生产中药材蛹虫草的规范化操作方法

专利名称：：生产中药材蛹虫草的规范化操作方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药材蛹虫草生产的标准方法及专用干燥装置。
背景技术：
：蛹虫草(Corc(Fce/5"啦7its/^(L.)Link.)，又称北冬虫夏草、北虫草、蛹草，是一种正在开发之中的中药材。虫草是一种长在虫体或蛹体上的棒状真菌，虫体(包括幼虫和成虫)或蛹体只是这种真菌的培养基。虫草是虫体(蛹体)与真菌的复合体。'昆虫感染虫草真菌后，虫草真菌在其体内逐步生长，直到充满幼虫(蛹)体，使幼虫变成菌核而外形不变。之后，从幼虫(蛹)体长出子实体，如草状，故名虫草。虫草见诸于国内外文献记载已经有三百五十多种。有的生长在幼虫体上，有的长在蛹上，有的生长在成虫体上。蛹虫草又称蛹草、北虫草、北冬虫夏草，主产于云南，吉林的山林之中，多生于阔叶林或杂交林表土层中的鳞翅目昆虫的蛹体上。蛹虫草与冬虫夏草同属虫草属(C办c印s)，蛹虫草是这个属的模式种。虫草的质量区别标准主要是特有成份的含量，如虫草素，青海产的冬虫夏草每100克中含有100毫克以下，而蛹虫草一般为200-300毫克以上。三十年来，冬虫夏草的价格上涨了几十倍。当前，礼品级的冬虫夏草零售价已经达到每公斤50万元，统货也达15万元左右。冬虫夏草价格上涨的原因源于它的治疗价值。自80年代初起，医学界以现代生物医学的视角重新发现了冬虫夏草。至今，已经有大量的临床研究报告表明，冬虫夏草对肾衰、肺病等多种疾病有确切的治疗作用。冬虫夏草的临床意义不仅在于对抗性治疗，而且在于对人体各脏器功能的治疗、保护和协调作用，涉及心、肝、肺、肾、神经、血管、皮肤、骨骼、免疫等系统。因此冬虫夏草对于重患、老年或疑难病患，特别是以西医药治疗为主，疗效欠佳者尤显珍贵。冬虫夏草之所以珍贵，说到底是因为它具备特殊的有效成份。虫草的特异性物质是虫草素(cOTdyc印in)是一种具有抗菌活性的核苷类物质，对核多聚腺苷酸聚合酶有很强的抑制作用。在DNA转录raRNA过程中使mRNA成熟障碍，抑制癌细胞的生长。虫草多糖是一种高度分枝的半乳甘露聚糖，能促进淋巴细胞转化，提高血清IgG的抗体含量和机体的免疫功能，增强机体自身抗癌抑癌的能力。S0D(超氧化物歧化酶)可以消除机体内超氧自由基，具有抗衰老、抗癌抑癌的作用。而蛹虫草之所以受到重视也在于，它的各种有效成份相当于的冬虫夏草，但其中虫草素含量却高于冬虫夏草几倍到十几倍。为了开发蛹虫草，国内外学者开展了多方位的研究工作，涉及生物学(蛹虫草形态、生态、分布、宿主、生理等)、栽培培养方法(蛹虫草液体发酵生产、代料固体培养、生物宿主生态培养等)、药物化学(蛹虫草有效成份分析、有效成份比较等)、毒理学(蛹虫草急性毒性、亚急性、长期毒性等)、药理学(蛹虫草抗肿瘤、肾小管修复、降低血糖、免疫调节、改善性功能障碍、抗疲劳、抗氧化抗衰老等)、临床治疗(蛹虫草治疗肿瘤、肾病、肝纤维化、高血压、糖尿病、老年慢性支气管炎、经常性感冒、外伤性神经恢复、运动疲劳等)，这些研究的结果表明，蛹虫草的药用价值是确切的、公认的、不容置疑的。至今，蛹虫草的开发利用已经二十年了，蛹虫草菌丝发酵产品(蛹虫草菌丝胶囊)已经取得了正式生产批准文号(国药准字Z20030034/35)，蛹虫草保健食品(国食健字G20060617)也已经获批。做为地产中药材，蛹虫草组方在民间临床组方或协议方也已经有十年之久。今后，发展中成药已经成为蛹虫草开发的必然趋势。二十年来，蛹虫草的开发形成了在食用菌概念指导下的、在微生物制药概念指导下的和在中药材概念指导下的三个不同取向。A:在食用菌概念指导下的，以代用培养料为基质，将蛹虫草当成一种蘑菇进行栽培。表现为仅以子实体为培养目标，常以大米为主要原料，蛹虫草子实体或直接食用，或进而开发成食品、药膳食品或复方保健食品。B:在微生物制药概念指导下的，以液体发酵罐为手段，以蛹虫草菌丝体为培养目标，迸而开发成药品、保健食品。C:在中药材概念指导下的，以虫体或虫蛹为基质，以完整蛹虫草全草为培养目标，或直接食用、药用，或进而开发成食品、药膳食品或保健食品。以虫或蛹为基质进行蛹虫草培养的，在当前也分做三个发展方向以桑蚕为基质、以柞蚕为基质或以其他昆虫(如松毛虫、黄粉虫)为基质。由于基质昆虫的不同，其药用价值有差异。以桑蚕为基质进行蛹虫草培养，当前也发展成四个不同的分枝以老龄桑蚕幼虫为基质、以鲜活桑蚕蛹(剖茧蛹)为基质、以烘干桑蚕蛹为基质或以鲜或干蚕蛹的提取物加其他成份组成合成培养基。这些差异导致相应的蛹虫草生产工艺不同，生产成本不同，其药用价值之间也存在不同。