料，将马铃薯去皮去芽眼，称取200g，切成3?5mm厚的薄片，与蚕蛹粉(或其它配方中的玉米粉、大豆粉、豆柏粉等农产品原料)一起放入锅中，文火煮沸20?30分钟，用8层纱布过滤，滤液用开水补足至1000毫升，再依次加入其它成分，搅拌溶解，然后装入玻璃输液瓶中，液体装量不宜超过容器总容积的2/5，瓶口用聚丙烯塑料薄膜和乳胶圈封口；
灭菌冷却，对于固体母种培养基，高压蒸汽灭菌0.1lMPa，保持30分钟，当压力降至“O”时，打开气阀，取出灭菌物，摆成斜面； 对于液体生产种培养基，采用高压蒸汽灭菌，高压蒸汽灭菌0.1lMPa,保持30分钟，当灭菌器的压力降为零时，开启灭菌器，取出菌种瓶，菌种瓶冷却至室温后方可接种；
接种，对于固体母种培养基，将待接种的培养基放入接种箱，同时放入所用的接种工具，用化学药物进行消毒。同时配合紫外线照射进行空间消毒40分钟；将试管的棉塞齐管或瓶口剪去，用75%酒精棉擦洗外壁，将接种工具(钩、铲、刀等)在酒精灯火焰上烧灼后，置于清洁的空试管内冷却备用；将试管母种放在万能夹上，旋转式取下棉塞，右手端起酒精灯，让火焰接触管口，左手将试管慢慢旋转3?4周，然后将试管固定牢；试管口要控制在离酒精火焰1cm范围内进行操作；用杀菌后的备用接种钩，除去母种斜面的尖端部分以及中央的母种块，随后将接种钩放回母种试管；左手持预接种的试管培养基，管口稍向下倾斜，用右手小拇指和无名指、食指和中指持接种钩，从母种试管内钩取直径约2mm大小的种块，放入预接种培养基斜面中央，抽出接种钩，放回母种试管，轻燎右手所持棉塞，旋转式塞入接过菌的试管，由右手放到适当位置，连续完成所有预接种试管；
对于液体生产种培养基，在无菌操作条件下，用接种钩从母种斜面中切取lcm2菌面(可稍带培养基)放入液体菌种培养瓶中，迅速用聚丙烯塑料薄膜和乳胶圈封扎瓶口，每支母种可接种10?15瓶液体生产种；
培养，种培养温度18?23°C，种培养湿度60?65%，菌种培养光线为黑暗条件，菌种培养空气为环境清新无异味；
对于固体母种培养基，固体母种7?10天长满试管；
对于液体生产种培养基，液体生产种的生产,主要采用摇床振荡培养,震荡频率依据摇床性能和菌种性质进行适当调节，要求培养的菌种菌球密度大、菌丝挂瓶壁少、培养周期短以及接种后定殖能力强、发菌快；往复式摇床60?70次/分钟，旋转式摇床100?120转/分钟，振荡培养时间为4?6天；没有设备条件的可采用静止培养，静止培养时间为7?10天；
检查，培养期间定期检查，一般每天检查2次，及时淘汰染菌或劣势菌种；
成品，最后出成品。
[0014]本发明发明人查明了适应我市环境条件的蛹虫草菌菌种，同时引进了四个菌种，通过试验查明CM-23这个菌种表现优秀，可以推广使用。
[0015]本发明使用大米、小麦混合培养基生产效果好。蛹虫草通常是用大米做培养基，也有用小麦做培养基的。发明人经过试验采用大米、小麦(大米占2/3，小麦占1/3)混合培养基进行生产，表现出出草率较高，子实体形状好、色泽好的性能，并且第二茬出草较好，商品价值高，适宜推广应用。
[0016]本发明对柞蚕蛹灭菌接种，解决蛹体内带菌问题。一般用蚕蛹生产蛹虫草多是采用化学消毒方法，只解决蛹体表面带菌问题，造成成功率较低。发明人采用大米做底放入蚕蛹湿热高压灭菌，灭菌彻底，解决了蚕蛹带菌问题，菌丝生长迅速，蚕蛹出草快，成功率高，蛹虫草产量高、色泽好。
[0017]本发明对蛹虫草复壮的问题。蛹虫草菌种因环境问题优良性能极易退化，发明人经过多次试验采用组织分离、孢子散落法对菌种进行复壮，解决了品种退化问题。
【主权项】
1.一种蛹虫草生产方法，其特征是包括以下方法: 培养基配制一分装一灭菌冷却一接种一培养一检查一成品，其中: 培养基配制，分固体母种培养基和液体生产种培养基； 固体母种培养基配方为: (1).马铃薯200.0g,葡萄糖20.0g,磷酸二氢钾3.0g,硫酸镁1.5g，维生素B1 10.0mg,琼脂 20.0g,水 1000ml，pH 值 6.0 ?7.0 ; ⑵.葡萄糖100.0g,蛋白胨10.0g,酵母膏1.0g,磷酸二氢钾3.0g,硫酸镁1.5g，琼脂20.0g,水 1000ml，pH 值 6.0 ?7.0 ; 液体生产种培养基配方为: (1).马铃薯200.0g,蚕蛹粉10.0g,葡萄糖20.0g,磷酸二氢钾3.0g,硫酸镁1.5g，维生素 B1 50 mg,水 1000ml，pH 值 6.0 ?7.0 ; ⑵.