一种以黄粉虫虫蛹为载体培养虫草产品的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种W黄粉虫虫蛹为载体培养虫草产品的方法。
【背景技术】
[0002] 冬虫夏草[Cordyceps sinensis(Berk. )Sacc]是我国一种名贵的中草药，因其具 有抗肿瘤、提高免疫力、降血脂、调节内分泌等多种功效，已被现代人们广泛认可和追捧。但 由于冬虫夏草的生长条件特殊，只能生长在西藏、青海、四川等高海拔地区，且生长周期较 长，产量逐年下降，因此野生冬虫夏草十分稀有珍贵，目前市场价格已达到4万元/千克左 -?" O
[0003] 蛹虫草[Cordyceps militarisix. )Link.]又称北冬虫夏草，子囊菌纲肉座菌目麦 角菌科虫草属，为蛹虫草真菌寄生在鱗翅目昆虫蛹体上形成的子座与蛹体的结合，是虫草 属的模式种。因其主要活性成分与冬虫夏草相近或高于冬虫夏草，并且已有较成熟的培养 条件，现已成为冬虫夏草的有效替代品。
[0004] 黄粉虫[Tenebrio molitoHL.)]俗称面包虫，銷翅目拟步行虫科，富含丰富的蛋 白质、脂肪、微量元素和维生素等营养物质，具有抗疲劳、调节血脂、抗组织缺氧等功效。并 且黄粉虫能够进行大规模人工饲养，为相关研究提供稳定的原料来源。
[000引近年来，将虫草菌接种于黄粉虫W培养出冬虫夏草替代品成为研究的热点。北华 大学潘丽梅等人将黄粉虫幼虫通过注射接种虫草菌，60天左右培育出黄粉虫虫草，感染率 为30%。安徽农业大学李春如教授等人将黄粉虫幼虫穿刺接种台湾虫草菌，获得了30%的 感染率。W上两种方法均为黄粉虫幼虫活体接种，感染率均不高，无法到达规模化生产的要 求。
[0006] CN1793317A中公开了一种W黄粉虫虫蛹为寄主的蛹虫草实体及其培育方法。所述 方法步骤为菌种制备、对黄粉虫虫蛹接种感染和出草。CN103688760A中公开了一种将筛选 后的野生冬虫夏草菌株制成菌悬液并接种到黄粉虫上培育虫草子实体的方法。上述两项发 明均W黄粉虫为寄主，培养最终得到蛹虫草子实体，与大米培养基培养子实体或蚕蛹为寄 主培养子实体并无太大差别，且都为黄粉虫虫蛹或黄粉虫幼虫活体接种，操作繁琐，接种难 度大;培养周期均在50~60天，培养周期较长，无法达到规模化生产的要求。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种W黄粉虫虫蛹为载体培养虫草产品的方法，W及由该方 法得到的虫草活性成分含量较高的虫草产品。
[0008] 本发明所述的一种W黄粉虫虫蛹为载体培养虫草产品的方法，其特征在于包括W 下步骤：
[0009] (1)蛹虫草母种菌株的筛选
[0010] 将蛹虫草[〔0'(17(3邱3 1]1；[1；[1日1'13化.化；[证.]菌株接种于固体培养基上，待菌丝体 长满平板，反复筛选直至获得长势较快、性状稳定的蛹虫草母种菌株。
[0011] (2)菌悬液的制备
[0012] 将筛选得到的蛹虫草母种菌株接种于灭菌处理后的液体培养基中，常溫培养7天 后，在超净工作台内用双层无菌纱布过滤，即得到菌悬液。
[0013] (3)黄粉虫虫蛹的准备
[0014] 将成熟的黄粉虫虫蛹置于玻璃瓶中，68~10化化，115~122°C条件下灭菌15~ 25min，放凉待用。
[001引 （4)接种
[0016] 在超净工作台内，将灭菌后的成熟黄粉虫虫蛹均匀放置在无菌的培养皿中，均匀 喷洒菌悬液至虫体表面，培养皿用无菌封口膜封口。
[0017] (5)虫草产品的培养
[0018] 将培养皿置于20~22°C黑暗条件下培养7~8天后可得到被蛹虫草菌侵染的黄粉 虫虫蛹，然后将其置于20~22°C，自然光照条件下培养，3~4天后虫体转为澄色，即得到本 发明所述虫草产品一一虫草虫。
[0019] 所述虫草虫，即本发明所述的W黄粉虫虫蛹为载体培养得到的虫草产品，该虫草 产品与现有技术中在黄粉虫活体上接种冬虫夏草菌得到的虫草子实体不同，本方法得到被 蛹虫草菌感染的颜色鲜亮、营养价值丰富的虫体，可作为蛹虫草、冬虫夏草的替代品。
[0020] 进一步地，本发明所述步骤（1)中采用的蛹虫草菌株选取产于吉林长白山国家自 然保护区的野生新鲜蛹虫草[Cordyceps militarisiX. )Link.]菌株。