二十年来，将蛹虫草子实体当成一种蘑菇进行栽培，已经积累了相当丰富的栽培经验，形成了整套的方法学，并且发展成规模生产规范化管理。将蛹虫草菌丝当成一种制药中间体进行培养，也已经形成了数十吨的生产能力，其产品已经作为新药上市场。但是，用做中药材概念指导下的，以完整蛹虫草全草为培养目的物进行规模化、规范化生产者，本发明尚属首例。什么是蛹虫草(又称北虫草)？不同的人给出不同的答案；什么样的蛹虫草是中药材蛹虫草？答案也有所不同。行业中甚至出现这样一种概念同一个蛹虫草菌种，长在大米上的叫北虫草，长在蛹上的叫蛹虫草，长在柞蚕蛹上的与长在桑蚕蛹上的没区别，等等。面对这样一种混乱局面，中药师何以适从，中医师何以敢用！至于何以判断其中优劣、哪个地道，则更是无法可依，无从谈起。规范化种植标准操作规程(SOP)是发展地道中药材的基础和前提。对于正在开发之中的蛹虫草来说，S0P的意义除了蛹虫草地道化的需要以外，还是推动蛹虫草中药材临床使用和进一步开发复方蛹虫草中成药的前提，这也是蛹虫草开发进程的必然。建立蛹虫草的中药材生产标准操作规程(S0P)，无疑将有助于使蛹虫草栽培生产的规范化，进而促进蛹虫草成为中药材新药的进程。
发明内容本发明的目的在于提供一种规范化生产中药材蛹虫草的标准方法及专用干燥装置。本发明的技术解决方案是一种规范化规模栽培用作中药材的蛹虫草的方法，其特征是包括下列步骤-A:采用有机桑蚕蛹，包括自有机蚕桑基地取得蚕茧，然后自蚕蛹收、储和加工场地获得蚕蛹，作为中药材蛹虫草所用的培养基；B:采用适合中药材蛹虫草的菌种，是经过选育、冻干保藏、激活、通过菌种检验的菌种；C:采用规范化培养方法，包括前培养方法、后培养方法；D:采用规范化后处理方法，包括采收干燥方法，包装储运方法；E:采用中药材蛹虫草质量保障方法，包括中药材蛹虫草质量标准、中药材蛹虫草质量检测方法，即建立Q/320691DJK01-2007标准。步骤A中，对蚕茧迸行剖茧、检测蚕蛹重金属，衡量蚕茧品质铅(以Pb计，干重，下同)不高于kig/kg、砷(以As计)不高于O.5mg/kg，汞(以Hg计)不高于O.2mg/kg;中药材蛹虫草所用的培养基采用桑蚕茧缫丝后湿(或经冷冻)的完整蚕蛹；所述缫丝后湿蚕蛹按如下指定工艺加工一级分拣-二级分拣-三级分拣-清洗-漂烫-冷却-用于生产或速冻-包装暂存；经过缫丝等加工程序后，该蚕蛹重金属污染指标仍符合铅不高于lmg/kg、砷不高于0.5mg/kg，汞不高于O.2mg/kg的标准。步骤B中经过选育、冻干保藏、激活等禾呈序所得菌种是否可用于中药材蛹虫草生产，取决于最终所得蛹虫草是否符合Q/320691DJK01-2007标准。步骤C中前培养是将湿蚕蛹或经冷;东的完整蚕蛹装入透明小容器，进行灭菌、接种，然后置于前培养室至前培养结束，透明的小容器中装料量以占3/5(L/L)以下，接种时用不超过48小时菌龄的液体菌种进行接种，在100级净化条件下将液体菌种許^洒在灭过菌的蚕蛹上。接种比10:1至10:3(蚕蛹液体菌种，V/V);前培养温度控制在10。C到25。C之间，20天至60天；步骤C中后培养容器采用透光塑料筐，且透明塑料筐用食品保鲜膜五面或六面包衬，后培养环境温度控制在i5t:到3(rc之间，日温差1(TC，还要控制环境湿度为85%、自然散射光或人工光源，照度200至2000勒克司；培养所得中药材蛹虫草，符合Q/320691DJK01-2007标准。步骤D的干燥采用低温穿流式热风干火喿，热风温度控制在55。C到65。C之间，干燥6至8小时。所述低温穿流式热风干燥采用简易f氐温穿流式热风干燥器，包括风机，风机上设置换热器，换热器上设置多层料盘，料盘上方设置排气罩，换热器热水泵上接有一个热敏头伸入料盘中的控温仪。步骤D包装储运时用塑料袋双层双封R^潮包装，避光、5。C以下冷藏。在经过步骤D处理之后、或再经两年以上保存之后，蛹虫草仍符合Q/320691DJK01-2007标准。以虫草素含量作为检测中药材蛹虫草的指标之一，虫草素含量不低于lmg/g。本发明的优点一、解决蛹虫草中药材的规范化种植中的培养基质选择问题蛹虫草中药材的规范化种植培养基质要满足以下条件在可满足规模生产、来源可靠、质量可控的前提下，要使所得蛹虫草具备完整的、中药材鉴别外观特征和较丰富的有效成份含量。1.本方法与以下发明专利及类似公知技术中的蛹虫草栽培方法不同如"东北虫草的培养方法及其制品(C093117581.X)"、"抗病高产蛹虫草栽培方法(C096115115)"、"北冬虫夏草子实体的培养方法(C099124200.9)"。上述方法仅以子实体为栽培目标，以大米为主要原料，得不到中药材蛹虫草完整外观，有效成份含量较低。