一种安立生坦原料及制剂有关物质的检测方法
【专利摘要】本发明提供一种安立生坦原料及制剂中的有关物质的检测方法，该方法是采用高效液相色谱法进行的，包括下述步骤：（1）配制安立生坦样品溶液；和（2）将步骤（1）所得样品溶液注入高效液相色谱仪，采用流动相A和流动相B作为流动相进行梯度洗脱，并记录色谱图；其中，所述高效液相色谱法的色谱柱固定相填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶；流动相A的配制为乙腈的体积：磷酸盐缓冲溶液的体积=30～50：50～70；流动相B的配制为乙腈的体积：磷酸盐缓冲溶液的体积=50～80：20～50。本发明的检测方法在同一液相条件下测定安立生坦原料或制剂中的有关物质，所述检测方法操作简便、分离度高、测定方法专属性强、检测结果准确可信。
【专利说明】一种安立生坦原料及制剂有关物质的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物分析领域。具体地说，本发明涉及一种采用高效液相色谱法测定 安立生坦原料及制剂有关物质的检测方法。
【背景技术】
[0002] 安立生坦（ambrisentan，Letairis)是由美国GileadScience公司开发的一种 选择性内皮素受体A(ETAR)拮抗剂，其化学名为（+)-(2S)-2-[ (4,6_二甲基嘧啶-2-基） 氧基]-3-甲氧 3, 3-二苯丙酸，英文化学名：（2S)-2-[ (4,6-Dimethylpyrimidin-2-yl) oxy] -3-methoxy-3, 3-diphenylpropanoicacid,化学结构如下：
[0003]
【权利要求】
1. 一种安立生坦原料及制剂中的有关物质的检测方法，其中所述安立生坦原料及制剂 中的有关物质包括2-羟基-3-甲氧基-3, 3-二苯基丙酸、（S)-l- (4-硝基苯基）乙胺、 3, 3-二苯基-2, 3-环氧丙酸甲酯、2-羟基-3-甲氧基-3, 3-二苯基丙酸甲酯、4,6-二甲 基-2-甲基-磺酰嘧啶、4,6_二甲基-2- (2,2_二苯基-乙烯氧基）嘧啶和二苯甲酮中的 一种或多种，该方法是采用高效液相色谱法进行的，包括下述步骤： (1) 配制安立生坦样品溶液，所述安立生坦样品溶液包括供试品溶液；和 (2) 将步骤（1)所得样品溶液注入高效液相色谱仪，采用流动相A和流动相B作为流动 相进行梯度洗脱，并记录色谱图； 其中，所述供试品溶液的制备方法包括下述步骤：精密称取安立生坦原料或制剂样品， 加稀释液溶解并稀释至安立生坦的浓度为〇. 2mg/ml?lmg/ml，得到供试品溶液； 所述高效液相色谱法的色谱柱固定相填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷 键合硅胶，优选固定相填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶； 流动相A的配制为乙腈的体积：磷酸盐缓冲溶液的体积=30?50 :50?70 ; 流动相B的配制为乙腈的体积：磷酸盐缓冲溶液的体积=50?80 :20?50。
2. 根据权利要求1所述的检测方法，其中流动相A的配制为乙腈的体积：磷酸盐缓冲 溶液的体积=45 :55。
3. 根据权利要求1或2所述的检测方法，其中流动相B的配制为乙腈的体积：磷酸盐 缓冲溶液的体积=70 :30。
4. 根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中所述高效液相色谱法的梯度洗 脱顺序如下： 0-15分钟时流动相为：90?100体积％流动相A+0?10体积％流动相B; 15-20分钟时流动相为：45?55体积％流动相A+45?55体积％流动相B; 20-35分钟时流动相为：0?10体积％流动相A+90?100体积％流动相B; 35-40分钟时流动相为：90?100体积％流动相A+0?10体积％流动相B; 优选地，所述高效液相色谱法的梯度洗脱顺序如下： 0-15分钟时流动相为：100体积％流动相A+0体积％流动相B; 15-20分钟时流动相为：50体积％流动相A+50体积％流动相B; 20-35分钟时流动相为：0体积％流动相A+100体积％流动相B; 35-40分钟时流动相为：100体积％流动相A+0体积％流动相B。
5. 根据权利要求1至4中任一项所述的检测方法，其中所述磷酸盐为磷酸二氢铵、磷酸 二氢钾或磷酸氢二钠，优选为磷酸二氢钾； 优选地，磷酸盐缓冲溶液的浓度为10mM?50mM，优选为30mM; 优选地，流动相的pH值为2. 0?7. 0,优选流动相的pH值为3. 5 ;和/或 优选地，流动相的流速为0. 8?1. 2ml/min，优选流动相的流速为1.Oml/min。
6. 根据权利要求1至5中任一项所述的检测方法，其中所述高效液相色谱法的色谱柱 柱温为25?40°C，优选30°C; 优选地，自动进样室温度为4?25°C，优选4°C;和/或 优选地，检测波长为220nm。
7. 根据权利要求1至6中任一项所述的检测方法，其中所述安立生坦样品溶液还包括 自身对照溶液和/或杂质加样溶液； 所述自身对照溶液的制备方法包括下述步骤：精密量取供试品溶液lml，置100ml容量 瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，得到自身对照溶液； 所述杂质加样溶液的制备方法包括下述步骤：精密称取安立生坦对照品，加稀释液溶 解并稀释至安立生坦的浓度为50iig/ml?5mg/ml,得到安立生坦对照品储备液；另分别取 2-轻基-3-甲氧基_3, 3_二苯基丙酸、（S) -1- (4_硝基苯基）乙胺、3, 3_二苯基_2, 3_环 氧丙酸甲酯、2-羟基-3-甲氧基-3, 3-二苯基丙酸甲酯、4,6-二甲基-2-甲基-磺酰嘧啶、 4,6_二甲基-2- (2,2_二苯基-乙烯氧基)嘧啶和二苯甲酮标准品，精密称定，分别用稀释 液溶解并稀释至浓度为50yg/ml?7. 5mg/ml，得到各杂质对照品溶液母液；精密量取安立 生坦对照品储备液和安立生坦各杂质对照品溶液母液，混合，加稀释液稀释，得到安立生坦 杂质加样溶液； 优选地，其中所述稀释液为流动相A。
8. 根据权利要求1至7中任一项所述的检测方法，其中安立生坦供试品溶液中安立生 坦的浓度为〇? 5mg/ml。
9. 根据权利要求7或8所述的检测方法，其中安立生坦各杂质对照品溶液母液浓度为 75yg/ml〇
10. 根据权利要求7至9中任一项所述的检测方法，其中，在高效液相色谱法检测步骤 (2)中，首先将样品自身对照溶液注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分色谱峰的 峰高为记录仪满量程的20% ;再将供试品溶液和杂质加样溶液分别注入液相色谱仪，采用 流动相A和流动相B作为流动相进行梯度洗脱，并记录色谱图；优选地，注入液相色谱仪中 样品溶液的量均为20ill。
【文档编号】G01N30/02GK104515816SQ201310465464
【公开日】2015年4月15日 申请日期:2013年9月29日 优先权日:2013年9月29日
【发明者】王博, 李洪起, 连潇嫣, 任晓文, 徐为人, 张海枝 申请人:天津药物研究院