具有改进的生长特性的植物的制作方法

具有改进的生长特性的植物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于生产与对应的未基因修饰的野生型植物相比具有改进的生长特性的基因修饰之植物的方法，所述方法包括在植物细胞、植物或其部分中减少或缺失EBI1或EBI2多肽的量或活性。
【专利说明】具有改进的生长特性的植物

【技术领域】
[0001]本发明涉及用于生产与对应的未基因修饰的野生型植物相比具有改进的生长特性的基因修饰之植物的方法，所述方法包括在植物细胞、植物或其部分中减少或缺失EBIl或EBI2多肽的量或活性。

【背景技术】
[0002]植物使用光-暗信号(light-dark cue)和内部的24小时(昼夜节律)钟来使其自身适应所处的局部环境并据此同步其代谢。模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)的昼夜节律钟是由一系列复杂的相互作用的反馈环构成，由此蛋白质调控其自身在白天和黑夜的表达。Early bird(ebi)是昼夜节律突变，其导致时钟加快:ebi植物有短的昼夜节律周期，提早阶段的时钟基因表达，并提早开花。
[0003]负责eb1-Ι表型的基因AtNFXL-2是锌指转录因子，其为人NF-Xl蛋白的同源物。在人中，NF-Xl结合于在II类MHC基因中发现的X-盒。拟南芥具有两个NF-Xl同源物，AtNFXL-1和AtNFXL-2，其都被认为起到拮抗地调控参与盐、渗透和干旱胁迫之基因的作用，其中AtNFXL-1激活胁迫诱导基因而AtNFXL-2抑制胁迫诱导基因。AtNFXL-1也被认为是防御相关的基因和温度胁迫的负调节子。因此，AtNFXL-2突变体的时钟表型提供了时钟与生物和非生物胁迫应答之间引人兴趣的联系。在最近的综述中和对时钟蛋白GI在冷胁迫耐受中之可能作用的鉴定中已经提到了该联系。
[0004]ebi_l 突变体的昼夜节律表型已经由 Johansson,M.等，(2011)Partners in Time:EARLY BIRD Associates wi th ZEITLUPE and Regulates the Speed of the ArabidopsisClock.Plant Phys1l.155(4):2108-2122 表征。
[0005]杨属(Populus)的树具有两个EBIl 基因:EBIla(SEQ ID NO:1)和 EBIlb(SEQID NO:3)以及两个 EBI2 基因:EBI2a(SEQ ID NO:6)和 EBI2b (SEQ ID NO:8)。同样参照Johansson等(2011)，补充表1和补充图1。
[0006]植物生物质生产的增加(特别是在农业和林业中)对于以下方面都非常重要:作为食物并充当用于满足日益增长之人口需求的能源和材料的可再生资源，并且充当不断增加之温室气体水平的0)2汇(sink)。目前，最主要的森林生产是基于北方针叶林的生产，那里树木暴露于大的季节性日长和温度变化，导致相当短的生长季节。为增加这些森林和其他森林的生产力，获得在广泛的纬度梯度变异(cline)下茁壮生长并且在最多产的时候生产大量生物质的种质是必要的。

【专利附图】

【附图说明】
[0007]图1A举例说明来自实时PCR生物学重复I的杨属EBIl的昼夜表达(diurnalexpress1n)。Y 轴代表相对表达(PttEBI la/Pttl8S)。
[0008]图1B举例说明来自实时PCR生物学重复I的杨属EBI2之光诱导的昼夜表达。Y轴代表相对表达(PttEBI2a/Pttl8S)。
[0009]图1C举例说明来自实时PCR生物学重复2的杨属EBIl之光诱导的昼夜表达。Y轴代表相对表达(PttEBI la/Pttl8S)。
[0010]图1D举例说明来自实时PCR生物学重复2的杨属EBI2之光诱导的表达。Y轴代表相对表达(PttEBI2a/Pttl8S)。
[0011]图1E举例说明杨属EBIl的昼夜表达。两个Y轴分别代表EBIla和EBIlb的表达水平。从昼夜数据库[http://diurnal, cgrb.0regonstate.edu/]* 获得 LDHH 数据。