2.本方法与发明专利"人工栽培北冬虫夏草提高其生理活性物质含量的方法(C002109304.0)"及类似公知技术中的蛹虫草培养方法不同。上述方法是在液体发酵条件下，以生产蛹虫草菌粉为培养目的物，得不到有鉴别特征的蛹虫草。3.本方法与发明专利"一种用柞蚕蛹培养蛹虫草入药的方法(C094106100)"、"蚕蛹虫草工业化生产方法(C00130381.3)"及类似公知技术中的蛹虫草栽培方法不同。上述技术方法是以鲜活柞蚕(或桑蚕)蛹作培养基，而得到鲜活柞蚕(或桑蚕)蛹要剖开蚕茧，造成不必要的成本损失。4.本方法与发明专利"烘干蚕蛹人工培育虫草的方法(C093102809)"及类似公知技术中的蛹虫草栽培方法不同。上述技术方法是以烘干的桑蚕蛹作培养基。市售干蚕蛹或自然晒干、或煤火烘干而得，多用于词料，前者多杂质、多酸败，后者多铅含量高，不宜使用。5.本方法与发明专利"蛹虫草等虫草的人工培养方法(C097113190)"及类似公知技术中的蛹虫草栽培方法不同。该方法采用蛹的提取物加其他成份组成人工培养基，最终得不到有外观鉴别特征的蛹虫草。本发明的目的之一，是规避以上原料的缺欠，选择适当的培养原料，使培养物有完整的蛹虫草外观鉴别特征，有效成份(如虫草素)含量较高，且质量数量可控人、可满足大量、规模生产的需要。籍此解决蛹虫草中药材的规范化种植中的培养基质材料的选择问题。二、规范用作中药材的蛹虫草培养基质材料来源如上所述，本发明方法采用完整的缫丝后桑蚕蛹作为培养原料。这种原料有其诸多优点，但为了保证生产出合格的中药材蛹虫草，还必需将其限定在无公害绿色或有机的范围内。当前，除了专门为栽培蛹虫草刻意培养的以外，各种蚕(蛹)，包括老龄蚕、鲜蛹、干燥蚕蛹、缫丝后桑蚕蛹，都有来源不确定性。以缫丝后桑蚕蛹为例，缫丝厂的蚕茧档口(批次)经常因为种种原因而变化，至于蚕茧原产地的环境情况，是否受到某种污染，则没人说得清楚。这种现状对中药材蛹虫草的规模生产，保持中药材蛹虫草质量的稳定十分不利。为此，有必要设计一整套可行的管理办法和相应的技术措施，用以规范用作中药材蛹虫草培养材料来源。三、改善用于以上培养料的菌种和菌种使用方法虫草类真菌是寄生与腐生兼性真菌。在自然感染昆虫的过程中，先进行寄生生活，而后(在昆虫死亡之后)进行腐生生活。蚕蛹活体表面接种或蚕蛹活体穿刺接种是利用它的寄生性，也在利用活体自身的天然抗病能力(抵抗杂菌污染)。本发明利用完整的缫丝后桑蚕蛹，具有含水量高，容易酸败等问题，且没有天然抗病能力可以利用，因此需要与其他培养料不同的蛹虫草培养工艺条件。本发明与"蛹虫草等虫草的人工培养方法(C097113190)"及类似公知技术中的蛹虫草栽培方法不同。此类技术中用活体桑蚕(或蛹)栽培蛹虫草，需要以固体菌种或液体菌种，在表面灭菌条件下注射接种在活体桑蚕(或蛹)上，或者将表面灭菌的活体桑蚕(或蛹)投放到固体菌种或液体菌种中，令其自然侵染。这种以活体桑蚕(或蛹)为核心的接种技术因为不能彻底灭菌，所以不能排除潜在感染，还很难排除培养期间的交叉再感染。活体接种技术不适于缫丝后桑蚕蛹。四、解决适用于中药材蛹虫草中的栽培方法问题蛹虫草中药材的规范化种植标准操作规程(SOP)，要求培养出的蛹虫草保留中药材鉴别外观特征，有效成份比含量较高。为此，提出将中药材蛹虫草栽培分为"前培养"和"后培养"两个阶段。已有技术没有涉及到这种专用方法。五、提出适用于中药材蛹虫草的规范化种植的质量管理方法已有技术也没有涉及到中药材蛹虫草质量标准及其检测方法问题。我们建立了中药材蛹虫草质量标准，奠定了蛹虫草的进入中药材序列，促进蛹虫草中成药发展的质量基础。六、提出适用于中药材蛹虫草的规范化种植的后处理方法中药材蛹虫草需要良好的后处理方法。中药材蛹虫草比蛹虫草子实体内部水份扩散距离长，常常有干燥不达标，长期保管变色甚至生霉、化粉(蟎害)。中药材蛹虫草尽管比冬虫夏草价格低，但毕竟是一种珍贵药材，因此不宜用中药材常规方法来保管、储存和运输。为此本发明拟从中药材蛹虫草采收、干燥设备和蛹虫草保存三个角度解决这一问题。七、降低中药材蛹虫草的生产成本为了使蛹虫草中药材及中成药大众化，平民化，提高中药材蛹虫草的市场竞争能力，本发明通过改变原料，改进工艺，进一步降低了成本。总之，本发明将为实施"蛹虫草中药材的规范化种植标准操作方法(SOP)"提供了核心技术。结合本发明，建立中药材蛹虫草生产标准操作方法(SOP)包括A:建立有机桑蚕蛹供应体系的方法。B:中药材蛹虫草菌种保障体系和方法。C:中药材蛹虫草质量保障体系和方法。D:中药材蛹虫草工厂化规模生产中的栽培方法。E:中药材蛹虫草后处理体系和方法。