专利名称：一种蛹虫草花生及其制备方法
技术领域：
本发明属于食品制备技术领域，具体涉及一种蛹虫草花生及其制备方法。
背景技术：
蛹虫草(Cordyceps militaris)是子囊菌亚门，核菌纲，肉座菌目，麦角菌科,虫草属一个种，与冬虫夏草(Cordyceps sinensis)为同属异种真菌,通常称为北虫草。由于与冬虫夏草具有相同的药用和滋补功能，而且比冬虫夏草更易于进行人工栽培，因此蛹虫草被选为冬虫夏草的最佳替代品而进行大量的人工培育，并作为新资源食品和一类新药已获卫生部和国家食品药品监督管理局的批准进入市场。蛹虫草的活性成分包括虫草菌素、腺苷、虫草多糖和虫草酸等，其中对虫草菌素的研究，成为近年国内外的焦点。虫草菌素(Cordycepin)又称虫草素，即3'-脱氧腺苷(3' -Deoxyadenosine),是一种核苷类抗生素,具有多种生理活性,如抑菌、抗肿瘤、抑制病毒作用，以及增强免 疫功能和防治心脑血管疾病等作用。虫草菌素的特殊医疗保健功能已经引起国内外专家的高度重视，已有不少以虫草素为主的保健品、保健食品、化妆品、药品投放市场。据报道，在美国已将虫草素作为抗癌抗病毒新药进入临床试用。在我国也已将由虫草素合成的治疗白血病的新药进入一期临床试用。人工培养的蛹虫草的纯子实体，作为食品用于人体，经研究是完全的，可广泛用于保健食品、保健膳食和其它滋补类食品，例如做成蛹虫草饮料、保健酒、营养保健醋等，但大都是以子实体或固体培养基浸提液为原料，工艺相对复杂，成本较高。随着食品加工技术的进步和人们对虫草研究的不断深入，虫草功能食品应向多元化的方向发展，加工更精细、配方更科学、功能更明确、效果更显著。而通过生物转化的途径，使原来食品中没有的虫草菌素产生出来，且对其进行加工成食品，符合21世纪人们对食品的要求，发展前景广阔。专利CN101171968A公开了通过谷类固态发酵冬虫夏草和灵芝产品及其制造方法，是利用薏仁、米、小麦、燕麦等不同的谷类或饲料作为冬虫夏草或灵芝固态发酵的发酵产物，将该发酵产物干燥磨成粉状，另外可再加入谷粉及调味剂，即可制成富含膳食纤维、多糖等保健成分，而且方便消费者冲泡饮用的冬虫夏草或灵芝薏仁粉、米粉、小麦粉或燕麦粉。目前，以蛹虫草真菌对花生进行生物转化，即在花生的固体发酵中产生虫草菌素的研究，在国内外未见有报道。在中国全面建设小康社会之时，如果通过花生的生物转化及其系列加工产品的途径摄取虫草菌素等功效成分，对提高人类健康，具有重要意义，前景十分广阔。
发明内容
本发明的目的是提供一种蛹虫草花生及其制备方法，从而弥补现有技术的不足。本发明的蛹虫草花生是以花生作为固体培养基，接种蛹虫草菌培养制备的。
本发明的蛹虫草花生，其一种制备方法如下:将花生用水进行浸泡，浸泡后的花生进行灭菌，冷却后接入蛹虫草菌的种子液进行发酵培养，再发酵结束后风干得到蛹虫草花生。本发明的蛹虫草菌的种子液，其制备用的种子培养基组成如下:马铃薯18 22%,葡萄糖I 3%，蛋白胨0.1 0.5%，磷酸二氢钾0.03 0.1%，硫酸镁0.05 0.5%，余量为水。上述的种子液，还添加有中华真地鳖肽混合物,添加的浓度为0.005%。所述的中华真地鳖肽混合物，是将中华真地鳖粉加入蒸馏水后，用木瓜蛋白酶进行酶解，酶解液过滤干燥制备的。上述的发酵培养，是在22 °C下暗室培养5 8天后，接着在明室培养3 6天完成发酵。为了获得更好的发酵效果，对浸泡的花生在灭菌前用酶进行了处理；所述的用酶进行处理，是对浸泡的花生加入添加有纤维素酶的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液进行酶解；所述的纤维素加酶量为8000 12000U/g花生；50°C下进行酶处理I 3小时。蛹虫草在花生中进行生物转化时，花生的种皮对其有抑制作用。因此，对浸泡花生进行去皮处理，能够提高其发酵后的虫草菌素含量。故通过纤维素酶处理，达到黄豆去皮的目的，从而提高蛹虫草黄豆中的虫草菌素转化量。