[0012]图1F举例说明杨属EBI2a的昼夜表达。两个Y轴分别代表EBI2a和EBI2b的表达水平。从昼夜数据库获得LDHH数据。
[0013]在图1A至IF中，X轴代表以小时计的时间。在恒定的温度和分别由白色和灰色柱代表的光和黑暗周期中采集样品。
[0014]图1G举例说明EBIl在各种杨属组织中的表达(数据来自杨树eFP浏览器@http://bar.utoront0.ca/)。
[0015]图1H举例说明EBI2在各种杨属组织中的表达(杨树eFP浏览器)。
[0016]在图1G至IH中，组织是成熟叶(M);嫩叶(L);根(R);黑暗生长的白化(et1lated)幼苗(S);黑暗生长的白化幼苗，暴露于光3小时(S3);持续光照生长的幼苗(CS);雌菓荑花序(FC);雄菓荑花序(MC)和木质部(X)。Y轴代表表达水平。
[0017]图2示出转基因杨属的树中的延长生长和径向生长，其中EBIl (图2A)和EBI2(图2B)已经通过RNA干扰被敲除。T89代表野生型树。左Y轴代表按cm计的高度。右Y轴代表按mm计的直径。X轴代表按天计的时间。
[0018]图3举例说明转基因树中杨属EBI1(图3A)和EBI2(图3B)表达的比值(突变体/WT)，其中EBIl和EBI2已经分别通过RNA干扰被敲除。
[0019]图4示出转基因杨属的树中的季节生长模式(Y轴的封顶(bud set)评分，3 =活跃的生长，O =休眠)，其中EBIl (图4A)和EBI2 (图4B)已经通过RNA干扰被敲除。X轴代表在短日下按天计的时间。

【发明内容】

[0020]已经出人意料地发现，具有EARLY BIRDl (EBIl)和EARLY BIRD2 (EBI2)之转录物水平降低的树比野生型树生长得更好。生长表型与表达之转录物的水平成反比(当转录物更少时生长更多)表明该效应是由于靶向之转录物的下调。表明EBI基因可用作靶标以下调来获得森林树木增加的生长并产生更多生物质。
[0021]因此，在本发明的一个方面提供了用于生产与对应的非基因修饰的野生型植物相比具有改进的生长特性的基因修饰之植物的方法，所述方法包括:
[0022](a)在植物细胞、植物或其部分中减少或缺失EBIl或EBI2多肽的量或活性；和
[0023](b)产生和/或选择与对应的未基因修饰之野生型植物相比具有改进的生长特性之基因修饰的植物并且在允许所述植物发育的条件下培养。
[0024]术语“改进的生长特性”应当理解为初级生长，包括茎和根的变长，以及植物的次级生长，包括从形成层产生次级组织“木质”以及茎和根之周长的增加。追踪生长的一种方式可以是通过测量茎的高度和直径并任选地计算茎的体积以及将它与野生型群体比较或与目标植物的亲代对照树比较。
[0025]在另一方面，根据本发明的方法包括另外的步骤:
[0026](c)使所述基因修饰的植物分别与其自身自交或与另一植物杂交以生产种子；和
[0027](d)从所述种子培养出子代(progeny)植物，其中所述子代植物具有改进的生长特性。
[0028]优选地，所述EBIl多肽包含具有至少约161个氨基酸的结构域，所述结构域与SEQID NO:5所示的氨基酸序列具有至少75%同一性，例如80%、85%、90%、95%或100%同一性。更优选地，所述EBII多肽具有与SEQ ID NO:2 (EBIla)或SEQ ID NO:4(EBIlb)所示的序列有至少75%，例如80%、85%、90%、95%或100%同一性的氨基酸序列。
[0029]优选地，所述EBI2多肽包含具有至少约191个氨基酸的结构域，所述结构域与SEQID NO: 10所示的氨基酸序列具有至少75%同一性，例如80%、85%、90%、95%或100%同一性。更优选地，所述EBI2多肽具有与SEQ ID NO:7 (EB12a)或SEQ ID NO:9 (EB12b)所示的序列有至少75%，例如80%、85%、90%、95%或100%同一性的氨基酸序列。
