专利名称：防治辣椒疫病的生防菌株htc及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种防治辣椒疫病的生防菌株HTC及其应用。
背景技术：
辣椒疫病是由辣椒疫霉(Phytophthora capsici)引起的一种卵菌病害。疫霉菌隶属卵菌门、霜霉目、腐霉科、疫霉属。疫霉菌在土壤中存活不是以一种形态，而是以不同形态即菌丝体、孢子囊、厚垣孢子和卵孢子等多种互变方式存活。该病可以通过雨水与灌溉水，农用器具进行传播，是一种危害性很强的土传病害。随着我国辣椒大量种植，辣椒疫病在露地、保护地与大棚也大面积发生，因为该病害发病周期短，流行速度快，常导致辣椒植株成片死亡，给辣椒产业带来严重的经济损失。一般病株率为20 - 30%，严重时达80%以上，此病害是影响我国辣椒产业经济发展的主要因素之一。辣椒疫霉是一种异宗配合的微生物，它有2种主要的交配型:A1型和A2型。Groves等认为，由于近年来杀菌剂的广泛使用，使辣椒疫霉产生了抗药性，从而诱导其交配型的变化，给该病害的防治带来很多困难。苯基酰胺类杀菌剂甲霜灵(metalaxyl)和精甲霜灵(mefenoxam)等专用杀菌剂被广泛用于防治该病害，是目前国内外广泛使用的卵菌病害防治药剂中活性高、使用量大的一类杀菌剂，并取得了良好的防治效果。但由于该类药剂属于特异性位点抑制剂，对病原菌作用位点单一，长期使用极易产生抗药性，导致防治效果下降。甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂是防治辣椒疫病的又一重要的内吸性杀菌剂，由于其作用机制新颖，与苯基酰胺类杀菌剂无交互抗性，目前被广泛使用。但已有研究表明，某些病原菌靶标对该类药剂产生抗药性自发突变频率较高，在药剂的高选择压力下病原菌易形成抗药性群体。综上所述，开发新的、有`效和安全的微生物杀菌剂控制辣椒疫病的发生是提高辣椒生产总量的需求，同时更是辣椒产业经济、辣椒食用安全及农业可持续发展的需要。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种金色毛壳Chaetomium aureum菌株HTC。本发明提供的金色毛壳Chaetomium aureum菌株HTC,其保藏号为CGMCCN0.6173。本发明的另一个目的是提供一种制备防治辣椒疫病HTC生防制剂的方法。本发明提供的方法,包括如下步骤:发酵上述的金色毛壳Chaetomium aureum菌株HTC，得到发酵产物，即得到生防制剂。上述方法中，在所述得到发酵产物后，还包括如下步骤:去除所述发酵产物中的菌丝体，得到生防制剂。上述方法中，所述发酵的条件如下:25-28°C，160-180rpm振荡培养10_12d ;所述发酵的条件具体如下:25°C、160rpm振荡培养12d。
由上述方法制备的生防制剂也是本发明保护的范围。上述生防制剂中干物质的浓度为400_600μ g/ml，在本发明的实施例中使用时稀释至Ij 40 μ g/ml O本发明的第三个目的是提供一种防治辣椒疫病或促进辣椒生长或者促进辣椒增产或抗菌的产品。本发明提供的产品，其活性成分为上述的金色毛壳Chaetomium aureum菌株HTC或上述的HTC生防制剂。上述产品中，所述辣椒疫病为由辣椒疫霉Phytophthora capsici引起；所述抗菌为抗如下8种病原菌中的至少一种:辣椒疫霉Phytophthora capsic1、杨树腐烂病菌Valsa sordida、小麦赤霉病菌Fusarium graminearum、核桃炭疽病菌 Colletotrichum gloeosporioides、烟草赤星病菌 Alternaria alternata、杨树水泡溃瘍病菌Botryosphaeria ribis、玉米纹枯病菌Rhizoctonia solan1、板栗疫病菌Cryphonectria parasitica ；所述促进辣椒生长体现在提高辣椒株高或增加辣椒生物量或增加辣椒产量。上述的金色毛壳Chaetomium aureum菌株HTC或上述的HTC生防制剂在防治辣椒疫病或促进辣椒生长或者促进辣椒增产或抗菌中的应用。