具体可以是-一建立有机桑蚕蛹供应体系的方法1:有机蚕桑基地规范2:桑园管理和养蚕规程3:专用蚕茧采收加工规程4:专用蚕蛹加工规程5:专用蚕蛹贮藏和运输规程6:有机蚕桑基地内部检査规程二中药材蛹虫草菌种保障体系和方法1:用常规组织分离方法自野生蛹虫草或单株筛选蛹虫草2:用常规菌种选育方法，多代重复至性状稳定3:用常规低温菌种保藏，经常检查并做出菇实验，防止退化4:常规制做液体菌种5:适合中药材蛹虫草的菌种检验程序；三中药材蛹虫草质量保障体系和方法1:中药材蛹虫草质量标准2:中药材蛹虫草理化指标虫草素鉴别、含量测定方法(TLCHPLC法)(附件2)四中药材蛹虫草工厂化规模生产中的栽培方法1:中药材蛹虫草前培养方法、本发明中前培养，是培养原料在透明小容器中完成发菌(走菌)的全过程。1.1培养基采用合格的，缫丝后湿蚕蛹或再经冷冻的湿桑蚕蛹。1.2缫丝后湿桑蚕蛹装入透明的小容器中，装料量以占3/5(L/L)以下。透明小容器可以是玻璃瓶，也可以是塑料瓶或袋。1.3常规封口，灭菌，冷却。1.4以液体菌种或固体菌种，在100级净化条件下，用淋、撒的方法，接种在湿桑蚕蛹上。1.5本发明中使用的液体菌种培养周期不超过48小时。固体菌种接种比l:20至1:30(w/w)，液体菌种接种比l:10至1:30(ml/ml)。1.6前培养温度控制在l(TC到25r之间，20天至60天。2:中药材蛹虫草后培养方法。本发明中的后培养，是指将前培养产物再培养成中药材蛹虫草，具备合格的外观性状和蛹虫草鉴别鉴定其他特征。2.l前培养后，桑蚕蛹充满蛹虫草菌丝，并因菌丝的扩展结成团块。本发明首先将前培养后的桑蚕蛹分散到后培养箱中。2.2.分散要在比较洁净的环境中进行，靠手工完成。工作人员要做卫生防护并防止杂物混入。2.3本发明中的后培养箱采用特制的透光塑料箱，塑料箱用半透气塑料膜(如食品保鲜膜)五面或六面包衬。2.4后培养用的培养室要求有散射光，自然散射光或人工光源，照度200至2000勒克司(Lux)。2.5后培养室温度控制在15。C到3(TC之间，温差10°C.2.6后培养室环境湿度控制在85%以上。3:中药材蛹虫草前、后培养方法的过程控制3.l当有紧急情况发生，必须及时汇报，不得擅自采取处理措施。3.2若有任何系统上的改变或新器材的增设时，生产负责人应第一时间汇报情况。五中药材蛹虫草后处理方法1:中药材蛹虫草采收、干燥、包装方法。1.1中药材蛹虫草所谓采收，只是将成熟的蛹虫草移出培养箱，或除去培养箱侧面的塑料膜，移到通风室内或加强通风，以减少表面水份。1.2中药材蛹虫草干燥方法，根据需要可采用低温干燥，低温真空干燥或冷冻干燥法。1.3采用低温穿流式热风干燥，热风温度控制在55'C到65"C之间，6至8小时。1.4设计了一种低温穿流式热风干燥器，设计图见(附图2)。1.5中药材蛹虫草的干燥标准，含水量控制在7%以下。1.6干燥后的蛹虫草装入双层塑料袋、封口，要求塑料袋要安全无毒害，厚度不小于2.5丝，否则容易刺穿，失效。2:中药材蛹虫草储、运方法。2.1封装入塑料袋的蛹虫草要5'C避光冷藏。2.2储藏、运输时，外层用塑料箱或纸箱盛装，要防止塑料袋割伤，擦破。3:中药材蛹虫草采收、包装、储运的过程控制4.l当有紧急情况发生，必须及时汇报，不得擅自采取处理措施。4.2若有任何系统上的改变或新器材的增设时，生产负责人应第一时间汇报情况。本发明的优点还在于一踊虫草中药材的规范化种植标准操作规程(SOP)是发展地道蛹虫草中药材的前提，也是蛹虫草开发进程的必然。已有技术没有涉及到建立蛹虫草中药材的规范化种植标准操作规程(SOP)问题。本发明为蛹虫草中药材的规范化种植标准操作规程(SOP)提供了核心技术。二传统中药界认为，冬虫夏草的"虫(蛹)"为阴，"草"为阳，阴阳互补，合用为佳。运用以代用培养料为基质，或以液体发酵罐为手段，不能生产出符合中药冬虫夏草传统外观概念的蛹虫草，即有"虫(蛹)"有"草"的蛹虫草。而本发明方法培养出的蛹虫草可以得到中药界的认同，这是本发明的首要优点。三建立无公害、有机桑蚕蛹供应体系，规范用作中药材的蛹虫草培养材料来源将无公害、有机蚕桑基地当作中药材蛹虫草生产的"第一车间"，将专缫、精选、专储当作中药材蛹虫草生产的"第二车间"，这是规范化规模栽培中药材蛹虫草的基础。如此蚕茧原产地的环境情况明了，加工流程清淅，农残问题和重金属超标问题可防患未然，这对中药材蛹虫草的规模生产，保持中药材蛹虫草质量的稳定，树立蛹虫草地道中药材品牌十分有利。四原料选择中的技术优势1:运用柞蚕蛹为基质，或以其他昆虫幼虫或蛹培养出的蛹虫草，其药性与桑蚕蛹为基质的蛹虫草药性不同。