[0030]在另一个方面，本发明提供了如上所述的方法，其包括减少或缺失至少一种核酸分子的表达，其中所述分子选自:(a)编码EBIl多肽或EBI2多肽的核酸分子；和(b)具有选自 SEQ ID NO:1 (EBIla)、SEQ ID NO: 3 (EBIlb)、SEQ ID NO: 6 (EB12a)和 SEQ ID NO:8 (EBI2b)之核酸序列的核酸分子。
[0031]根据本发明，所述方法还包括用所述核酸构建体或重组DNA构建体转化植物的可再生细胞并且从所述经转化的细胞再生转基因植物的步骤。当将上述DNA构建体或载体引入到植物细胞中时，必须考虑本领域技术人员公知的某些事项。如上所述，待插入的核酸应当组装在含有将驱动转录之有效调控元件的构建体内。必须有可用的将所述构建体转运到细胞中的方法。一旦所述构建体在细胞内，到内源染色体物质的整合将会发生或将不会发生。
[0032]本领域技术人员所公知的转化技术可以用来将DNA构建体和载体引入植物细胞以生产具有改进的生长特性的转基因植物(特别是转基因树)。
[0033]本领域技术人员将意识到可以采用多种宿主细胞作为根据本发明之DNA构建体和载体的受体。宿主细胞的非限制性实例包括胚胎组织、1、11和III型愈伤组织、下胚轴、分生组织、根组织、在韧皮部中表达的组织、叶盘(leaf disc)、叶柄和茎节间中的细胞。
[0034]如上所列，农杆菌(Agrobacterium)转化是本领域技术人员广泛使用的转化树物种(特别是阔叶物种例如杨树)的一种方法。稳定的、可育的转基因植物的生产目前在本领域是常规的。当农杆菌转化效率低或无效时(例如在一些裸子植物物种中)可以使用其他方法，例如微粒或粒子轰击、电穿孔、显微注射、直接DNA摄取、脂质体介导的DNA摄取或涡旋的方法。
[0035]或者，可以采用不同技术的组合以增强转化过程的效率，例如用农杆菌包被的微粒子轰击，或者用微粒轰击来诱发伤口接着与农杆菌共培养。
[0036]应当理解，转化技术的特定选择将取决于其转化某些植物物种的效率以及用特定选择的方法实践本发明之人的经验和偏好。技术人员将明白将核酸引入到植物细胞中的转化系统的特定选择对于本发明不是必要的或者限制本发明，用于植物再生之技术的选择也不是。
[0037]转化之后，优选地使用并入到转化载体中的显性可选择标记物选择转基因植物。通常，这样的标记物将赋予经转化的植物抗生素或除草剂抗性并且通过将所述植物暴露于恰当浓度的抗生素或除草剂可完成转化体的选择。使用D型氨基酸并且基于植物只能耐受L型之事实的新选择标记物提供了快速、有效和环保的选择系统。该选择系统的一个有趣的特征是其能够选择和反选。
[0038]随后，按照本领域的标准可以例如从单细胞、愈伤组织或叶盘再生植物。几乎任何植物都可从所述植物的细胞、组织和器官完整地再生。选择经转化的植物并生长至成熟后，鉴定示出改变的生长特性表型的那些植物。另外，为了确认所述表型是由于本文公开的多肽或多核苷酸的表达水平或活性的改变引起的，可通过使用Northern印记、RT-PCR或微阵列分析mRNA表达来确定,或者通过使用免疫印记或Western印记或凝胶移位测定分析蛋白质表达来确定。
[0039]因此，根据本发明之方法的又一方面包括选自以下的至少一个步骤:
[0040](a)将编码核糖核酸序列的核酸分子引入到至少一个植物细胞中，其能够形成双链核糖核酸分子，由此所述双链核糖核酸分子的至少17个核苷酸(例如18、19、20或21个核苷酸)的片段具有与EBI (即EBIla、EBIlb、EBI2a或EBI2b)核酸分子有至少50% (例如60%、70%、80% 、90%或95% )核酸序列同一性的核酸序列；
[0041](b)将RNAi或反义核酸分子引入至少一个植物细胞中，由此所述RNAi或反义核酸分子包含至少17个核苷酸(例如18、19、20或21个核苷酸)的片段，所述片段具有与EBI核酸分子有至少50% (例如60^^70^^80^^90%或95% )核酸序列同一性的核酸序列；
[0042](C)将能够与内源基因重组并且沉默、失活内源基因或降低内源基因之活性的核酸构建体引入到至少一个植物细胞中，所述内源基因包含EBI核酸分子；以及
[0043](d)在包含EBI核酸分子的内源基因中引入或检测非沉默突变。
