一种灯盏花乙素原料及其制剂的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及灯盏花乙素的检测方法，尤其是灯盏花乙素原料 及其制剂的检测方法。
【背景技术】
[0002] 灯盏花乙素，又称野黄芩苷，其系统命名为4'，5,6-三羟基黄酮-7 β -0-葡萄糖醛 酸苷，是云南民族药灯盏花及其提取物制剂中的主要药理活性成分。
[0003] 灯盏花乙素可通过多种作用机制实现其对急性脑缺血的明显保护作用：可抑制血 小板聚集，抑制体内凝血功能和促进纤溶活性，从而抑制血栓形成；通过抑制蛋白激酶C激 活所致的脑血管痉挛收缩，增加局部脑血流量，改善脑微循环，减少炎性细胞黏附浸润，保 护缺血后脑组织；还能加快脑血流速度，增加脑血流量，改善微循环，最终改善血液流变学。 所有这些作用都非常有利于治疗和预防脑卒中和心脑血管疾病。随着社会心脑血管类疾病 越来越多，越来越年轻化，且灯盏花乙素的药理及临床应用的研宄越来越透彻，灯盏花素具 有很好药用价值和广阔的医药市场发展空间，是医药界的一代宠儿，可与三七、天麻等天然 药物相媲美的一个大品种产品。
[0004] 随着社会快速发展，国家对药品的质量要求越来越严格，建立一个可控、经济、准 确的含量测定方法成为一个药品质量研宄者的首要任务。目前灯盏花乙素原料及其制剂含 量测定方法主要有高效液相色谱法，紫外分光光度法、薄层层析法（TIC)、毛细血管电泳法 等；有关物质检查方法主要有高效液相色谱法、薄层层析法（TIC)等。2010版中国药典对灯 盏花乙素原料及其制剂的含量和有关物质检查方法采用高效液相色谱法等洗脱方法。然而 灯盏花乙素原料及其制剂中降解产物极性与灯盏花乙素极性相差很大，导致洗脱不完全， 会造成质量控制的误差，影响灯盏花乙素原料及其制剂有关物质的控制及灯盏花乙素含量 测定结果的准确性。
【发明内容】
[0005] 有鉴于此，本发明的目的在于克服现有的技术之缺陷，提供一种灯盏花乙素原料 及其制剂的检测方法，该方法操作简单，重复性好，专属性强，准确度高，通过该检测方法提 高灯盏花乙素原料药及其制剂质量控制标准，对灯盏花乙素原料及其制剂的质量进行准确 的检测，以有利于制备质量稳定的灯盏花乙素原料及其制剂。
[0006] 为了实现本发明的目的，本发明提供一种灯盏花乙素原料及其制剂的检测方法， 包括：
[0007] 提供供试品溶液和对照品溶液；
[0008] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相Α，以酸的水溶液或磷酸盐的 水溶液为流动相Β，梯度洗脱，在液相色谱仪中检测所述供试品溶液和对照品溶液，梯度洗 脱，外标法分析得到所述灯盏花乙素的含量。
[0009] 按照本发明，所述供试品溶液为灯盏花乙素原料或其制剂优选用水或/和甲醇溶 解得到。所述对照品溶液为灯盏花乙素对照品优选用甲醇溶解得到。其中所述灯盏花乙素 制剂包括注射用灯盏花乙素等。在一些实施方案中，所述供试品溶液为灯盏花乙素原料用 甲醇溶解得到。在一些实施方案中，所述供试品溶液为灯盏花乙素原料用水溶解得到。在 另一些实施方案中，所述供试品溶液为注射用灯盏花乙素用甲醇溶解得到。
[0010] 对于所述供试品溶液和对照品溶液的浓度，优选均为10 μ g/mL~100 μ g/mL，更 优选为50 μ g/mL。
[0011] 按照本发明，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以酸的水溶 液或磷酸盐的水溶液为流动相B，在液相色谱仪中检测所述供试品溶液和对照品溶液。其 中，乙腈为流动相A，流动相B为酸的水溶液或磷酸盐的水溶液。
[0012] 所述酸的水溶液中的酸为甲酸、乙酸、盐酸、磷酸中的一种或几种。如流动相B为 甲酸的水溶液、磷酸的水溶液。在所述酸的水溶液中所述酸的体积浓度优选为〇. 01%~ 0.05%。在一些实施方案中为0.02%磷酸的水溶液。在一些实施方案中为0.05%甲酸的 水溶液。
[0013] 所述酸的水溶液的pH为2. 0~7. 0,优选3. 0~4. 5。
[0014] 所述磷酸盐的水溶液中的磷酸盐选自磷酸氢二铵、磷酸二氢铵、磷酸氢二钠、磷酸 二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾中的一种或几种。如磷酸二氢钠的水溶液。