[0021] 进一步地，本发明所述步骤(2)中，得到的菌悬液其抱子浓度为IO6~IO7个/mL(用 血球计数板计数）。
[0022] 进一步地，本发明所述步骤（3)中，在100~10化化，120~122°C条件下灭菌15~ 20min〇
[0023] 进一步地，本发明所述步骤(5)中，培养的溫度为22°C。
[0024] 更进一步地，本发明所述步骤(3)中，在look化，121°C条件下灭菌15min。
[0025] 本发明还提供了一种W黄粉虫虫蛹为载体培养得到的虫草产品，其特征在于采用 本发明上述培养方法培养得到。
[0026] 本发明所述虫草产品，其特征还在于其有效成分虫草酸含量达11% W上，虫草多 糖含量达15% W上，虫草素含量达13% W上，蛋白质含量达30% W上。
[0027] 现有技术中采用的黄粉虫活体接种冬虫夏草菌存在诸多问题，例如因黄粉虫为活 体，会将一部分注射(或穿刺）的菌悬液排出体外，活的黄粉虫体对蛹虫草菌也有一定的抗 性，在注射(或穿刺)量不够或未成功注射(或穿刺)进虫体内时无法成功感染黄粉虫。另外， 活体接种难度较大，操作繁琐且耗时，注射过程中若操作不当将导致黄粉虫死亡，并且由于 运些方法只对虫体进行表面灭菌，所W-旦在接种过程中导致黄粉虫死亡，虫体就会腐烂 发臭，不能继续使用，因此不能达到较高的感染率。本发明所述方法是将黄粉虫虫蛹68~ 10化化，115~122°C灭菌15~25min，运样处理后有W下优点：1.在处死黄粉虫虫蛹的同时 有效灭菌;2.最大程度的保持了黄粉虫的可利用养分;3.在灭菌后僵死的蛹体上喷施蛹虫 草菌悬液，避免了现有技术中活体接种存在的问题，依本发明所述方法，并经多次反复验 证，黄粉虫接种蛹虫草菌成功率均可达到100%，接种后10~12天即可达到收获条件，大大 缩短了培养时间，且操作简单易行，提高了生产效率，能够达到工厂规模化生产的需求。
[0028]本发明所述方法得到的澄黄色虫草虫中有效成分虫草多糖、虫草素、蛋白质、虫草 酸含量丰富，可W作为虫草子实体的替代品或作为大量提取虫草活性成分的原料。
【附图说明】
[0029 ]图1为虫草酸测定标准曲线。
[0030] 图2为虫草素测定标准曲线。
[0031] 图3为虫草多糖测定标准曲线。
[0032] 图4为虫草蛋白质测定标准曲线。
【具体实施方式】
[0033] 下面结合具体实施例对本发明作进一步说明：
[0034] 本发明中的黄粉虫虫蛹为本实验室培养。
[003引实施例1
[0036] 1、菌种筛选
[0037] 选取高产、优质、早熟、产于吉林长白山国家自然保护区的野生新鲜蛹虫草 [Cordyceps miIitaris化.）Link.]菌株，去除表面杂物后置于超净工作台内，分别用75% 乙醇表面消毒1分钟、0.1 %升隶表面消毒30秒，无菌去离子水清洗5~6次，用无菌组织刀切 成Imm2组织块放在斜面培养基上培养。待菌丝布满斜面后再纯化，经反复纯化后获得蛹虫 草母种数株。
[0038] 将母种扩大培养后，无菌接种于W大米为主要营养物质的有机培养基上，于20°C ~22°C下培养30天左右，观察生长情况，若有杂菌污染，则需对母种进一步纯化;若无杂菌 污染，则继续培养30~40天后即长出澄色子实体，证明母种可靠。经培养，得到澄色蛹虫草 子实体，证明已筛选得到优质的蛹虫草菌株用于本发明的开展。
[0039] 2、菌悬液的制备
[0040] 将液体培养基分装于250mlS角瓶中，121°C灭菌20分钟，放入超净工作台冷却至 室溫备用。在无菌条件下，将母种用接种环接种到S角瓶中，置于摇床中，120r/min，22°C培 养7天，待形成均匀菌球后用双层无菌纱布过滤，即得到菌悬液，用血球计数板计数菌悬液 抱子浓度为IO 6个/mL。
[0041] 3、黄粉虫虫蛹的准备
[0042] 将成熟的黄粉虫虫蛹置于玻璃瓶中，1004口曰，121^：灭菌15111111，置于超净工作台内 放凉待用。
[0043] 4、接种
[0044] 在超净工作台内，将灭菌后的成熟黄粉虫虫蛹均匀放置在无菌的培养皿中，均匀 喷洒菌悬液至虫体表面，培养皿用无菌封口膜封口。
[004引 5、虫草虫的培养
[0046] 将培养皿置于培养箱内，22°C黑暗条件下培养7天，得到被蛹虫草菌侵染的黄粉虫 虫蛹，接种成功率达100%，然后将其置于22°C自然光照条件下培养3天，使虫体转色为澄 色，即为W黄粉