砖红绒盖牛肝菌试管子实体原基的诱导方法
【专利摘要】本发明涉及一种砖红绒盖牛肝菌试管子实体原基的诱导方法，属于野生食用菌培养【技术领域】。砖红绒盖牛肝菌，属于一种名贵野生食用菌，是云南省夏季市场上的主要美味菌类之一，由于其为松树外生菌根菌，目前不能人工培养，全靠野外自然采摘，因此价格昂贵。要保证牛肝菌能周年供应，满足大众餐桌所需，降低价格，只有实现人工培养。而牛肝菌的人工栽培，仍存在许多盲点问题：如菌丝在培养基上生长很缓慢；与共生树种的共生机理尚不完全清楚等。本发明的技术任务是，以野外采摘的子实体小组织块为材料，在试管培养基上直接诱导分化能发育成熟的子实体原基，具有直接、简易、生产成本低等特点，这为今后该菌的大规模室内人工培养奠定了重要基础。
【专利说明】砖红绒盖牛肝菌试管子实体原基的诱导方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种砖红绒盖牛肝菌试管子实体原基的诱导方法，属于生物【技术领域】，具体地说是属于野生食用菌室内培养范畴。
【背景技术】
[0002]牛肝菌隶属于担子菌门(Basidiomycota),伞菌纲(Agaricomycetes),牛肝菌目(Boletales),牛肝菌科(Boletaceae),为世界广布大属，是一类与植物共生的菌根真菌。该属真菌味道鲜美，且含有抗氧化、抗肿瘤等生理活性物质，因而具有很高的经济价值和研究前景。目前，除少数腐生种如暗褐网柄牛肝菌外，其绝大部分种仍难以进行人工栽培，市售子实体完全依赖野外采收。云南的自然资源丰富，野生牛肝菌品种多，但因近年气候变化、生态破坏等原因其自然产量已经严重下降，导致售价昂贵。
[0003]砖红绒盖牛肝菌CferocofiMAs spadiceus (Fr.)仍⑷.),在云南俗称红见手，为松树外生菌根菌，目前不能人工培养。其夏季于林中地上单生或群生，子实体中等至大型，菌盖直径5~17cm，半球形至扁平，土红色或砖红色，菌肉黄白色，受机械损伤后变成蓝色，菌柄长6~13cm，粗3~6cm，深玫瑰红色或暗紫红色，顶端有网纹，下部被绒毛，内实。砖红绒盖牛肝菌属于一种名贵野生食用菌，其在云南分布广，是云南省夏季市场上丰富多彩的主要美味菌类之一，由于全靠人工野外米摘，且个体生长受气候、生态环境影响大(如遇长期干旱，几乎不会生长)，6月份刚上市时，其每千克鲜重售价在200~300元，在7~8月份产品较多时，价格也维持在90~150元，且食用期只有每年的6~9月，其它月份无自然产品。牛肝菌的干品味 道较差，营养大大损失，人们很少食用。
[0004]因此，要保证牛肝菌能周年供应，满足大众餐桌所需，降低价格，只有实现人工培养。而牛肝菌的人工栽培，也像其它珍稀食用菌一样，存在许多盲点，一方面，菌丝在培养基上生长很缓慢，另一方面，菌丝的生长发育与共生树种的共生机理尚不完全清楚，因此至今仍没有人工培养的品种。
[0005]本发明在菌丝诱导过程中，偶然发现，砖红绒盖牛肝菌能在试管中直接诱导子实体原基，改进培养条件，原基能进一步发育为完全的子实体。这为今后砖红绒盖牛肝菌大规模的室内人工培养奠定了重要基础。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于，提供一种直接、简易、生产成本低，能在试管中直接诱导长出子实体原基的方法。
[0007]本发明的技术任务是，以野外采摘的子实体小组织块为材料，在试管培养基上直接诱导分化子实体原基；
所述子实体小组织块的准备及切取方法为:野外采摘生长健壮、无虫害、未完全开伞、菌柄较粗壮、菌盖较肥厚的成熟子实体；将子实体带回实验室，于超净台上用酒精棉球，轻擦菌盖表面及菌柄部位，用解剖刀片轻轻去除菌盖中部表皮，从菌盖中部取十字，将子实体一分为四，取菌柄与菌盖交接处的内部无菌组织块，切成0.25~0.49cm2的小块；
所述试管培养基成分为:马铃薯80.00~100g/L、酶解松针粉35~40 g/L、发酵玉米复合粉 15 ~20 g/L,CaCl2 1.0Og /UKH2PO40.60g/L、16.0 波美的麦芽汁 80 ~90ml/L、琼脂 12.00 g/L,控制 PH 值为 5.40 ~5.60 ;