[0015] 在所述磷酸盐的水溶液中的所述磷酸盐的浓度优选为0. 05mol/L~1.0 mol/L。在 一些实施方案中流动相B为0. 05mol/L磷酸二氢钠的水溶液。
[0016] 所述磷酸盐的水溶液的pH为2. 0~7. 0,优选3. 0~4. 5。在一些实施方案中为 3. 5〇
[0017] 在液相色谱仪中检测所述供试品溶液及对照品溶液使用的检测波长优选为 330nm~340nm，更优选为335nm ;所使用的柱温优选为25~45°C，更优选为30~40°C，更 优选为35°C ;所使用的流速优选为0. 5mL/min~2. OmL/min，更优选为0. 8~I. 2mL/min， 更优选为1.0 mL/min。
[0018] 在液相色谱仪中检测所述供试品溶液的理论板数按灯盏花乙素峰计算优选不低 于5000,更优选不低于8000。
[0019] 在一些实施方案中，本发明所述灯盏花乙素原料及其制剂的检测方法在液相色 谱仪中检测所述供试品溶液及对照品溶液使用的检测波长为335nm，所使用的柱温优选为 35°C，所使用的流速1.0 mL/min，理论板数按灯盘花乙素峰计算不低于5000。
[0020] 本发明所述灯盏花乙素原料及其制剂的检测方法在液相色谱仪中检测所述供试 品溶液时所述流动相B与流动相A的起始体积比优选为90:10~40:60,更优选为90:10~ 60:40,更优选为 88:12 ~65:35。
[0021] 按照本发明，本发明所述灯盏花乙素原料及其制剂的检测方法分别向所述液相色 谱仪内注入灯盏花乙素对照品溶液和所述供试品溶液，流动相梯度洗脱。所述洗脱时间优 选为25~60min，更优选为30_40min。
[0022] 在一些实施方案中，所述流动相B为酸的水溶液时，所述梯度洗脱程序为
[0023]
[0024]
[0025] 〇
[0026] 在一些实施方案中，所述流动相B为磷酸盐的水溶液时，梯度洗脱程序为
[0027]
[0028] 。
[0029] 按照本发明，在液相色谱仪中检测所述供试品溶液和对照品溶液为分别向所述液 相色谱仪内注入灯盏花乙素对照品溶液和所述供试品溶液检测，然后以外标法以峰面积计 算得到所述供试品溶液中灯盏花乙素的含量。其中，所述外标法计算含量具体是通过计算 所述供试品溶液和对照品溶液的峰面积的比值即得所述供试品的灯盏花乙素的含量。
[0030] 在一些实施方案中，本发明所述灯盏花乙素原料及其制剂的检测方法还包括检测 所述灯盏花乙素原料及其制剂中有关物质含量的步骤，所述检测有关物质含量的步骤具体 包括：
[0031] 提供灯盏花乙素原料或其制剂的有关物质检查用供试品溶液；
[0032] 取所述有关物质检查用供试品溶液稀释得到对照溶液；
[0033] 取所述对照溶液和有关物质检查用供试品溶液在液相色谱中分析，对比所述供试 品溶液的有关物质峰面积与所述对照品溶液的主峰面积，得到所述有关物质的含量。
[0034] 有关物质主要是在生产过程中带入的起始原料、中间体、聚合体、glj反应产物，以 及贮藏过程中的降解产物等。本发明所述灯盏花乙素中的有关物质为起始原料带入或在灯 盏花乙素中生产过程中产生的并能在色谱仪中显示杂质峰的物质。
[0035] 按照本发明，所述有关物质检查用供试品溶液为灯盏花乙素原料或其制剂用水或 /和甲醇溶解得到。
[0036] 按照本发明，所述对照溶液和有关物质检查用供试品溶液以十八烷基硅烷键合硅 胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以酸的水溶液或磷酸盐的水溶液为流动相B，在液相色谱 中分析检测所述灯盏花乙素原料及其制剂中有关物质。所述酸的水溶液中的酸为甲酸、乙 酸、盐酸、磷酸中的一种或几种。在所述酸的水溶液中所述酸的体积浓度优选为0. 01%~ 0. 05%。所述酸的水溶液的pH为2. 0~7. 0,优选3. 0~4. 5。所述磷酸盐的水溶液中的磷 酸盐选自磷酸氢二铵、磷酸二氢铵、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾中的 一种或几种。在所述磷酸盐的水溶液中的所述磷酸盐的浓度优选为〇. 〇5mol/L~1.0 mol/ L。所述磷酸盐的水溶液的pH为2. 0~7. 0,优选3. 0~4. 5。
[0037] 所述检测所述灯盏花乙素原料及其制剂中有关物质含量时所述检测时间优选为 灯盏花乙素主成分峰保留时间的2倍以上。在液相色