原则上，"柞蚕蛹蛹虫草"或"XX虫蛹虫草"应该视为另一种中药材，且已经证明桑蚕蛹蛹虫草的药用价值优于柞蚕蛹蛹虫草。2:与其他用作原料的昆虫相比，桑蚕容易批量获得，因而容易控制来源，数量和质量。3:与用桑蚕老熟幼虫作原料相比，或与用活体(常规的或无菌的)桑蚕蛹作原料相比，用桑蚕蛹不会与蚕丝业争原料，或者说不会破坏蚕丝，从而降低成本，并且减少了养蚕周期对蛹虫草栽培的制约。4:市售烘干桑蚕蛹容易裏入杂物脏物，重金属含量常常偏高，增大了质量事故发生的可能。与烘干桑蚕蛹作原料相比，用缫丝后桑蚕蛹栽培蛹虫草减少了凿孔工序，也不需要补充营养液或水，降低了操作成本，同时也降低了质量事故发生的可能。5:用蚕蛹的提取物加其他成份组成人工培养基，得不到符合中药材观念的完整的蛹虫草。总之，本发明与上述技术方法相比的优势在于利用缫丝后(或经冷冻的)完整的桑蚕蛹满足了培养合格的中药材蛹虫草的原料需求。五中药材蛹虫草菌种保障体系和方法中的技术优势虫草类真菌是寄生与腐生兼性真菌。在自然感染昆虫的过程中，先进行寄生生活，而后(在昆虫死亡之后)进行腐生生活。蚕蛹活体表面接种或蚕蛹活体穿刺接种是利用它的寄生性，本发明利用虫草菌的腐生原理设计。1:与利用桑蚕蛹培养蛹虫草的现有相关接种技术有2:A:以固体菌种或液体菌种，在表面灭菌条件下注射接种在活体桑蚕(或蛹)上。此方法因为不能泄底灭菌，尤其不能排除活蚕事前已经发生感染，因此污染率较高，成功率较低。B:在表面灭菌条件下以活体桑蚕(或蛹)上投放到固体菌种或液体菌种中，令其自然侵染。因为不能沏底灭菌，尤其不能排除活蚕事前已经发生感染或己经被寄生，此方法污染率较高，成功率较低。此法还很难排除培养期间的交叉再感染。本发明是以液体菌种或固体菌种，在无菌条件下接种在完整的缫丝后鲜(冻)湿桑蚕蛹上。与现有技术方法相比的区别在于不是"将菌株接种于以蚕蛹的组成成分为主要成分的液体培养基上"，也不是接种于"用人工饲料无菌养蚕法得到的蚕蛹上"。在此基础上，本方法与以下发明专利不同"蛹虫草等虫草的人工培养方法(C097113190)"。六栽培方法中的技术优势1.本发明中前培养，是培养原料在透明小容器中完成发菌的全过程。采用透明小容器好处多多。本发明中前培养在透明小容器中完成灭菌后至发菌(走菌)结束。强调透明的小容器中装料量以占2/5容积以下。透明小容器可以是玻璃瓶，也可以是塑料瓶或袋。要求透明的目的是为了方便观察前培养生长情况，要求容器容积要小是为了方便于接种操作，同时方便于处理异常情况，减少交叉污染损失。2.将缫丝后湿蚕蛹装入透明的小容器中，装料量以占3/5(L/L)以下，优点是保留混匀空间，有助于菌液接触均衡，同步发菌。3.不超过48小时菌龄的液体菌种菌龄和适当的接种比，有助于形成生长优势，也有助于同步发菌。4.前培养温度控制在l(TC到25t:之间，20天至60天。低温发菌(走菌)污染少，品质好。5.后培养容器采用用半透气塑料膜包衬的特制的透光塑料箱。在充分利用后培养室空间的同时，保障了此间蛹虫草所需要的充分而适度的光照，也提供了充足的气体交换。6.后培养室温度控制在15"C到3(TC之间，日温差1(TC。较大的温差模拟了林间自然条件，有利于蛹虫草子实体的形成和虫草素的合成。7.利用本发明中所提供的中药材蛹虫草培养方法，其效果最终表现在，可以培养出外观性状符合中药学概念的，有虫有草的蛹虫草，其有效成份(虫草素)高于其他方法数倍至数十倍，符合蛹虫草鉴别鉴定所具备的各种特征。七质量管理中的技术优势1:蛹虫草中药材的规范化种植标准操作规程(SOP)是蛹虫草中成药开发的前提条件，也是蛹虫草开发进程的必然。本发明是建立蛹虫草中药材的规范化种植标准操作规程(SOP)的技术核心。现有技术没有涉及到这一层次。2:为了建立蛹虫草中药材的规范化种植标准操作规程(SOP)，提出，蛹虫草中药材的规范化种植需要建立"稳定的原料专供体系，包括有机蚕桑基地、专用蚕蛹收、储方法"。现有技术没有涉及到稳定的原料专供体系问题。3:为了建立蛹虫草中药材的规范化种植标准操作规程(SOP)，提出，建立"中药材蛹虫草质量保障体系，包括中药材蛹虫草质量标准Q/320691DJK01-2007、中药材蛹虫草质量检测方法"。首次确立了以菌核与子实体相结合的中药材蛹虫草形态标准；首次确立了以虫草素含量为主要指标的中药材蛹虫草理化指标。现有技术没有涉及到中药材蛹虫草质量标准及其检测方法。八中药材蛹虫草后处理的技术优势1:本发明展示的低温穿流式热风干燥器，热风温度控制在55"C到65"C之间，6至8小时。其优点是结构可简可繁、造价较低、工作效率高。2:中药材蛹虫草包装储运方法中，蛹虫草用塑料袋双层双封防潮、避光、5X:冷藏。