具体实施例方式本发明的蛹虫草菌(Cordyceps militaris)可选用任一食品领域中应用的蛹虫草菌的菌种。而且，为了使蛹虫草菌在培养基中的活力更高，本发明对培养基的组分进行了长期的研究，提供一种能明显增强蛹虫草菌活力的培养基。下面结合实施例对本发明的蛹虫草花生及其制备方法进行详细的描述。实施例1I)花生浸泡称取花育23号品种花生250g，加入500g的水，在室温下浸泡12h，使浸泡后的花生含水量控制在100 120%范围内。2)灭菌将浸泡后的花生浙干后，分装到三角瓶中，盖好塞子，在121°C温度下，灭菌30分钟，冷却后待接种。3)蛹虫草菌种斜面培养将保存好的蛹虫草菌种在斜面培养基上接种，在23°C的温度下，培养7 9天，其斜面培养基的组成为:马铃薯18 22%，葡萄糖I 3%，蛋白胨0.1 1.0%，磷酸二氢钾
0.1 0.5%，硫酸镁0.1 0.3%，维生素B1 0.008 0.02%,琼脂I 3%。其中具体的一种配方如下:马铃薯20%，葡萄糖2%，蛋白胨0.5%，磷酸二氢钾0.3%，硫酸镁0.25%，维生素B10.01%,琼脂2%。配制的方法，是将20g马铃薯切块，添加IOOmL水，煮沸20分钟，在煮沸和冷却过程中不断补水，最终调至IOOmL后进行过滤。将2g葡萄糖、0.5g蛋白胨、0.3g磷酸二氢钾、0.25g硫酸镁，0.0lg维 生素B1, 2g琼脂溶于IOOmL马铃薯滤液。
4)蛹虫草液体种子液的培养取面积达10 30 mm 2的斜面蛹虫草菌种，接到种子液培养基中，在20 25°C的温度下，培养2 6天得到种子液。其液体种子培养基的质量百分比组成为:马铃薯18 22%，葡萄糖I 3%，蛋白胨0.1 0.5%，磷酸二氢钾0.03 0.1%，硫酸镁0.05 0.5%。其中具体的一种配方如下:马铃薯20%，葡萄糖2%，蛋白胨0.2%，磷酸二氢钾
0.05%，硫酸镁0.1%。配制的方法，是将20g马铃薯切块，添加IOOmL水，煮沸20分钟，在煮沸和冷却过程中不断补水，最终调至IOOmL后进行过滤。将2g葡萄糖、0.2g蛋白胨、0.05g磷酸二氢钾、0.1g硫酸镁，溶于IOOmL马铃薯滤液。5)蛹虫草液体种子液的扩大培养将上述蛹虫草 液体种子液，按8 15%的体积比接到扩大液体种子液培养基中，在20 25°C的温度下，进行蛹虫草扩大培养2 6天。为了更好的提高培养的蛹虫草菌的发酵活力，在种子液培养基中添加中华真地鳖肽混合物，添加质量百分比浓度0.005%,即IOOml培养基中添加0.005g的中华真地鳖肽混合物。其中中华真地鳖肽混合物的一种制备方法如下:取20g经冷冻干燥后的中华真地鳖粉，加入400ml蒸馏水，用10%Na0H调节pH值至
8.2，再按300U/g原料加入木瓜蛋白酶，在37°C下酶解5h。将酶解液在80°C下，灭酶15min后，以10000r/min的转速离心15min，取上清液，得到中华真地鳖酶解液。为获得低分子量肽混合物，将酶解液的上清液用2500Da分子量超滤膜进行过滤，除去大分子蛋白质，收集滤过液，再用250Da分子量超滤膜进行过滤，除去小分子盐类，收集截留液进行浓缩，冷冻干燥，获得分子量小于2500Da的中华真地鳖多肽混合物。