上述应用中，所述辣椒疫病为由辣椒疫霉Phytophthora capsici引起；所述抗菌为抗如下8种病原菌中的至少一种:辣椒疫霉Phytophthora capsic1、杨树腐烂病菌Valsa sordida、小麦赤霉病菌Fusarium graminearum、核桃炭疽病菌 Colletotrichum gloeosporioides、烟草赤星病菌 Alternaria alternata、杨树水泡溃瘍病菌Botryospha eria ribis、玉米纹枯病菌Rhizoctonia solan1、板栗疫病菌Cryphonectria parasitica ；所述促进辣椒生长体现在提高辣椒株高或增加辣椒生物量或增加辣椒产量。防治辣椒疫病的菌株HTC，为毛壳属金色毛壳菌(Chaetomium aureum)，分类命名为金色毛壳(Chaetomium aureum);于2012年5月31日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称06110:，地址为:北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所)，菌种保藏号为CGMCC N0.6173。本发明的实验证明，本发明发现一株菌株HTC及其生防制剂，生防制剂可以在温室中使用并对辣椒疫病有一定程度的防治效果，达72.19%，而且可以使幼苗期株高增加12.27%，生物量增加32.34% ;使收获期生物量增加31.11%，辣椒果实产量增加21.81%。由于本发明的菌株HTC是专门针对辣椒疫病筛选开发的生防菌株，因而在防治辣椒疫病方面与目前其它广谱生物生防制剂相比，防治效果显著。由于是生物制剂，完全没有因化学农药的使用所带来的一系列问题，因而有利于作物的无公害生产，农民可以不用或减少其它防治辣椒疫病化学农药的用量，这不仅可以为农民节省开支，也有利于辣椒产品的出口。同时该生防制剂还有增产功能，可为农民增加经济收入。
图1为金色毛壳菌株HTC的菌落生长特征图2为金色毛壳菌株HTC的形态特征
图3为在接种辣椒疫霉7d后HTC生防制剂对辣椒疫病的防治效果图4为HTC生防制剂对移栽后I个月辣椒植株的促生效果
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、生防真菌HTC的分离与鉴定1、菌种分离与鉴定(I)菌种的分离将从山东省泰安市徂徕山林场核桃生产基地采集的核桃叶片用自来水冲洗干净，再用无菌水冲洗2次，无菌滤纸吸干表面水分。无菌条件下，将核桃叶片剪成4X8mm大小组织块，70%乙醇浸泡30sec,无菌水冲洗3次,转入1%。升萊消毒液(升萊lg，浓盐酸2.5ml,水1000ml)浸泡3min ，无菌水冲洗3次，无菌滤纸吸干表面水分。将消毒好的核桃叶片组织块，按5点均匀放置在事先准备好的PDA培养基平板上，置25°C恒温培养，3d后逐日观察，待从叶片组织块边缘长出菌丝时，及时挑取菌丝块转移到新的PDA平板上继续培养。待产生孢子时，进行单孢分离纯化，将纯化好的菌株进行编号，斜面保存备用。PDA培养基配方:马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂17g、自来水1000ml。(2)拮抗菌的筛选将上述(I)单孢分离纯化的菌株分别与辣椒疫霉(Phytophthora capsici)、杨树腐烂病菌(Valsa sordida)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、核桃炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、烟草赤星病菌(Alternaria alternata)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kiihn)、杨树水泡溃瘍病菌(Botryosphaeria ribis)、瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)、玉米纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、玉米弯抱病菌(Curvularia Iunata)和板栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)(螺旋毛壳 ND35 抗生素的产生及其在病害生物防治中的作用，植物保护学报，2007，34 (1):51-56 ;辣椒疫霉拮抗细菌的筛选，山东农业科学，2012，44 (9):90 - 92 ;公众可从山东农业大学获得)进行对峙试验，采用两点对峙同时接种，以不接HTC菌为对照，计算菌丝生长抑制率。抑菌率=(对照平板菌落直径一对峙平板菌落直径)/对照平板菌落直径X 100%。试验结果见表I。表I为菌株HTC对不同病原菌的抑菌率