所述培养基中酶解松针粉的制备方法如下:在牛肝菌生长地收集松针，烘干，粉碎；按1:4~1:6的重量体积比加入水，混成糊状，用超声波处理65~75min，再加入8~10倍水，调节PH值为4.0~4.6，于50~53°C水浴中，按6.0~7.0%的重量体积比加入纤维素酶，酶解120~140 min后，将水浴温度升至92~95°C，至水分基本蒸干时移入73~75°C烘箱中，干燥30~32hr ;所述发酵玉米复合粉的制备方法如下:将玉米面、小麦面、黄豆粉按2:1:1比例混合，按1:1~1:1.5的混合物重量体积比加入水，拌匀，在蒸锅中蒸20~30分钟，取出，待温度冷至30~35°C时，按说明书掺入适量的酒曲粉，拌匀后放入干净的瓷罐或泡菜罐中，密封好，放在28~30°C的培养箱中，发酵4~6天，将发酵物在55~60°C烘箱中烘干，粉碎，过80目分样筛； 所述子实体原基的诱导方法为:将切取的小组织块，轻轻嵌入试管斜面诱导培养基表面，在温度为22~23°C下暗培养8~10天，待菌块周围有极少白色菌丝萌发，培养基渐变成浅褐色时，每天将试管放置于400~600Lx的弱光下10hr，5~7天后，每天将试管放置于1600~2000Lx的较强光照下10hr，10~15天，即从原组织块上长出I~2个菌柄高
0.8~1.2cm,直径0.30~0.5cm的小子实体原基。
[0008]本发明的有益效果是:在试管培养条件下，利用子实体小组织块，直接诱导分化子实体原基，其特点如下:
(1)简单直接:不经过菌丝体阶段，直接从原子实体小组织块，脱分化出子实体原基，原基继而可以长成幼小的全子实体；
(2)易实现:本发明的特点在于，小组织块一萌发出菌丝，即开始放入人工气候箱控光，操作容易；
(3 )生产成本低:本发明的试管培养基成分取自天然的松针及食用玉米等，不会增加培养成本；人工气候箱是实验室常规设备，不需额外增设大型设备支出。
【具体实施方式】
[0009]以下的实施例子是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
[0010]实例一:
野外采摘生长健壮、无虫害、未完全开伞、菌柄较粗壮、菌盖较肥厚的成熟子实体；将子实体带回实验室，于超净台上用酒精棉球，轻擦菌盖表面及菌柄部位，用解剖刀片轻轻去除菌盖中部表皮，从菌盖中部取十字，将子实体一分为四，取菌柄与菌盖交接处的内部无菌组织块，切成0.25cm2的小块；
将切取的小组织块，轻轻嵌入18X180mm的试管斜面诱导培养基表面，所述的培养基成分为:马铃薯80.00g/L、酶解松针粉35 g/L、发酵玉米复合粉15 g/L、CaCl2 l.0Og /L、KH2PO40.60g/L、16.0波美的麦芽汁80ml/L、琼脂12.00 g/L，控制PH值为5.40 ;所述酶解松针粉的制备方法如下:在牛肝菌生长地收集松针，烘干，粉碎；按1:4的重量体积比加入水，混成糊状，用超声波处理65min，再加入8倍水，调节PH值为4.0，于50°C水浴中，按6.0%的重量体积比加入纤维素酶，酶解120min后，将水浴温度升至92°C，至水分基本蒸干时移入73°C烘箱中，干燥30hr ;所述发酵玉米复合粉的制备方法如下:将玉米面、小麦面、黄豆粉按2:1:1比例混合，按1:1的混合物重量体积比加入水，拌匀，在蒸锅中蒸20分钟，取出，待温度冷至30°C时，按说明书掺入适量的酒曲粉，拌匀后放入干净的瓷罐或泡菜罐中，密封好，放在28°C的培养箱中，发酵4天，将发酵物在55°C烘箱中烘干，粉碎，过80目分样筛；将接种小组织块的试管放置在温度为22~23°C下暗培养8天，待菌块周围有极少白色菌丝萌发，培养基渐变成浅褐色时，每天将试管放置于400Lx的弱光下10hr，5天后，每天将试管放置于1600LX的较强光照下10hr，10天，即从原组织块上长出I个菌柄高0.8cm,直径
0.30cm的小子实体原基。
[0011]实例二:
