专利名称：一种瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法
技术领域：
本发明涉及一种藻类的繁育方法，特别涉及一种瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法。
背景技术：
马尾藻属褐藻门、马尾藻科。我国是马尾藻主要产地之一，有60多种，常见的有裂叶马尾藻、半叶马尾藻、匐枝马尾藻、亨氏马尾藻、海蒿子、瓦氏马尾藻等。其中，瓦氏马尾藻，拉丁名为Sargassum vacheIlianum Greville,是一种集中分布于我国浙江、福建、广东及香港等地沿海，瓦氏马尾藻本身因富含蛋白质、碳水化合物、无机盐、维生素等而广泛应用到医药、食品、饲料和有机肥料领域。尤其是有机肥料领域，已经颇受人们的关注。瓦氏马尾藻肥相比化肥，有着天然的优势，没有二次污染，而且对于作物和土壤没有任何危害，对植物的生长起着显著的调节和促进作用。瓦氏马尾藻植株高大，枝叶繁茂，多生长在潮下带浅海岩礁上，成片漂浮于水面，是我国东部海底藻场的重要成员之一。海底藻场就如“海底牧场”一样，能修复脆弱的海洋生态环境。近年来，海洋环境恶化，海域海水的富营养化程度比较高，氮、磷元素的含量高，容易引发赤潮等危害，对海洋生物的生长造成了严重影响。而由瓦氏马尾藻等藻类植物组成的海藻场，能净化水体环境，防止海洋环境的破坏，也为多种门类的海洋生物的栖息生活地，为它们提供了避敌、索饵、产卵的理想场所，从而形成生机蓬勃、稳定变化的生态系统。瓦氏马尾藻的快速生长和巨大生物量引起海洋工作者的关注与兴趣，被海洋生态学家列为重建海底藻场和实施海洋生态修复的重要物种之一。但目前关于该类海藻的繁殖生物学和苗种繁育方法几乎没有研究，所以，开展室内人工促熟成藻，完成有性生殖，获得受精卵进行全人工育苗具有重要意义
发明内容
本发明的目的是提供一种瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法，可实现雌、雄生殖托同步成熟，提高成活率和出苗率。本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:—种瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法，其步骤包括:(I)将已发育出圆锥花序状生殖托雏形的瓦氏马尾藻作为成藻，在温度为16_20°C的条件下，于培养液中暂养18-22天，每5-8天更换一半培养液，直至雌、雄生殖托出现为止;(2)取步骤(I)中具有生殖托的成藻侧枝，按照雌、雄生殖托数量1:1的比例，充气培养1-5天，每1-3天更换一半培养液，直至受精卵开始脱落沉降为止；充气培养温度为21-24°C，光照强度 1500-23001x，光照周期 14L:10D ；(3)收集步骤(2)中的开始脱落沉降的受精卵，在温度为21-24°c，光照强度为1800-22001X，光照周期14L:10D的条件下，静置培养18-25天，即可繁育成幼苗；
所述步骤(I)中的暂养条件为，光照强度1500-20001X，光照周期10L:14D。所述步骤(2)中，成藻侧枝的长度为2_6cm，该侧枝上具15_20个生殖托。所述步骤(3)中，收集从成藻侧枝上开始脱落沉降10_14h时的受精卵进行培养，该受精卵的培养密度为20-80个/cm2。优选的，收集从成藻侧枝上开始脱落沉降12h时的受精卵进行培养，该受精卵的培养密度为40-50个/cm2。所述步骤(3)中，幼苗的长度为3_6mm，具有2_4个藻叶。将步骤(3)中得到的幼苗充气培养10-30天，每3-6天更换一半培养液，培养温度为20-26°C，光照强度为3000-35001x，光照周期为14L:10D。目的是为了加速幼苗的生长，能更好地进行海上增殖和人工栽培。
所述培养液为MES培养基与灭菌海水按照体积比为1: 0.01-0.03的比例混合而成的混合液；所述培养液中还含有浓度为0.5-1.0mg/L的KI。所述MES 培养基的组分为，EDTA.2Na、H3BO3' MnCl2.4H20、FeCl3.6H20、ZnCl2,CoCl2.6H20、柠檬酸铁、NaNO3、甘油磷酸钠、三羟甲基氨基甲烷，各组分的相应浓度为