实践证明，这种方法效果良好。保存两年以上的中药材蛹虫草，其理化指标和外观特征没有明显的变化。九成本管理中的技术优势1:实施本发明培养中药材蛹虫草中的，虫草素含量高达13.5mg/g，高出几十倍或几百倍。以虫草素含量进行价格比较冬虫夏草统货(虫草素含量lmg/g)目前市价10万元/kg，本发明生产的蛹虫草的市场价格应为135万元/kg;反之，若以本发明生产的蛹虫草的市场价格2000元/kg计，冬虫夏草统货目前市价应为150元/kg;而液体发酵罐为手段生产出的冬虫夏草菌粉原料药(虫草素含量0.lmg/g以下)目前市价应为15元/kg，而不应该是150元/kg-200元/kg。冬虫夏草菌粉商品(药品或保健食品)目前市价应该是100元/kg-300元/kg，而不应该是2000元/kg-5000元/kg，。本发明的实施，将使广大工薪层享用虫草成为可能，其社会效益由此可见一斑。2:本发明解决了用鲜活桑蚕蛹培养蛹虫草与桑蚕业争夺茧丝资源的问题。运用活体桑蚕蛹为基质，或者用桑蚕幼虫为基质生产蛹虫草，势必要破坏蚕茧，影响蚕丝的生产(剪开的蚕茧缫丝不值钱)，本发明节约了茧丝资源，降低蛹虫草原料成本。3:蛹虫草栽培物是有"虫(蛹)"有"草"，整株的蛹虫草，因此按单位加工容积折算，实施本发明生产的中药材蛹虫草产量比以代用培养料为基质提高二十倍以上，其直接生产成本因此下降数倍。本发明为蛹虫草中成药开发的成本管理，以及大众化，平民化的市场操作提供了有利条件，提高了中药材蛹虫草的成本优势和市场竞争能力。下面结合附图和实施例对此作进一步说明图1是本发明的流程图。图2是本发明专用干燥装置的结构示图。具体实施例方式一种规范化规模栽培用作中药材的蛹虫草的方法，包括下列步骤A:采用有机桑蚕蛹，包括自有机蚕桑基地取得蚕茧，然后自蚕蛹收、储和加工场地获得蚕蛹，作为中药材蛹虫草所用的培养基；B:采用适合中药材蛹虫草的菌种，是经过选育、冻干保藏、激活、通过菌种检验的菌种；C:采用规范化培养方法，包括前培养方法、后培养方法；D:采用规范化后处理方法，包括采收干燥方法，包装储运方法；E:采用中药材蛹虫草质量保障方法，包括中药材蛹虫草质量标准、中药材蛹虫草质量检测方法，即建立Q/320691DJK01-2007标准。步骤A中，对蚕茧进行剖茧、检测蚕蛹重金属，衡量蚕茧品质铅(以Pb计，干重，下同)不高于lmg/kg、砷(以As计)不高于O.5mg/kg，汞(以Hg计)不高于O.2mg/kg;中药材蛹虫草所用的培养基采用桑蚕茧缫丝后湿(或经冷冻)的完整蚕蛹；所述缫丝后湿蚕蛹按如下指定工艺加工一级分拣-二级分拣-三级分拣-清洗-漂烫-冷却-用于生产或速冻-包装暂存；经过缫丝等加工程序后，该蚕蛹重金属污染指标仍符合铅不高于lmg/kg、砷不高于0.5mg/kg，汞不高于O.2mg/kg的标准。步骤B中经过选育、冻干保藏、激活等程序所得菌种是否可用于中药材蛹虫草生产，取决于最终所得蛹虫草是否符合Q/320691DJK01-2007标准。步骤C中前培养是将湿蚕蛹或经冷冻的完整蚕蛹装入透明小容器，进行灭菌、接种，然后置于前培养室至前培养结束，透明的小容器中装料量以占3/5(L/L)以下，接种时用不超过48小时菌龄的液体菌种进行接种，在100级净化条件下将液体菌种淋洒在灭过菌的蚕蛹上。接种比10:1至10:3(蚕蛹液体菌种，V/V);前培养温度控制在10。C到25。C之间，20天至60天；步骤C中后培养容器采用透光塑料筐，且透明塑料筐用食品保鲜膜五面或六面包衬，后培养环境温度控制在15C到3(TC之间，日温差1(TC，还要控制环境湿度为85%、自然散射光或人工光源，照度200至2000勒克司；培养所得中药材蛹虫草，符合Q/320691DJK01-2007标准。步骤D的干燥采用低温穿流式热风干燥，热风温度控制在55。C到65r之间，干燥6至8小时。步骤D包装储运时用塑料袋双层双封防潮包装，避光、5'C以下冷藏。在经过步骤D处理之后、或再经两年以上保存之后，蛹虫草仍符合Q/320691DJK01-2007标准。本发明得到的蛹虫草外观性状为细长子座和菌核的复合体，菌核周围布满菌丝，大部份菌丝呈现桔红色，深浅不均；蛹虫草理化指标中，用HBLC进行虫草素鉴别阳性、含量在1.0mg/g至15.0mg/g之间。专用干燥装置包括风机10，风机上设置换热器9，换热器上设置多层料盘l、2、3、4、5、6、7、8，料盘上方设置排气罩0，换热器热水(汽)管16上接有一个热敏头13伸入料盘中的控温仪11。图中还有电源线12、物料隔筛14、把手15、回水(汽)管17。干燥时l:设备安装，烘干准备1.l接通控温仪(11)对热水泵(10)的输出线。