6)蛹虫草花生的固体培养将培养好的蛹虫 草液体扩大种子液，按10 25% (v/w)的接种量接到灭菌后冷却好的花生上，在22°C下暗室培养5 8天后，接着在明室培养3 6天；所述的明室的光亮度就是IS-RDU3型号恒温震荡器中设置的白炽灯功率16瓦。在明室培养过程中适当进行搅拌。7)干燥发酵结束后的蛹虫草花生，呈黄色 橙黄色，用自然风进行阴干，得到蛹虫草花生成品。8)虫草菌素含量测定方法采用高效液相色谱法。虫草菌素的提取:将粉碎好的蛹虫草花生，过筛(60目)后，按1:20的料液比添加20%的乙醇，在超声器(40KHz，40°C)中进行提取30 60分钟。虫草菌素提取结束后，在IOOOOrpm转速下离心10分钟。将利用0.22Mm滤膜过滤后的上清液作为测定虫草菌素的待测样品。液相条件为柱子使用KnauerC18 ;柱温，30°C ;检测波长，260nm ;流动相，乙腈:7欠=10:90 ;流速:0.8mL/min。在本实施例中制备的蛹虫草花生中的虫草菌素含量在9 12g/kg，与大米蛹虫草和蚕蛹冬虫夏草中的虫草菌素含量相比分别提高至2 5倍和15 19倍。而通过添加中华真地鳖肽混合物，使后续制备的花生中的虫草菌素得到增加，检测结果表明，添加中华真地鳖肽混合物比不添加的情况下，花生中的虫草菌素含量提升30 70%ο实施例2I)花生浸泡称取花育23号品种花生250g，按1:2 1:5的比例加水，在室温下浸泡10 16h，使花生含水量控制在100 120%。2)花生纤维素酶处理将浸泡好的花生，浙干后装入到三角瓶中按1:3 5料液比添加柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，在50°C下进行纤维素酶处理I 3小时，加酶量为8000 12000U/g花生，用流水冲洗10 20分钟后浙干，在阴干处干燥5 8小时。纤维素酶来源于绿色木酶，活力为 11000U/mg。3)灭菌10 15目去皮花生颗粒，分装到三角瓶中，盖好塞子，在121 °C温度下，灭菌30分钟，冷却后待接种。4)蛹虫草菌种斜面培养将保存好的蛹虫草菌种在斜面培养基上接种，在23°C的温度下，培养7 9天，其斜面培养基的组成为:马铃薯18 22%，葡萄糖I 3%，蛋白胨0.1 1.0%，磷酸二氢钾
0.1 0.5%，硫酸镁0 .1 0.3%，维生素B1 0.008 0.02%,琼脂I 3%。其中具体的一种配方如下:马铃薯20%，葡萄糖2%，蛋白胨0.5%，磷酸二氢钾0.3%，硫酸镁0.25%，维生素B10.01%,琼脂2%。配制的方法，是将20g马铃薯切块，添加IOOmL水，煮沸20分钟，在煮沸和冷却过程中不断补水，最终调至IOOmL后进行过滤。将2g葡萄糖、0.5g蛋白胨、0.3g磷酸二氢钾、0.25g硫酸镁，0.0lg维生素B1, 2g琼脂溶于IOOmL马铃薯滤液。5)蛹虫草液体种子液的培养取面积达10 30 mm 2的斜面蛹虫草菌种，接到种子液培养基中，在20 25°C的温度下，培养2 6天得到种子液。其液体种子培养基的质量百分比组成为:马铃薯18 22%，葡萄糖I 3%，蛋白胨0.1 0.5%，磷酸二氢钾0.03 0.1%，硫酸镁0.05 0.5%。其中具体的一种配方如下:马铃薯20%，葡萄糖2%，蛋白胨0.2%，磷酸二氢钾
0.05%，硫酸镁0.1%。配制的方法，是将20g马铃薯切块，添加IOOmL水，煮沸20分钟，在煮沸和冷却过程中不断补水，最终调至IOOmL后进行过滤。将2g葡萄糖、0.2g蛋白胨、0.05g磷酸二氢钾、0.1g硫酸镁，溶于IOOmL马铃薯滤液，并加入0.005g的中华真地鳖肽混合物，其中中华真地鳖肽混合物按照实施例1中的方法制备的。6)蛹虫草液体种子液的扩大培养将上述蛹虫草液体种子液，按8 15%的体积比接到扩大液体种子液培养基中，在20 25°C的温度下，进行蛹虫草扩大培养2 6天。7)蛹虫草花生的固体培养将培养好的蛹虫草液体扩大种子液，按10 25% (v/w)的接种量接到灭菌后冷却好的花生上，在22°C下暗室培养5 8天后，接着在明室培养3 6天；所述的明室的光亮度就是IS-RDU3型号恒温震荡器中设置的白炽灯功率16瓦。在明室培养过程中适当进行搅拌。
