蛹虫草生产方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及蛹虫草，具体涉及一种蛹虫草生产方法。
【背景技术】
[0002]野生虫草的分布有其独特的气候条件和地理环境，生长区域和产量受到极大限制。目前，随着对虫草保健品的深入研究与开发，野生虫草远远不能满足人们日益增长的要求。因此通过人工进行虫草的繁殖和培育，迎合了市场的需要。现在，科研工作者已经在鳞翅目昆虫中成功地繁殖和培育出蛹虫草。人工培养的蛹虫草不论是化学成分，还是药理作用都与野生的虫草区别甚微，完全可以作为替代品。因此，通过人工驯化，工厂化生产，为这一名贵中药材的开发利用开辟了广阔前景。
[0003]南阳，作为张仲景的故里，早有“三步一药”之称。近几年，西峡山茱萸、南召辛夷、方城裕丹参、唐河桅子和半夏5个中药材基地先后获得国家原产地保护认证，但是作为药用菌的开发还很有限，蛹虫草的试验研究还是空白，更不用说开发利用了。因此研究蛹虫草的生产方法，对于素有“华药之乡”的南阳尤为重要，它不仅丰富了我市的药材品种，也会为经济发展做出积极的贡献。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是设计一种蛹虫草生产方法，利用该方法通过人工进行虫草的繁殖和培育，可为生产者带来较高的经济效益。
[0005]为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是:一种蛹虫草生产方法，包括以下方法:
培养基配制一分装一灭菌冷却一接种一培养一检查一成品，其中:
培养基配制，分固体母种培养基和液体生产种培养基；
固体母种培养基配方为:
(1).马铃薯200.0g,葡萄糖20.0g,磷酸二氢钾3.0g,硫酸镁1.5g，维生素B1 10.0mg,琼脂 20.0g,水 1000ml，pH 值 6.0 ?7.0 ;
⑵.葡萄糖100.0g,蛋白胨10.0g,酵母膏1.0g,磷酸二氢钾3.0g,硫酸镁1.5g，琼脂20.0g,水 1000ml，pH 值 6.0 ?7.0 ;
液体生产种培养基配方为:
(1).马铃薯200.0g,蚕蛹粉10.0g,葡萄糖20.0g,磷酸二氢钾3.0g,硫酸镁1.5g，维生素 B1 50 mg,水 1000ml，pH 值 6.0 ?7.0 ;
⑵.葡萄糖100.0g,蛋白胨10.0g,酵母膏1.0g,磷酸二氢钾3.0g,硫酸镁1.5g，琼脂20.0g,水 1000ml，pH 值 6.0 ?7.0 ;
分装，对于固体母种培养基，按配方称好各种原料，将马铃薯洗净去皮去芽眼，称取200g,切成3?5mm薄片,加水1000ml,文火煮沸20?30分钟,用4层纱布过滤,滤液放回锅内，加入琼脂充分溶化，再依次加入其它成分，搅拌溶解后，加开水补足至100ml，趁热分装试管，装量为试管的1/4?1/5，塞入胶塞；
对于液体生产种培养基，按配方称好各种原料，将马铃薯去皮去芽眼，称取200g，切成3?5mm厚的薄片，与营养基质一起放入锅中，文火煮沸20?30分钟，用8层纱布过滤，滤液用开水补足至1000毫升，再依次加入其它成分，搅拌溶解，然后装入玻璃输液瓶中，液体装量不宜超过容器总容积的2/5，瓶口用聚丙烯塑料薄膜和乳胶圈封口 ；
灭菌冷却，对于固体母种培养基，高压蒸汽灭菌0.1lMPa，保持30分钟，当压力降至“O”时，打开气阀，取出灭菌物，摆成斜面；
对于液体生产种培养基，采用高压蒸汽灭菌，高压蒸汽灭菌0.1lMPa,保持30分钟，当灭菌器的压力降为零时，开启灭菌器，取出菌种瓶，菌种瓶冷却至室温后方可接种；
接种，对于固体母种培养基，将待接种的培养基放入接种箱，同时放入接种工具并进行消毒，同时配合紫外线照射进行空间消毒40分钟；将试管的棉塞齐管或瓶口剪去，用75%酒精棉擦洗外壁，将接种工具在酒精灯火焰上烧灼后，置于清洁的空试管内冷却备用；将试管母种放在万能夹上，旋转式取下棉塞，右手端起酒精灯，让火焰接触管口，左手将试管慢慢旋转3?4周，然后将试管固定牢；试管口要控制在离酒精火焰1cm范围内进行操作；用杀菌后的备用接种钩，除去母种斜面的尖端部分以及中央的母种块，随后将接种钩放回母种试管；左手持预接种的试管培养基，管口稍向下倾斜，用右手小拇指和无名指、食指和中指持接种钩，从母种试管内钩取直径约2mm大小的种块，放入预接种培养基斜面中央，抽出接种钩，放回母种试管，轻燎右手所持棉塞，旋转式塞入接过菌的试管，由右手放到适当位置，连续完成所有预接种试管；