1.2接通控温仪电源线。1.3接通风机电源线(12)。1.4接通控温仪热敏线(13)。1.5检査控温仪(11)工作是否正常。1.6将热水箱出水管接通散热器(9)的热水入口(16)。1.7将热水箱回水管接通散热器(9)的回水口(17)。1.8接通热水器电源，或蒸汽管。2:烘干2.l移开或吊起排风管罩(0)。2.2移下料盘(1)-(8)。2.3带好乳胶手套，将湿蛹虫草铺放到料盘(8)……(1)，单层铺放，略有空隙。2.4将料盘垒起，盖好排风管罩(0)。2.5打开将热水箱出水管和散热器热水入口间的控制阀门。2.6打开控温仪工作按钮。2.7将控温仪热敏头置于料盘(7)的料层中。2.8记录，计时。2.96小时左右，打开排风管罩(0)，检查料盘(8)内蛹虫草干燥情况。2.10含水量检査，低于8%后，收料盘(8)-(1)中的蛹虫草干品。用此方法，2000年6月在江苏，南通，2002年至2007年在江苏，无锡，班加工量8kg，蛹虫草硬、脆，有剌手感，外形外观良好，实测含水量7%以下。结合本发明，可以建立下列标准中药材蛹虫草标准1.中药材蛹虫草性状标准本品为细长子座和菌核的复合体。子座细长园柱形，自菌核生出，着生体位不确定，单生或群生，直立或弯曲，长0.5-15CM.直径0.1-0.5CM，表面橙黄色或橙红色，少分枝，有细纵皱纹，头部稍膨大成椭园形，顶端钝园，长0.5-5CM，直径0.2-0.7CM。质柔韧，断面粗糙，边缘橙黄色或橙红色；其内黄色至深褐色，气微腥，味微咸。菌核外形保持蛹形状，表面被菌丝或节间见菌丝，菌丝黄白至橙黄，断面粗糙，充满丝状菌丝，白色至黄白色；气微腥，味微咸。2.中药材蛹虫草理化指标表l理化指标<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>中药材蛹虫草理化指标虫草素鉴别、含量测定方法(TLCHPLC法)1原理和方法将虫草素对照晶与蛹虫草样品液分别点样于GF254薄层板，经丙酮一氯仿一正丁醇展开剂展开后，在紫外光反射仪下观察斑点，根据样品与对照品的斑点位置，进行样品中虫草素定性鉴别。2主要仪器及试剂(略)3对照品的制备精密称取虫草素对照4.5mg于10ml量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀。4样品的制备取适量蛹虫草，置干燥箱中60C干燥lh，精密称取0.40g，置索氏提取器中，加乙醚50ml，60'C索氏提取15h，取出内容物常温下2h挥干乙醚，置100ml圆底烧瓶中，加95%乙醇沸水回流三次(加乙醇量分别为30ml、20ml、20ml)每次回流lh抽滤，合并滤液，回收乙醇至约5ml，转移至25ml量瓶中，以蒸馏水多次洗涤使内容物完全转移至量瓶中，蒸馏水定容至刻度，摇匀后置冰箱冷藏12h，冷藏液离心20min(4500r/min)。取上清液4ml蒸去溶剂，用约2ml甲醇溶解。5样品薄层定性鉴别5.1展开剂丙酮一氯仿一正丁醇—25%氨水(30:30:40;10)。5.2标准晶点样5ul，样品点5ul，各点间距2cm，置展开槽中展开到8cm处(约35min)，取出置室温晾干，置紫外光反射仪下观察(入=254nm)，结果显示在与对照品相同Rf值处各样品均有相同斑点。6虫草素含量6.1原理和方法采用高效液相色谱法(中国药典2002年版一部附录VID)测定虫草素含量。用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂甲醇一水(12:88)为流动相检测波长为260nib。理论板数按虫草素峰计算应不低于3000。以外标两点法测定蛹虫草中虫草素的含量。6.2主要仪器及试剂(略)6.3标准品溶液的制备对照品溶液的制备精密称取虫草素对照品4.5mg，置10ml量瓶中，加流动相定容，摇匀，精密吸取O.l、1.5ml于10ml量瓶中，流动相定容至刻度，摇匀，即得(每ml含虫草素4.50ug和67.5ug)。6.4供试品溶液的制备取适量蛹虫草，置干燥箱中60'C干燥lh，精密称取0.40g，置索氏提取器中，加乙醚50ml，60'C索氏提取1.5h，取出内容物常温下lh挥去乙醚，置100ml圆底烧瓶中，加90%乙醇沸水回流三次(加乙醇量分别为30ml、20ml、20ml)每次回流lh抽滤，合并滤液，回收乙醇至约5mL，转移至25ml量瓶中，以蒸馏水多次洗涤使内容物完全转移至呈瓶中，蒸馏水定容至刻度，摇匀后置冰箱冷藏12h，冷藏液离心10min(4500r/min)。取上清液过0.45um微孔滤膜，即得。6.5领!J定分别精密吸取对照品溶液与供试品各10ml，注入液相色谱仪测定即得。