专利名称：从蛹虫草中连续提取虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多糖的工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种超临界C(V流体连续萃取蛹虫草中虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多
糖的工艺。
背景技术：
冬虫夏草是一类药用价值极高的珍稀名贵药材，含有众多活性成分，如虫草酸、虫草多 糖、多种核苷类(虫草素、脲苷、腺苷)、挥发油、黄酮、甾醇类化合物、超氧化物歧化酶等。 其中虫草多糖、虫草素、虫草酸的含量是评价虫草质量主要指标。其中的虫草素是一种核苷
类抗生素，具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌和消炎、提高免疫力、抗白血病等多种生物活性。虫 草多糖能调节人体免疫功能，增强抗病能力，具有抗癌活性，对各种疾病引起的白细胞降低 有很好的辅助治疗作用，还具有降血糖的功能，同时冬虫夏草多糖能增强单核巨噬细胞功能，
提高血清IgG水平，促进淋巴母细胞转化。虫草酸能抑制各种病菌的成长，可预防与治疗脑 血栓、脑出血、心肌梗塞等疾病。但是从冬虫夏草中提取以上组份价格极贵。蛹虫草是冬虫 夏草的重要人工替代品之一，其功能成分、药理药效作用与天然冬虫夏草基本一致， 200710122409.0公开了一种从蛹虫草中提取精制虫草素和虫草多糖的方法，是将蛹虫草粉 末以冷渗法提取过滤，滤渣与乙醇混合，超声波辅助提取、离心，上清液浓縮、醇析。醇析 上清液减压浓缩、洗脱，洗脱液浓縮结晶，用正丁醇重结晶，得到虫草素；醇析沉淀进行酶 解脱蛋白处理、离心，上清液浓缩、洗脱，流出液浓缩、醇析，冷冻干燥后得到精制多糖。 这种方法提取虫草素和虫草多糖，提取率低，工艺复杂，只能提取出虫草素和虫草多糖；而 不能连续提取出虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多糖，且其有机溶剂的使用量较高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可减少有机溶剂的用量，减少分离步骤，提高提取率、降低
3成本、能从蛹虫草中连续提取虫草精油、虫草素、虫草酸与虫草多糖的综合工艺。 本发明包括以下步骤 (1)将过40 60目筛的蛹虫草菌丝体粉加入到超临界C02流体萃取仪中；在压力 15-25Mpa，温度35-4CTC， 032流量为50-150L/min的条件下，萃取1-3h，在分离釜中分离出 蛹虫草挥发油；
(2) 用蛹虫草菌丝体粉质量1-3倍的酯类或酮类有机夹带剂，在压力为22-30 Mpa，温 度为35-4(TC、 (％流量为50-150L/min的条件下，继续萃取l_3h,从分离釜中分离出含虫草 素的有机夹带剂，在55-65'C将该溶液进行减压蒸馏回收有机夹带剂，烧瓶中剩余物为虫草 素产品，冷冻干燥得虫草素；
(3) 在原超临界C(V流体萃取仪中，用蛹虫草菌丝体粉质量1-3倍的蒸馏水作为夹带剂， 在压力为25-3(Mpa，温度为40-5(TC的条件下，萃取1-3h,采用一级分离方式分离出含虫草 酸和虫草多糖的水溶液，往该溶液中加入北虫草多糖溶液4倍体积的95%的乙醇，产生絮状 沉淀，低温放置3-5h，沉淀完全后，在转速为3000-4000转/min条件下离心10-20min，得 虫草多糖沉淀，经冷冻干燥，得虫草多糖产品；将离心上清液6(TC旋转减压浓缩回收乙醇， 浓缩液为虫草酸浸膏，经冷冻干燥，得含虫草酸的产品。
所述酯类夹带剂是乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯。 所述酮类夹带剂是丙酮、甲乙酮。
本发明能在保护活性成分生物活性的前提下，快速、高效地将蛹虫草中的虫草素、虫草 酸、虫草多糖提取出来，简化了分离纯化的步骤，降低了有机溶剂的使用，提高了生产效率， 降低了生产成本。所得到的蛹虫草挥发油的提取得率为6. 5%左右，虫草素的提取率为0. (M9% 左右，虫草素的纯度为45%左右，虫草酸的提取率为2%左右，虫草酸的纯度为25%左右，虫 草多糖的提取率为6. 8%左右，虫草多糖纯度为45%左右。
具体实施例方式
实施例1: 、(1)取液体发酵的蛹虫草菌丝体，在真空箱中60'C干燥12h，于植物粉碎机中粉碎， 过40目筛，得蛹虫草菌丝体粉，准确称取lkg蛹虫草菌丝体粉，加入到萃取釜容积为3升的 超临界C02流体萃取仪的萃取釜中，设置萃取压力20Mpa左右，萃取温度37°C， 0)2流量为 80L/h，萃取时间2h。从分离釜中得亮黄色透明的蛹虫草挥发油。
(2) 保持萃取釜中的蛹虫草菌粉不变，改变萃取条件为萃取压力25 Mpa左右，萃取 温度4(TC,夹带剂为2升乙酸乙酯，C02流量为50L/h,萃取时间2h。从分离釜中得含虫草素 的乙酸乙酯溶液。在6(TC下将该溶液进行减压蒸馏回收乙酸乙酯，烧瓶中剩余物为虫草素产 品，冷冻干燥，产品质量约为lg，虫草素含量为42%左右。