对于液体生产种培养基，在无菌操作条件下，用接种钩从母种斜面中切取lcm2菌面放入液体菌种培养瓶中，迅速用聚丙烯塑料薄膜和乳胶圈封扎瓶口，每支母种可接种10?15瓶液体生产种；
培养，种培养温度18?23°C，种培养湿度60?65%，菌种培养光线为黑暗条件，菌种培养空气为环境清新无异味；
对于固体母种培养基，固体母种7?10天长满试管；
对于液体生产种培养基，液体生产种的生产,主要采用摇床振荡培养,震荡频率依据摇床性能和菌种性质进行适当调节，要求培养的菌种菌球密度大、菌丝挂瓶壁少、培养周期短以及接种后定殖能力强、发菌快；往复式摇床60?70次/分钟，旋转式摇床100?120转/分钟，振荡培养时间为4?6天；没有设备条件的可采用静止培养，静止培养时间为7?10天；
检查，培养期间定期检查，一般每天检查2次，及时淘汰染菌或劣势菌种；
成品，最后出成品。
[0006]其中，所述营养基质为马铃薯、玉米粉、蚕蛹粉、大豆粉、豆柏粉、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏(粉)、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1为原料，经配制而成。
[0007]本发明采用上述技术方案所设计的蛹虫草生产方法，通过人工进行虫草的繁殖和培育，迎合了市场的需要，通过人工驯化，工厂化生产，为这一名贵中药材的开发利用开辟了广阔前景，对广大生产者带来较高的经济效益。
【附图说明】
[0008]图1表示本发明蛹虫草生产方法的流程示意图。
【具体实施方式】
[0009]下面结合附图对本发明蛹虫草生产方法作具体说明。
[0010]本发明蛹虫草生产方法用马铃薯、玉米粉、蚕蛹粉、大豆粉、豆柏粉、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏(粉)、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素氏等为原料，经配制后做为北虫草的营养基质。其中，玉米粉、蚕蛹粉、大豆粉、豆柏粉为市售产品，要求无结块无变质；马玲薯出芽变绿的不能使用；蛋白胨、酵母膏(粉)为生化试剂；葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁为化学纯以上级试剂；琼脂、维生素B1为食品级以上产品；水为自来水等可饮用水。
[0011]本发明蛹虫草生产方法使用的培养容器为:
1.固体母种生产容器，使用玻璃试管和胶塞，试管规格为18X 180mm或20X 200mm，试管塞一般采用胶塞，保存时间短直接用于液体生产种的可以使用棉塞，不能使用脱脂棉做试管塞。
[0012]2.液体生产种生产容器，使用250ml、500ml玻璃输液瓶，用聚丙烯塑料薄膜和乳胶圈封口。
[0013]参见图1，本发明蛹虫草生产方法包括以下方法:
培养基配制一分装一灭菌冷却一接种一培养一检查一成品，其中:
培养基配制，分固体母种培养基和液体生产种培养基；
固体母种培养基配方为:
(1).马铃薯200.0g,葡萄糖20.0g,磷酸二氢钾3.0g,硫酸镁1.5g，维生素B1 10.0mg,琼脂 20.0g,水 1000ml，pH 值 6.0 ?7.0 ;
⑵.葡萄糖100.0g,蛋白胨10.0g,酵母膏1.0g,磷酸二氢钾3.0g,硫酸镁1.5g，琼脂20.0g,水 1000ml，pH 值 6.0 ?7.0 ;
液体生产种培养基配方为:
(1).马铃薯200.0g,蚕蛹粉10.0g,葡萄糖20.0g,磷酸二氢钾3.0g,硫酸镁1.5g，维生素 B1 50 mg,水 1000ml，pH 值 6.0 ?7.0 ;
⑵.葡萄糖100.0g,蛋白胨10.0g,酵母膏1.0g,磷酸二氢钾3.0g,硫酸镁1.5g，琼脂20.0g,水 1000ml，pH 值 6.0 ?7.0 ;
分装，对于固体母种培养基，按配方称好各种原料，将马铃薯洗净去皮去芽眼，称取200g,切成3?5mm薄片,加水1000ml,文火煮沸20?30分钟,用4层纱布过滤,滤液放回锅内，加入琼脂充分溶化，再依次加入其它成分，搅拌溶解后，加开水补足至100ml，趁热分装试管，装量为试管的1/4?1/5，塞入胶塞；
对于液体生产种培养基，按配方称好各种原