专利名称：急性脑缺血动物模型的建立方法
技术领域：
本发明涉一种动物模型的建立，特别是涉及一种急性脑缺血动物模型的建立方法。
背景技术：
在现代医学研究中，建立脑缺血动物模型，已成为研究脑血管疾病损伤机理及药物开发的关键。由于大鼠脑血管解剖特点比较接近人类；有关大鼠生理、生化、形态及药理等方面的实验资料比较丰富，选用大鼠复制脑缺血模型，有利于进行研究和比较。
发明内容
本发明的目的是提供一·种急性脑缺血动物模型的建立方法。该方法采取对大鼠双侧颈总动脉和迷走神经同时结扎并切断的方法，建立的大鼠脑缺血动物模型，可使大鼠在数小时内缓慢死亡，便于实验研究。本发明之方法包括以下步骤:(一)、取雄性Wistar大鼠40只，体重在200—230g，手术前禁食12小时，自由饮水，随机分为对照组A、B、C组及模型D组，共4组，每组10只；A组:为假手术组，仅切开颈部两侧皮肤，分离双侧颈总动脉和迷走神经，不切断，然后缝合；B组:仅切断双侧颈部迷走神经；C组:结扎并切断双侧颈总动脉(C C A );D组:为联合组，即结扎并切断双侧颈总动脉(C C A),同时切断双侧颈部迷走神经。(二)、观察各组大鼠手术后的脑缺血症状，记录各组大鼠在8小时内的死亡情况，超过8小时死亡的动物按8小时计，计算死亡率和死亡时间；(三)结果:A组大鼠没有脑缺血症状，无死亡；B组大鼠无脑缺血症状，呼吸变慢变深，心率血压上升，但无死亡；C组大鼠部分出现脑缺血症状，眼睑下垂，活动能力低下，自发运动减少，也有些大鼠术后自发运动增加，在8h内无死亡；D组大鼠大多数出现较为明显的脑缺血症状，在8小时内全部死亡。本发明的有益效果:本发明采用同时结扎并切断大鼠双侧颈总动脉和双侧颈部迷走神经的方法，可以建立急性脑缺血大鼠动物模型，此方法具有手术简单，成功率高，术后动物缓慢死亡的特点。
具体实施方式
本发明之方法包括以下步骤:(一)、取雄性Wistar大鼠40只，体重在200—230g，手术前禁食12小时，自由饮水，随机分为对照组A、B、C组及模型D组，共4组，每组10只；A组:为假手术组，仅切开颈部两侧皮肤，分离双侧颈总动脉和迷走神经，不切断，然后缝合； B组:仅切断双侧颈部迷走神经；C组:结扎并切断双侧颈总动脉(C C A );D组:为联合组，即结扎并切断双侧颈总动脉(C C A),同时切断双侧颈部迷走神经。(二)、观察各组大鼠手术后的脑缺血症状，记录各组大鼠在8小时内的死亡情况，超过8小时死亡的动物按8小时计，计算死亡率和死亡时间；(三)结果:A组大鼠没有脑缺血症状，无死亡；B组大鼠无脑缺血症状，呼吸变慢变深，心率血压上升，但无死亡；C组大鼠部分出现脑缺血症状，眼睑下垂，活动能力低下，自发运动减少，也有些大鼠术后自发运动增加，在8h内无死亡；D组大鼠大多数出现较为明显的脑缺血症状，在8小时内全部死亡。具体实施例如下:1、材料、设备的选择与方法:1.1、实验材料1.1.1、动物为Wistar大鼠，雄性，体重在200— 230g，由吉林大学白求恩医学院动物实验中心提供，生产许可证号:SCXK(吉)2007-0003 ;使用许可证号:SYXK (吉)2007-0011 ο1.1.2仪器与器械:无菌操作台、手术器械、计时器、酒精灯、大鼠解剖台、止血夹、止血钳、3- O单股手术尼龙线。1.1.3药品:水合氯醛、75%酒精、生理盐水和碘伏。1.2、实验方法1.2.1手术前的准备首先对手术器械、物品进行消毒处理，然后将所有物品转入无菌操作台进行消毒处理。各组大鼠手术前禁食12小时，自由饮水。以10%水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉大鼠，待完全麻醉后，固定大鼠，用剪刀退去颈部下方毛发，转移至提前消毒处理好的无菌操作台。用碘伏对大鼠颈部进行消毒处理。1.2.2动物模型的建立大鼠颈部正中切开皮肤4cm长的口，先分离肌肉，用镊子分离出左右两侧颈总动脉(common carot id artery, CCA)和总迷走神经管,再用止血钳夹住近心端动脉管,然后用弯头镊排空远心端血管中的血液，对动脉管和神经管进行两点结扎，间距为0.4cm。结扎完后，用刀片仔细从两个结扎点中间切断血管和神经管，然后尽量将血管和神经管恢复到原位，先缝合肌肉韧带层，再缝合皮肤，以碘伏、酒精对伤口进行消毒。假手术组除不切断血管和神经管外，其余操作与切断组相同。
