如果死亡，是否有线虫从虫尸内爬出，如有线虫从虫尸内爬出，用收集到的线虫再侵染大蜡螟，观察大蜡螟是否死亡，如果死亡，则为昆虫病原线虫。
全文摘要
本发明公开了一种简单有效的昆虫病原线虫的诱集方法，包括(1)将10*20cm、100目的铁丝袋套进10*20cm的布袋中；(2)在布袋中放置5头经过滞育处理的大蜡螟幼虫；(3)在选定的地点将布袋埋在离土表10cm深处；(4)每天检查大蜡螟被侵染情况；(5)昆虫病原线虫的收集。本发明的方法能够大量减小诱集的工作量和时间的损耗、具有简单有效、节省人力物力的优点。
文档编号A01M1/10GK103004726SQ201210582918
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月28日 优先权日2012年12月28日
发明者钱秀娟, 刘长仲, 张奎花, 谷黎娜, 张芸, 邢玉芳 申请人:甘肃农业大学