葡萄糖100.0g,蛋白胨10.0g,酵母膏1.0g,磷酸二氢钾3.0g,硫酸镁1.5g，琼脂20.0g,水 1000ml，pH 值 6.0 ?7.0 ; 分装，对于固体母种培养基，按配方称好各种原料，将马铃薯洗净去皮去芽眼，称取200g,切成3?5mm薄片,加水1000ml,文火煮沸20?30分钟,用4层纱布过滤,滤液放回锅内，加入琼脂充分溶化，再依次加入其它成分，搅拌溶解后，加开水补足至100ml，趁热分装试管，装量为试管的1/4?1/5，塞入胶塞； 对于液体生产种培养基，按配方称好各种原料，将马铃薯去皮去芽眼，称取200g，切成3?5mm厚的薄片，与营养基质一起放入锅中，文火煮沸20?30分钟，用8层纱布过滤，滤液用开水补足至1000毫升，再依次加入其它成分，搅拌溶解，然后装入玻璃输液瓶中，液体装量不宜超过容器总容积的2/5，瓶口用聚丙烯塑料薄膜和乳胶圈封口 ； 灭菌冷却，对于固体母种培养基，高压蒸汽灭菌0.1lMPa，保持30分钟，当压力降至“O”时，打开气阀，取出灭菌物，摆成斜面； 对于液体生产种培养基，采用高压蒸汽灭菌，高压蒸汽灭菌0.1lMPa,保持30分钟，当灭菌器的压力降为零时，开启灭菌器，取出菌种瓶，菌种瓶冷却至室温后方可接种； 接种，对于固体母种培养基，将待接种的培养基放入接种箱，同时放入接种工具并进行消毒，同时配合紫外线照射进行空间消毒40分钟；将试管的棉塞齐管或瓶口剪去，用75%酒精棉擦洗外壁，将接种工具在酒精灯火焰上烧灼后，置于清洁的空试管内冷却备用；将试管母种放在万能夹上，旋转式取下棉塞，右手端起酒精灯，让火焰接触管口，左手将试管慢慢旋转3?4周，然后将试管固定牢；试管口要控制在离酒精火焰1cm范围内进行操作；用杀菌后的备用接种钩，除去母种斜面的尖端部分以及中央的母种块，随后将接种钩放回母种试管；左手持预接种的试管培养基，管口稍向下倾斜，用右手小拇指和无名指、食指和中指持接种钩，从母种试管内钩取直径约2mm大小的种块，放入预接种培养基斜面中央，抽出接种钩，放回母种试管，轻燎右手所持棉塞，旋转式塞入接过菌的试管，由右手放到适当位置，连续完成所有预接种试管； 对于液体生产种培养基，在无菌操作条件下，用接种钩从母种斜面中切取lcm2菌面放入液体菌种培养瓶中，迅速用聚丙烯塑料薄膜和乳胶圈封扎瓶口，每支母种可接种10?15瓶液体生产种； 培养，种培养温度18?23°C，种培养湿度60?65%，菌种培养光线为黑暗条件，菌种培养空气为环境清新无异味； 对于固体母种培养基，固体母种7?10天长满试管； 对于液体生产种培养基，液体生产种的生产,主要采用摇床振荡培养,震荡频率依据摇床性能和菌种性质进行适当调节，要求培养的菌种菌球密度大、菌丝挂瓶壁少、培养周期短以及接种后定殖能力强、发菌快；往复式摇床60?70次/分钟，旋转式摇床100?120转/分钟，振荡培养时间为4?6天；没有设备条件的可采用静止培养，静止培养时间为7?10天； 检查，培养期间定期检查，一般每天检查2次，及时淘汰染菌或劣势菌种； 成品，最后出成品。
2.根据权利要求1所述的蛹虫草生产方法，其特征是所述营养基质为马铃薯、玉米粉、蚕蛹粉、大豆粉、豆柏粉、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏(粉)、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1为原料，经配制而成。
【专利摘要】本发明提出了一种蛹虫草生产方法，其特点是采用培养基配制→分装→灭菌冷却→接种→培养→检查→成品工艺。本发明工艺通过人工进行虫草的繁殖和培育，解决了蚕蛹带菌和品种退化的问题，菌丝生长迅速，蚕蛹出草快，成功率高，蛹虫草产量高、色泽好，迎合了市场的需要，通过人工驯化，工厂化生产，为这一名贵中药材的开发利用开辟了广阔前景，对广大生产者带来较高的经济效益。
【IPC分类】C05G3-00, A01G1-04
【公开号】CN104604522
【申请号】CN201510023804
【发明人】卢福堂, 王志强, 夏辉, 魏会丽, 卢瑶, 王迎旺
【申请人】河南省民兴茧丝绸有限责任公司
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年1月19日