1.2.3造模后动物的观察，计算每只动物死亡时间。各组手术造模的大鼠待结扎后，需注意呼吸道管理，开始记录8h内，大鼠从结扎到死亡所需的时间，超出8h的按8h计。同时观察每只动物是否具有霍纳氏征症状的脑缺血行为学特征，即单侧性缩瞳(瞳孔缩小)、眼睑下垂(眼裂狭小)及眼球内陷三个特征性症状。死亡率=手术后8h内存活只数/手术前动物只数。1.3实验数据统计方法采用SPSS18.0进行统计学处理。计量资料以均数、标准差()表示。组间满足正态性资料比较采用单因素方差分析，不满足正态性资料用秩和检验。检验水准α =0.052、结果2.1各组大鼠在手术造模后的缺血症状:动物麻醉清醒后，从是否出现霍纳氏征来进行症状观察。按Bederson检查法进行体征分级。O级:无神经病学体症；1级:对侧肢体屈曲；2级:在I级基础上，还有瘫痪侧肌张力下降；3级:在2级基础上，出现活动时向瘫痪侧打转现象。A组大鼠没有脑缺血症状，无死亡；B组大鼠无脑缺血症状，出现呼吸变慢变深，心率血压上升，但无死亡；C组大鼠部分出现脑缺血症状，眼睑下垂，活动能力低下，自发运动减少，也有些大鼠术后自发运动增加，在8 h内无死亡；D组大鼠大多数出现较为明显的脑缺血症状，在8小时内全部死亡。2.2各组大鼠在造模后的具体死亡时间
权利要求
1.一种急性脑缺血动物模型的建立方法，该方法包括以下步骤: (一)、取雄性Wistar大鼠40只，体重在200—230g，手术前禁食12小时，自由饮水，随机分为对照组A、B、C组及模型D组，共4组，每组10只； A组:为假手术组，仅切开颈部两侧皮肤，分离双侧颈总动脉和迷走神经，不切断，然后缝合； B组:仅切断双侧颈部迷走神经； C组:结扎并切断双侧颈总动脉； D组:为联合组，即结扎并切断双侧颈总动脉，同时切断双侧颈部迷走神经。
(二)、观察各组大鼠手术后的脑缺血症状，记录各组大鼠在8小时内的死亡情况，超过8小时死亡的动物按8小时计，计算死亡率和死亡时间； (三)结果: A组大鼠没有脑缺血症状，无死亡； B组大鼠无脑缺血症状，呼吸变慢变深，心率血压上升，但无死亡； C组大鼠部分出现脑缺血症状，眼睑下垂，活动能力低下，自发运动减少，也有些大鼠术后自发运动增加， 在8h内无死亡； D组大鼠大多数出现较为明显的脑缺血症状，在8小时内全部死亡。
全文摘要
本发明公开了一种急性脑缺血动物模型的建立方法，该方法是取雄性Wistar大鼠40只，体重在200—230g，手术前禁食12小时，自由饮水，随机分为对照组Ａ、Ｂ、Ｃ组及模型Ｄ组，共4组，每组10只；A组为假手术组，仅切开颈部两侧皮肤，分离双侧颈总动脉和迷走神经，不切断，然后缝合；Ｂ组仅切断双侧颈部迷走神经；Ｃ组结扎并切断双侧颈总动脉；D组为联合组，即结扎并切断双侧颈总动脉，同时切断双侧颈部迷走神经;观察各组大鼠手术后的脑缺血症状，记录各组大鼠在8小时内的死亡情况，超过8小时死亡的动物按8小时计，计算死亡率和死亡时间；本发明采用同时结扎并切断大鼠双侧颈总动脉和双侧颈部迷走神经的方法，可以建立急性脑缺血大鼠动物模型，此方法具有手术简单，成功率高，术后动物缓慢死亡的特点。
文档编号A61D1/00GK103190963SQ20131014832
公开日2013年7月10日 申请日期2013年4月26日 优先权日2013年4月26日
发明者徐彩云, 张大维 申请人:吉林大学