8)干燥发酵结束后的蛹虫草花生，呈黄色 橙黄色，用自然风进行阴干，得到蛹虫草花生成品。利用去皮花生制备的蛹虫草花生中的虫草菌素含量在13 16g/kg,与未去皮花生相比，虫草菌素含量提升30 40%。本发明制备的蛹虫草花生提高免疫及抗氧化效果检测:小鼠分别喂食含有O (基础日粮)、3%、6%、12%蛹虫草花生(实施例2制备的)以及12%普通花生的日粮，以小鼠血浆和肝脏中MDA含量，CAT、GSH-Px、T-SOD活力及抑制羟自由基能力为指标，研究其体内抗氧化活性(小鼠注射D-半乳糖建立衰老模型)；测定血浆和肝脏组织中免疫球蛋白G、M含量及细胞因子白细胞介素4、Y-干扰素含量，研究小鼠免疫功能。结果表明，添加蛹虫草花生可以显著提高小鼠血浆和肝脏中CAT、GSH-Px、T-SOD (P
<0.05)活力，抑制羟自由基能力以及IgG、IgM、IL-4、IFN-Y (P < 0.05)的含量，能够显著提高小鼠脾脏和肝脏指数以及显著降低MDA (P < 0.05)含量，具有延缓衰老以及提高机体免疫功能 的作用。
权利要求
1.一种蛹虫草花生，所述的蛹虫草花生是将花生用水进行浸泡，浸泡后的花生进行灭菌，接入蛹虫草菌的种子液进行发酵培养，再风干得到的。
2.如权利要求1所述的蛹虫草花生，其特征在于所述的蛹虫草菌的种子液，其制备用的种子培养基组成如下:马铃薯18 22%，葡萄糖I 3%，蛋白胨0.1 0.5%，磷酸二氢钾0.0l 0.06%，硫酸镁0.1 0.3%，余量为水。
3.如权利要求2所述的蛹虫草花生，其特征在于，所述的种子培养基添加有中华真地鳖肽混合物，添加的浓度为0.005%。
4.如权利要求3所述的蛹虫草花生，其特征在于所述的中华真地鳖肽混合物，是将中华真地鳖粉加入蒸馏水后，用木瓜蛋白酶进行酶解，酶解液过滤干燥制备的。
5.如权利要求1所述的蛹虫草花生，其特征在于所述的发酵培养，是在22°C下暗室培养5 8天后，接着在明室培养3 6天完成的。
6.如权利要求1所述的蛹虫草花生，其特征在于所述的浸泡的花生在灭菌前用酶进行了处理，是对浸泡的花生加入添 加有纤维素酶的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液进行酶解。
7.如权利要求6所述的蛹虫草花生，其特征在于所述的纤维素加酶量为8000 12000万U/g花生；50°C下进行酶处理I 3小时。
全文摘要
本发明涉及一种蛹虫草花生，是将花生用水进行浸泡，浸泡后的花生进行灭菌，冷却后接入蛹虫草菌的种子液进行发酵培养，再发酵结束后风干得到蛹虫草花生。蛹虫草在花生中进行生物转化时，花生的种皮对其有适当的抑制作用。因此，对浸泡花生进行去皮处理，能够提高其发酵后的虫草菌素含量。另外，增大而均匀接种面积，可以提高蛹虫草虫草菌素的生物转化量。故通过纤维素酶处理，提高对浸泡花生的去皮率，并将去皮后的花生，提高蛹虫草花生中的虫草菌素转化量。
文档编号A01G1/04GK103229666SQ201310151228
公开日2013年8月7日 申请日期2013年4月27日 优先权日2013年4月27日
发明者朴美子, 王莹, 程凡升, 郭芳言 申请人:青岛农业大学