野外采摘生长健壮、无虫害、未完全开伞、菌柄较粗壮、菌盖较肥厚的成熟子实体；将子实体带回实验室，于超净台上用酒精棉球，轻擦菌盖表面及菌柄部位，用解剖刀片轻轻去除菌盖中部表皮，从菌盖中部取十字，将子实体一分为四，取菌柄与菌盖交接处的内部无菌组织块，切成0.35cm2的小块；
将切取的小组织块，轻轻嵌入18X180mm的试管斜面诱导培养基表面，所述的培养基成分为:马铃薯90.00g/L、酶解松针粉38 g/L、发酵玉米复合粉17g/L、CaCl2 l.0Og /L、KH2PO40.60g/L、16.0波美的麦芽汁85ml/L、琼脂12.00 g/L，控制PH值为5.60 ;所述酶解松针粉的制备方法如下:在牛肝菌生长地收集松针，烘干，粉碎；按1:5的重量体积比加入水，混成糊状，用超声波处理70min，再加入9倍水，调节PH值为4.2，于52°C水浴中，按6.5%的重量体积比加入纤维素酶，酶解130 min后，将水浴温度升至93°C，至水分基本蒸干时移入74°C烘箱中，干燥31hr ; 所述发酵玉米复合粉的制备方法如下:将玉米面、小麦面、黄豆粉按2:1:1比例混合，按1:1.5的混合物重量体积比加入水，拌匀，在蒸锅中蒸25分钟，取出，待温度冷至32°C时，按说明书掺入适量的酒曲粉，拌匀后放入干净的瓷罐或泡菜罐中，密封好，放在29°C的培养箱中，发酵5天，将发酵物在58°C烘箱中烘干，粉碎，过80目分样筛；将接种小组织块的试管放置在温度为22~23°C下暗培养9天，待菌块周围有极少白色菌丝萌发，培养基渐变成浅褐色时，每天将试管放置于500Lx的弱光下10hr，6天后，每天将试管放置于1800LX的较强光照下10hr，13天，即从原组织块上长出2个菌柄高1.0cm,直径
0.40cm的小子实体原基。
[0012]实例三:
野外采摘生长健壮、无虫害、未完全开伞、菌柄较粗壮、菌盖较肥厚的成熟子实体；将子实体带回实验室，于超净台上用酒精棉球，轻擦菌盖表面及菌柄部位，用解剖刀片轻轻去除菌盖中部表皮，从菌盖中部取十字，将子实体一分为四，取菌柄与菌盖交接处的内部无菌组织块，切成0.49cm2的小块；
将切取的小组织块，轻轻嵌入18X180mm的试管斜面诱导培养基表面，所述的培养基成分为:马铃薯100g/L、酶解松针粉40 g/L、发酵玉米复合粉20 g/L、CaCl2 l.0Og /L、KH2PO40.60g/L、16.0波美的麦芽汁90ml/L、琼脂12.00 g/L，控制PH值为5.40 ;所述酶解松针粉的制备方法如下:在牛肝菌生长地收集松针，烘干，粉碎；按1:6的重量体积比加入水，混成糊状，用超声波处理75min，再加入10倍水，调节PH值为4.6，于53°C水浴中，按7.0%的重量体积比加入纤维素酶，酶解140 min后，将水浴温度升至95°C，至水分基本蒸干时移入75°C烘箱中，干燥32hr ;所述发酵玉米复合粉的制备方法如下:将玉米面、小麦面、黄豆粉按2:1:1比例混合，按1:1.3的混合物重量体积比加入水，拌匀，在蒸锅中蒸30分钟，取出，待温度冷至35°C时，按说明书掺入适量的酒曲粉，拌匀后放入干净的瓷罐或泡菜罐中，密封好，放在30°C的培养箱中，发酵6天，将发酵物在60°C烘箱中烘干，粉碎，过80目分样筛；
将接种小组织块的试管放置在温度为22~23°C下暗培养10天，待菌块周围有极少白色菌丝萌发，培养基渐变成浅褐色时，每天将试管放置于600Lx的弱光下10hr，7天后，每天将试管放置于1900LX的较强光照下10hr，15天，即从原组织块上长出2个菌柄高1.2cm,直径0.5cm的小子实体原基。
[0013] 实例四:
野外采摘生长健壮、无虫害、未完全开伞、菌柄较粗壮、菌盖较肥厚的成熟子实体；将子实体带回实验室，于超净台上用酒精棉球，轻擦菌盖表面及菌柄部位，用解剖刀片轻轻去除菌盖中部表皮，从菌盖中部取十字，将子实体一分为四，取菌柄与菌盖交接处的内部无菌组织块，切成0.45cm2的小块；