0.3-0.8g/L、0.4-0.6g/L、0.05-0.09g/L、0.01-0.03g/L、0.002-0.007g/L、0.001-0.003g/L、0.01-0.03g/L、l-4g/L、0.2-0.6g/L、2_7g/L，该 MES 培养基的 pH 值为 7-8。与现有技术相比，本发明的有益效果在于:1、本发明方法是在人工控制条件下，暂养并促熟瓦氏马尾藻的雌雄亲藻，使有性生殖过程中的卵子和精子同步放散，完成配子接合，不仅可以有效地控制和延长有性繁殖时间，而且可以确保较高的受精率和幼苗成活率，受精率达到95%以上。2、本发明方法不受自然条件、气候变化的影响，在相对较长的时间段内，可根据需要通过控制成藻的成熟度，进行采苗和育苗，获得成批的人工苗种，用于海上增殖或人工栽培。3、本发明方法采用充气培养获取受精卵后转为静置培养，避免了瓦氏马尾藻幼孢子体假根的互相粘连，保证了幼苗的正常生长。
具体实施例方式下面结合实施例，对本发明作进一步说明:培养液的配制:将3.0g EDTA.2Na、2.5g H3BO3>0.35g MnCl2 *4H20,2mL FeCl3.6Η20溶液(62.5mg/mL)、2mL ZnCl2 溶液(12.5mg/mL)、2mL CoCl2.6Η20 溶液(5mg/mL)、2mL 梓樣酸铁溶液(30mg/mL)混合，用蒸馏水定容至lOOOmL，配成MPII溶液然后再取200mL MP II溶液与2.8gNaN03、0.4g甘油磷酸钠、4.0g三轻甲基氨基甲烧和700mL蒸懼水混合,定容至IOOOmL,配成MES培养基，该MES培养基的pH值为7.6，然后将MES培养基高压灭菌后保存于冰箱；在IL灭菌海水中加入20mL的MES培养基组成瓦氏马尾藻的培养液，为了更好地提供瓦氏马尾藻所需的营养兀素碘，在培养液中再加入KI,使得培养液中的KI浓度为Img/L0实施例(I)成藻的选择:采集生长于自然海区潮下带的，已发育出圆锥花序状生殖托雏形、尚无法区分雌雄个体的，附生生物较少的，健康状况良好的瓦氏马尾藻作为成藻。(2)成藻的暂养:成藻用灭菌海水暂养于放有培养液的培养桶内，每7天更换一半海水，暂养20天。暂养条件:温度18°C，光照强度1500-20001x，光照周期10L:14D。(3)生殖托促熟:将步骤(2)中的暂养的成藻剪下具有生殖托的侧枝，每个侧枝长3_5cm，其上具有15-20个生殖托，按照雌、雄生殖托1:1的比例，充气培养于同一充气瓶内(用气泵充空气)，充气培养2-3天，每天更换一半培养液。培养条件:温度21-24°C，光照强度20001x，光照周期 14L:10D。(4)幼苗的培育:受精卵开始脱落沉降后12h时收集受精卵，此时受精卵刚刚发育至长出4-8个假根芽的幼孢子体，彼此之间不会粘连成块，易实现均匀分散，静置培养20天，受精卵的培养密度为40-50个/cm2，每天更换一半培养液，培养条件，温度21-24°C，光照强度20001x，光照周期14L: 10D，即可 完成幼苗的培养。为了加速幼苗的生长，能更好地进行海上增殖和人工栽培，将上述幼苗进一步进行充气培养，具体步骤为，将静止培养20天的幼苗，长度约5_，具有2-4个藻叶，充气培养20天，每5天更换一半培养液。培养条件:温度21-24°C，光照强度3000-35001X，光照周期14L:10D。本实施例中的瓦氏马尾藻的受精卵的受精率在95%以上，大大提高了瓦氏马尾藻
的繁育率。因为瓦氏马尾藻幼孢子体长出的假根粘性很大，所以本实施例中，先采用充气培养的方式培养获取的受精卵，然后再转为静置培养，得到的幼孢子体避免了假根的互相粘连，保证了幼苗的正常生长，提高了出苗率。现有技术中，将受精卵采用充气培养的方式繁育成幼苗，不经过静置培养的步骤，造成幼孢子体的假根互相粘连成团的现象发生，出苗率明显减低。以上所述为本发明的较佳实施例而已，但本发明不应该局限于该实施例所公开的内容。所以凡是不脱离本发明所公开的精神下完成的等效或修改，都落入本发明保护的范围。
权利要求
1.一种瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法，其步骤包括: (1)将已发育出圆锥花序状生殖托雏形的瓦氏马尾藻作为成藻，在温度为16-20°c的条件下，于培养液中暂养18-22天，每5-8天更换一半培养液，直至雌、雄生殖托出现为止； (2)取步骤(I)中具有生殖托的成藻侧枝，按照雌、雄生殖托数量1:1的比例，充气培养1-5天，每1-3天更换一半培养液，直至受精卵开始脱落沉降为止；充气培养温度为21-24°C，光照强度 1500-23001x，光照周期 14L:10D ； (3)收集步骤(2)中的开始脱落沉降的受精卵，在温度为21-24°C，光照强度为1800-22001x，光照周期14L:10D的条件下，静置培养18-25天，即可繁育成幼苗。