[0044]在另一方面，本发明提供了一种方法，其中减少或缺失EBIl多肽或EBI2多肽的量或活性是由以下任一造成的:
[0045](a)在植物细胞、植物或其部分的内源基因中天然的突变或诱导的突变；
[0046](b)内源基因的T-DNA失活；
[0047](c)内源基因的位点定向诱变或定向育种(directed breeding),其中所述内源基因包含EBI核酸分子。
[0048]在一个优选的方面，根据本发明的方法包括:
[0049](a)提供包含以下的载体:(i)用于引入到至少一个植物细胞的所述核酸分子；(?)包含与所述核酸分子融合的一个或更多个调控元件的侧翼核酸分子，其中所述调控元件控制所述核酸分子的表达；以及
[0050](b)用所述载体转化所述植物的至少一个细胞以产生与对应的未经转化的野生型植物相比具有改进的生长特性的经转化植物。
[0051]在另一个方面，本发明提供了通过以上所述方法生产的基因修饰(特别是转基因)植物。根据本发明，所述转基因植物可以是多年生植物，其优选为木本植物或木本物种。在一个有用的实施方案中，所述木本植物是阔叶植物，其可以选自:金合欢(acacia)、按树(eucalyptus)、角树(hornbeam)、山毛棒(beech)、桃花心木(mahogany) >胡桃树(walnut)、栎(oak)、稃树(ash)、柳树(willow)、山胡桃树(hickory)、桦(birch) >栗(chestnut)、杨树(poplar)、棺木(alder)、槭树(maple)、悬铃木(sycamore)、银杏(ginkgo)、棕榈树(palm tree)和香枫(sweet gum)。来自杨柳科(Salicaceae)的阔叶植物(例如柳树、杨树和山杨(aspen)包括其变种)是特别感兴趣的，因为这两组包括树或木质灌木的速生物种，其特别地培养以提供木材和生物燃料。
[0052]在又一些实施方案中，木本植物是针叶树，其可以选自:柏(cypress)、花旗松(Douglas fir)、杉(fir)、红杉(sequoia)、铁杉(hemlock)、雪松(cedar)、刺柏(juniper) >落叶松(larch)、松树(pine)、红杉(redwood)、云杉(spruce)和红豆杉(yew)。在一些有用的实施方案中，木本植物是孕育果实的植物，其可以选自:苹果树、李树、梨树、香蕉树、橘树、猕猴桃树、柠檬树、樱桃树、葡萄树和无花果树。可在本方法中使用的另一些木本植物还可选自:棉花、竹子和橡胶植物。另一些可能有用的植物是培养用于生物质生产的草，例如芒属(Miscanthus)和柳枝稷(Switchgrass)。
[0053]本发明扩展到通过本文所述方法获得的上述转基因植物的任何植物细胞，并且扩展到所有植物部分，包括可收获的植物部分，种子及其繁殖体，以及植物外植体或植物组织。本发明还涵盖了包含根据本发明之DNA构建体的植物、其部分、植物细胞或植物子代。本发明还扩展到涵盖通过以上提及的任何方法所生产的初代经转化或经转染的细胞、组织、器官或整个植物的子代，唯一的要求是该子代与通过根据本发明之方法在亲代中产生的那些表现出相同的一种或更多种基因型和/或表型特征。
[0054]因此，本发明提供了与对应的未基因修饰野生型植物相比具有改进的生长特性之基因修饰的植物，其中所述植物具有减少的EBII或EBI2多肽的量或活性，并且其中所述植物的基因组包含选自以下任一的基因修饰:
[0055]i)在包含编码EBIl或EBI2多肽之核酸分子的内源基因中的非沉默突变；
[0056]ii)插入到所述基因组中的转基因，所述转基因包含编码核糖核酸序列的核酸分子，其能够形成双链核糖核酸分子，由此所述双链核糖核酸分子的至少17个核苷酸片段与编码EBIl或EBI2多肽之核酸分子具有至少50%的同源性；
[0057]iii)在包含编码EBIl或EBI2多肽之核酸分子的内源基因中的突变，其通过向至少一个植物细胞中引入能够与内源基因重组并且沉默、失活内源基因或降低内源基因活性的核酸构建体来诱导，