6.6结果计算按标准曲线计算样品中虫草素含量公式X(%)=(C*25/W*105)*100%式中X-—样品中虫草素的百分含量，单位为毫克每百克(mg/100g);C一外标二点法计算的虫草素量，单位为微克每毫升(iig/ml):w—样品的取样量，单位为克(g)。计算结果保留4位有效数'权利要求1、一种规范化规模栽培用作中药材的蛹虫草的方法，其特征是包括下列步骤A采用有机桑蚕蛹，包括自有机蚕桑基地取得蚕茧，然后自专用的蚕蛹收、储和加工场地获得蚕蛹，作为中药材蛹虫草所用的培养基；B采用适合中药材蛹虫草的菌种，是经过选育、冻干保藏、激活、通过菌种检验的菌种；C采用规范化培养方法，包括前培养方法、后培养方法；D采用规范化后处理方法，包括采收干燥方法，包装储运方法；E采用中药材蛹虫草质量保障方法，包括中药材蛹虫草质量标准、中药材蛹虫草质量检测方法，即建立Q/320691DJK01-2007标准。2、根据权利要求l所述的规范化栽培用作中药材的蛹虫草的方法，其特征在于步骤A中，对蚕茧进行剖茧、检测蚕蛹重金属，衡量蚕茧品质.'铅(以Pb计，干重，下同)不高于lmg/kg、砷(以As计)不高于0.5mg/kg，汞(以Hg计)不高于0.2mg/kg。3、根据权利要求l所述的规范化栽培用作中药材的蛹虫草的方法，其特征在于中药材蛹虫草所用的培养基采用桑蚕茧缫丝后湿(或经冷冻)的完整蚕蛹；所述缫丝后湿蚕蛹按如下指定工艺加工一级分拣-二级分拣-三级分拣-清洗--漂烫-冷却-用于生产或速冻-包装暂存；经过缫丝等加工程序后，该蚕蛹重金属污染指标仍符合铅不高于lmg/kg、砷不高于O.5mg/kg，汞不高于O.2mg/kg的标准。4、根据权利要求l所述的规范化栽培用作中药材的蛹虫草的方法，其特征在于步骤B中经过选育、冻干保藏、激活等程序所得菌种是否可用于中药材蛹虫草生产，取决于最终所得蛹虫草是否符合Q/320691DJK0l-2007标准。5、根据权利要求l所述的规范化栽培用作中药材的蛹虫草的方法，其特征在于步骤C中前培养是将湿蚕蛹或经冷冻的完整蚕蛹装入透明小容器，进行灭菌、接种，然后置于前培养室至前培养结束，透明的小容器中装料量以占3/5(V/V)以下，接种时用不超过48小时菌龄的液体菌种进行接种，在100级净化条件下将液体菌种淋洒在灭过菌的蚕蛹上。接种比10:1至10:3(蚕蛹液体菌种，V/V);前培养温度控制在1(TC到25"之间，20天至60天；步骤C中后培养容器采用透光塑料筐，且透明塑料筐用食品保鲜膜五面或六面包衬，后培养环境温度控制在15。C到3(TC之间，日温差1(TC，还要控制环境湿度为85%、自然散射光或人工光源，照度200至2000勒克司；培养所得中药材蛹虫草，符合Q/320691DJK01-2007标准。6、根据权利要求l所述的规范化栽培用作中药材的蛹虫草的方法，其特征在于步骤D的干燥采用低温穿流式热风干燥，热风温度控制在55"C到65"C之间，干燥6至8小时。7、根据权利要求6所述的规范化栽培用作中药材的蛹虫草的方法，其特征在于所述低温穿流式热风干燥采用简易低温穿流式热风干燥器，包括风机，风机上设置换热器，换热器上设置多层料盘，料盘上方设置排气罩，换热器热水管泵上接有一个热敏头伸入料盘中的控温仪。8、根据权利要求l所述的规范化栽培用作中药材的蛹虫草的方法，其特征在于步骤D包装储运时用塑料袋双层双封防潮包装，避光、5°C以下冷藏。9、根据权利要求l所述的规范化栽培用作中药材的蛹虫草的方法，其特征在于在经过步骤D处理之后、或再经两年以上保存之后，蛹虫草仍符合Q/320691DJK01-2007标准。10、根据权利要求1所述的规范化栽培用作中药材的蛹虫草的方法，其特征在于以虫草素含量作为检测中药材蛹虫草的指标之一，虫草素含量不低于1mg/g。全文摘要本发明公开了一种规范化规模栽培用作中药材的蛹虫草的方法，包括采用有机桑蚕蛹，包括自有机蚕桑基地取得蚕茧，然后自专用蚕蛹收、储和加工场地获得蚕蛹，作为中药材蛹虫草所用的培养基；采用经过选育、冻干保藏、激活、通过菌种检验的菌种；采用规范化培养方法，包括前培养方法、后培养方法；采用规范化后处理方法，包括采收干燥方法，包装储运方法；采用中药材蛹虫草质量保障方法，包括中药材蛹虫草质量标准、中药材蛹虫草质量检测方法，即建立Q/320691DJK01-2007标准。本发明可以规范化生产用作中药材的蛹虫草。文档编号C12R1/645GK101338278SQ20081002170公开日2009年1月7日申请日期2008年8月7日优先权日2008年8月7日发明者王洪霞,王立臣申请人:王立臣;王洪霞