权利要求
1.金色毛壳Chaetomium aureum 菌株 HTC,其保藏号为 CGMCC N0.6173。
2.一种制备防治辣椒疫病HTC生防制剂的方法，包括如下步骤:发酵权利要求1所述的金色毛壳Chaetomium aureum菌株HTC,得到发酵产物，即得到生防制剂。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:在所述得到发酵产物后，还包括如下步骤:去除所述发酵产物中的菌丝体，得到生防制剂。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于:所述发酵的条件如下:25-28°C，160-180rpm振荡培养10_12d ;所述发酵的条件具体如下:25°C、160rpm振荡培养12d。
5.由权利要求2-4中任一所述方法制备的生防制剂。
6.一种防治辣椒疫病或促进辣椒生长或者促进辣椒增产或抗菌的产品，其活性成分为权利要求1所述的金色毛壳Chaetomium aureum菌株HTC或权利要求5所述的生防制剂。
7.根据权利要求6所述的产品，其特征在于:所述辣椒疫病为由辣椒疫霉Phytophthora capsici 弓丨起； 所述抗菌为抗如下8种病原菌中的至少一种:辣椒疫霉Phytophthora capsic1、杨树腐烂病菌Valsa sordida、小麦赤霉病菌Fusarium graminearum、核桃炭疽病菌 Colletotrichum gloeosporioides、烟草赤星病菌 Alternaria alternata、杨树水泡溃瘍病菌Botryosphaeria ribis、玉米纹枯病菌Rhizoctonia solan1、板栗疫病菌Cryphonectria parasitica ； 所述促进辣椒生长体现在提高辣椒株高或增加辣椒生物量或增加辣椒产量。
8.权利要求1所述的金色毛壳Chaetomiumaureum菌株HTC或权利要求5所述的生防制剂在防治辣椒疫病或促进辣椒生长或者促进辣椒增产或抗菌中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于:所述辣椒疫病为由辣椒疫霉Phytophthora capsici 弓丨起； 所述抗菌为抗如下8种病原菌中的至少一种:辣椒疫霉Phytophthora capsic1、杨树腐烂病菌Valsa sordida、小麦赤霉病菌Fusarium graminearum、核桃炭疽病菌 Colletotrichum gloeosporioides、烟草赤星病菌 Alternaria alternata、杨树水泡溃瘍病菌Botryosphaeria ribis、玉米纹枯病菌Rhizoctonia solan1、板栗疫病菌Cryphonectria parasitica。
10.根据权利要求8或 9所述的应用，其特征在于:所述促进辣椒生长体现在提高辣椒株高或增加辣椒生物量或增加辣椒产量。
全文摘要
本发明公开了一种防治辣椒疫病的生防菌株HTC及其应用。本发明提供了金色毛壳Chaetomium aureum菌株HTC，其保藏号为CGMCC No.6173。本发明还提供了一种制备防治辣椒疫病HTC生防制剂的方法，包括如下步骤发酵上述的金色毛壳Chaetomium aureum菌株HTC，得到发酵产物，即得到生防制剂。本发明的实验证明，温室中使用菌株HTC生防制剂对辣椒疫病有一定程度的防治效果，达72.19%，幼苗期株高增加12.27%，生物量增加32.28%；收获期生物量增加31.11%，辣椒果实产量增加21.81%。
文档编号A01N63/04GK103184161SQ20131007839
公开日2013年7月3日 申请日期2013年3月12日 优先权日2013年3月12日
发明者高克祥, 刘晓光, 刘永亮, 何邦令, 李超, 张修国 申请人:山东农业大学