(3) 保持萃取釜中的蛹虫草菌粉不变，改变萃取压力为25Mpa，萃取温度为45。C,改用 2升蒸馏水作为夹带剂，萃取2h,采用一级分离方式分离，得到含虫草酸和虫草多糖水溶液， 往该溶液中加入4倍虫草多糖水溶液体积的95%的乙醇，产生絮状沉淀，低温放置5h，沉淀 完全后，4000转/min转速离心10min，得沉淀，沉淀冷冻干燥，得虫草多糖产品，产品质量 约为150g,虫草多糖纯度约为45%。将离心上清液6(TC旋转减压浓縮回收乙醇，浓缩液为浸 膏，冷冻干燥，得产品约为80g，该产品含虫草酸，虫草酸含量约为25%。
实施例2:
(1) 取人工固体栽培的蛹虫草子实体，在真空箱中6(TC干燥12h,于植物粉碎机中粉碎， 过40目筛，得蛹虫草子实体菌粉，准确称取lkg蛹虫草子实体菌粉，加入到3L的超临界C(X 流体萃取仪的萃取釜中，设置萃取压力20Mpa左右，萃取温度4(TC, 0)2流量为120L/h,萃 取时间2h。从分离釜中得亮黄色透明的蛹虫草挥发油。
(2) 保持萃取釜中的蛹虫草菌粉不变，改变萃取条件为萃取压力25Mpa左右，萃取温 度40。C，夹带剂为2升乙酸乙酯，C02流量为50L/h,萃取时间2h。从分离釜中得含虫草酸 的乙酸乙酯溶液。在60。C下将该溶液进行减压蒸馏回收乙酸乙酯，烧瓶中剩余物为虫草酸产 品，冷冻干燥，产品质量约为l.lg，虫草素纯度约为45%。
(3) 保持萃取釜中的蛹虫草子实体菌粉不变，改变萃取乐力为30Mpa，萃取温度为45
5'C，改用2升蒸馏水作为夹带剂，萃取2h，采用一级分离方式分离，得到含虫草酸和虫草多 糖水溶液，往该溶液中加入虫草多糖水溶液4倍体积的95%的乙醇，产生絮状沉淀，低温放 置4h，沉淀完全后，4000转/min转速离心10min，得沉淀，沉淀冷冻干燥，得虫草多糖产品， 产品质量约为140g，虫草多糖纯度约为50%。将离心上清液60'C旋转减压浓縮回收乙醇，浓 縮液为浸膏，冷冻干燥，得产品约为70g，该产品含虫草酸，虫草酸含量约为30%。
权利要求
1.一种从蛹虫草中连续提取虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多糖的工艺，其特征在于，包括以下步骤(1)将过40～60目筛的蛹虫草菌丝体粉加入到超临界CO2流体萃取仪中；在压力15-25Mpa，温度35-40℃，CO2流量为50-150L/min的条件下，萃取1-3h，在分离釜中分离出蛹虫草挥发油；(2)用蛹虫草菌丝体粉质量1-3倍的酯类或酮类有机夹带剂，在压力为22-30Mpa，温度为35-40℃、CO2流量为50-150L/min的条件下，继续萃取1-3h，从分离釜中分离出含虫草素的有机夹带剂，在55-65℃将该溶液进行减压蒸馏回收有机夹带剂，烧瓶中剩余物为虫草素产品，冷冻干燥得虫草素；(3)在原超临界CO2流体萃取仪中，用蛹虫草菌丝体粉质量1-3倍的蒸馏水作为夹带剂，在压力为25-30Mpa，温度为40-50℃的条件下，萃取1-3h，采用一级分离方式分离出含虫草酸和虫草多糖的水溶液，往该溶液中加入北虫草多糖溶液4倍体积的95％的乙醇，产生絮状沉淀，低温放置3-5h，沉淀完全后，在转速为3000-4000转/min条件下离心10-20min，得虫草多糖沉淀，经冷冻干燥，得虫草多糖产品；将离心上清液60℃旋转减压浓缩回收乙醇，浓缩液为虫草酸浸膏，经冷冻干燥，得含虫草酸的产品。
2. 根据权利要求l所述的从蛹虫草中连续提取虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多糖 的工艺，其特征在于，所述酯类夹带剂是乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯。
3. 根据权利要求l所述的从蛹虫草中连续提取虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多糖 的工艺，其特征在于，所述酮类夹带剂是丙酮、甲乙酮。
全文摘要
本发明公开了一种从蛹虫草中连续提取虫草挥发油、虫草素、虫草酸与虫草多糖的工艺。是将过40～60目筛的蛹虫草菌丝体粉加入到超临界CO<sub>2</sub>流体萃取仪中；在压力15-25MPa，温度35-40℃，CO<sub>2</sub>流量为50-150L/min的条件下，萃取1-3h，在分离釜中分离出蛹虫草挥发油；再用蛹虫草菌丝体粉质量1-3倍的酯类或酮类有机夹带剂继续萃取1-3h萃取分离出虫草素；再用蛹虫草菌丝体粉质量1-3倍的蒸馏水作为夹带剂，萃取1-3h，采用一级分离方式分离出含虫草酸和虫草多糖的水溶液。本发明降低了有机溶剂的使用，提高了生产效率，降低了生产成本。所得到的蛹虫草挥发油的提取得率为6.5％左右，虫草素的提取率为0.049％左右，虫草素的纯度为45％左右，虫草酸的提取率为2％左右。
文档编号A61P29/00GK101580755SQ20091004366
公开日2009年11月18日 申请日期2009年6月11日 优先权日2009年6月11日
发明者刘东波, 夏志兰, 熊兴耀, 谢红旗 申请人:湖南农业大学