2.根据权利要求1所述的瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法，其特征在于:所述步骤(I)中的暂养条件为，光照强度1500-20001X，光照周期10L:14D。
3.根据权利要求1所述的瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法，其特征在于:所述步骤(2)中，成藻侧枝的长度为2_6cm,该侧枝上具15-20个生殖托。
4.根据权利要求1所述的瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法，其特征在于:所述步骤(3)中，收集从成藻侧枝上开始脱落沉降10-14h时的受精卵进行培养，该受精卵的培养密度为.20-80 个/cm2。
5.根据权利要求4所述的瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法，其特征在于:所述步骤(3)中，收集从成藻侧枝上开始脱落沉降12h时的受精卵进行培养，该受精卵的培养密度为.40-50 个 /cm2。
6.根据权利要求1所述的瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法，其特征在于:所述步骤(3)中，幼苗的长度为3-6mm，具有2-4个藻叶。
7.根据权利要求1所述的瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法，其特征在于:将步骤(3)得到的幼苗充气培养10-30天，每3-6天更换一半培养液，培养温度为20-26°C，光照强度为.3000-35001x，光照周期为 14L:10D。
8.根据权利要求1或7所述的瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法，其特征在于:所述培养液为MES培养基与灭菌海水按照体积比为1:0.01-0.03的比例混合而成的混合液；所述培养液中还含有浓度为0.5-1.0mg/L的KI。
9.根据权利要求8所述的瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法，其特征在于:所述MES培养基的组分为，EDTA.2Na、H3BO3' MnCl2.4H20、FeCl3.6H20、ZnCl2, CoCl2.6H20、柠檬酸铁、NaNO3、甘油磷酸钠、三羟甲基氨基甲烷，各组分的相应浓度为0.3-0.8g/L、0.4-0.6g/L、.0.05-0.09g/L、0.01-0.03g/L、0.002-0.007g/L、0.001-0.003g/L、0.01-0.03g/L、l_4g/L、.0.2-0.6g/L、2-7g/L，该 MES 培养基的 pH 值为 7-8。
全文摘要
本发明涉及一种藻类的繁育方法，特别涉及一种瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法，将瓦氏马尾藻的成藻，在温度为16-20℃的条件下，于培养液中暂养18-22天，每5-8天更换一半培养液，直至雌、雄生殖托出现为止；按照雌、雄生殖托数量1:1的比例，充气培养1-5天，每1-3天更换一半培养液，直至受精卵开始脱落沉降为止；收集开始脱落沉降的受精卵，在温度为21-24℃，光照强度为1800-2200lx，光照周期14L:10D的条件下，静置培养18-25天，即可。本方法不仅有效地控制和延长有性繁殖时间，且可确保较高的受精率和幼苗成活率，受精率达到95%以上，而且不受自然条件和气候变化的影响。
文档编号A01G33/00GK103202214SQ20131014877
公开日2013年7月17日 申请日期2013年4月26日 优先权日2013年4月26日
发明者严兴洪, 张婧 申请人:上海海洋大学