将切取的小组织块，轻轻嵌入18X180mm的试管斜面诱导培养基表面，所述的培养基成分为:马铃薯95.00g/L、酶解松针粉37g/L、发酵玉米复合粉16g/L、CaCl2 l.0Og /L、KH2PO40.60g/L、16.0波美的麦芽汁83ml/L、琼脂12.00 g/L，控制PH值为5.60 ;所述酶解松针粉的制备方法如下:在牛肝菌生长地收集松针，烘干，粉碎；按1:6的重量体积比加入水，混成糊状，用超声波处理68min，再加入8.5倍水，调节PH值为4.4，于51 °C水浴中，按6.8%的重量体积比加入纤维素酶，酶解135 min后，将水浴温度升至93°C，至水分基本蒸干时移入73°C烘箱中，干燥31h r ;所述发酵玉米复合粉的制备方法如下:将玉米面、小麦面、黄豆粉按2:1:1比例混合，按1:1.5的混合物重量体积比加入水，拌匀，在蒸锅中蒸28分钟，取出，待温度冷至33°C时，按说明书掺入适量的酒曲粉，拌匀后放入干净的瓷罐或泡菜罐中，密封好，放在29°C的培养箱中，发酵5天，将发酵物在58°C烘箱中烘干，粉碎，过80目分样筛；
将接种小组织块的试管放置在温度为22~23°C下暗培养9天，待菌块周围有极少白色菌丝萌发，培养基渐变成浅褐色时，每天将试管放置于550Lx的弱光下10hr，6天后，每天将试管放置于2000LX的较强光照下10hr，13天，即从原组织块上长出2个菌柄高1.1cm,直径
0.40cm的小子实体原基。
【权利要求】
1.一种砖红绒盖牛肝菌试管子实体原基的诱导方法，其特征为，以野外采摘的子实体小组织块为材料，在试管培养基上直接诱导分化子实体原基。
2.根据权利要求1所述的砖红绒盖牛肝菌试管子实体原基的诱导方法，其特征为，子实体小组织块的准备及切取方法为:野外采摘生长健壮、无虫害、未完全开伞、菌柄较粗壮、菌盖较肥厚的成熟子实体；将子实体带回实验室，于超净台上用酒精棉球，轻擦菌盖表面及菌柄部位，用解剖刀片轻轻去除菌盖中部表皮，从菌盖中部取十字，将子实体一分为四，取菌柄与菌盖交接处的内部无菌组织块，切成0.25~0.49cm2的小块。
3.根据权利要求1所述的砖红绒盖牛肝菌试管子实体原基的诱导方法，其特征为，所述的试管培养基成分为:马铃薯80.00~100g/L、酶解松针粉35~40 g/L、发酵玉米复合粉 15 ~20 g/L、CaCl2 1.0Og /L、KH2PO40.60g/L、16.0 波美的麦芽汁 80 ~90ml/L、琼脂12.00 g/L,控制 PH 值为 5.40 ~5.60。
4.根据权利要求3所述的试管培养方法，其特征为，所述培养基中酶解松针粉的制备方法如下:在牛肝菌生长地收集松针，烘干，粉碎；按1:4~1:6的重量体积比加入水，混成糊状，用超声波处理65~75min，再加入8~10倍水，调节PH值为4.0~4.6，于50~53°C水浴中，按6.0~7.0%的重量体积比加入纤维素酶，酶解120~140 min后，将水浴温度升至92~95°C，至水分基本蒸干时移入73~75°C烘箱中，干燥30~32hr ;所述发酵玉米复合粉的制备方法如下:将玉米面、小麦面、黄豆粉按2:1:1比例混合，按1:1~1:1.5的混合物重量体积比加入水，拌匀，在蒸锅中蒸20~30分钟，取出，待温度冷至30~35°C时，按说明书掺入适量的酒曲粉，拌匀后放入干净的瓷罐或泡菜罐中，密封好，放在28~30°C的培养箱中，发酵4~6天，将发酵物在55~60°C烘箱中烘干，粉碎，过80目分样筛。
5.根据权利要求1所述的砖红绒盖牛肝菌试管子实体原基的诱导方法，其特征为，子实体原基的诱导方法为:将切取的小组织块，轻轻嵌入试管斜面诱导培养基表面，在温度为22~23°C下暗培养8~10天，待菌块周围有极少白色菌丝萌发，培养基渐变成浅褐色时，每天将试管放置于400~600Lx的弱光下10hr，5~7天后，每天将试管放置于1600~2000Lx的较强光照下IOhr，10~15天，即从原组织块上长出I~2个菌柄高0.8~1.2cm，直径0.30~0.5cm的小子实体原基。
【文档编号】A01H4/00GK103609338SQ201310701987
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年12月19日 优先权日:2013年12月19日
【发明者】李宗菊, 王鹏飞, 张曦予, 吴鹏, 冯辽辽, 赵昱, 左奎 申请人:云南大学