[0058]其中所述EBIl多肽具有与选自SEQ ID NO:2、4和5之中的序列有至少80%氨基酸序列同一性的氨基酸序列，或者其中所述EBI2多肽具有与选自SEQ ID NO:7、9和10之中的序列有至少80%氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
[0059]在另一个实施方案中，本发明提供了 EBIl和EBI2基因用于鉴定与野生型相比具有生长增加之植物的用途。
[0060]在又一个实施方案中，本发明提供了 EBIl和EBI2基因以及多肽在鉴定用于抑制EBIl或EBI2活性之试剂中的用途，从而可用于改进植物生长。
[0061]在又一个实施方案中，本发明提供了 EBIl和EBI2基因作为标记物辅助育种之候选基因的用途。
实施例
[0062]实施例1:EBI1和EBI2的表达模式
[0063]当在48小时中以18小时光/6小时暗的日长方案(18°C /18°C )，在黎明前3小时开始，(图1，行I和2，实时PCR生物重复I和2，各自含有在每个时间点从4株独立的树于7-9 节间米样的叶)并且在 DIURNAL 中(图 1，行 3:http: //diurnal, cgrb.0regonstate.edu/)每4小时测定时，EBIl和EBI2表现出具有光诱导和昼夜表达的昼夜节律模式，例如EBI2，EBIl更不清楚。
[0064]如在图1，行4中示出的，如在杨树eFP浏览器(http: //bar, utoront0.ca/efppop/cg1-bin/efpffeb.cgi)中发现，EBIl和EBI2在多种组织中表达。
[0065]实施例2:转基因植物的制备和生长
[0066]使有以下引物组，根据产品说明书，从欧洲山杨(Populus tremula) X颤杨(tremuloides) cDNA 通过使用 Platinum pfx DNA 聚合酶(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)的 PCR 扩增 RNAi 触发区(trigger reg1n):
[0067]PttEBI2
[0068]正向:5，-CACCGCGGCCGCCCATCTCGTGTGATTGGC-3，(SEQID NO:11)；
[0069]反向:5’-CTTCCACGAAGTTCCCTTCAGAG-3’ (SEQ ID NO:12)；
[0070]PttEBIl
[0071]正向:5，-CACCGCGGCCGCGGACTTGGACTTCTTCCT-3，(SEQID NO:13)；
[0072]反向:5，-GATTCGTGGATGTCTTCTTCTGTG-3’(SEQ ID NO:14)。
[0073]EBIl构建体用来下调EPI Ia和EPI Ib，并且EBI2构建体用来下调EB12a和EB12b。
[0074]将PCR 产物克隆在 pENTRTM/SD/D-TOPO? 载体 (Invitrogen, Carlsbad,
CA，USA)中。为了移除来自pENTRTM/SD/D-TOPOK载体的无效触发区，将这些载体用NotI消化并自连接。这些入门载体(entry vector)经双脱氧核苷酸测序并与目的载体(pANDA35HK)用于LR-Gateway 反应(Invitrogen, Carlsbad, CA,USA)。随后使用农杆菌介导的转化以转化杂交山杨，欧洲山杨(Populus tremula L.) X颤杨(P.tremuloides Mich.)。根据本领域已知方法转化并再生克隆T89。
[0075]在18小时的光周期和18°C/18°C (日/夜)的温度下于生长室中，使转基因杨树株系与其野生型对照(wt)树一起生长。每周用I比100稀释的Weibulls Rika S NPK7-1-5(终浓度 N03，55g/l ;NH4，29g/l ；P, 12g/l ;K，56g/l ；Mg7.2g/l ；S,7.2g/l ；B,0.18g/l ；Cu，0.02g/l ；Fe,0.84g/l ；Mn,0.42g/l ；Mo,0.03g/l ；Zn,0.13g/L)给植物施肥。测量高度和直径并用于生长的分析。
[0076]敲除EBIl和EBI2产生的转基因树与野生型T89相比具有延长生长以及径向生长二者的增加(图2和表1)。
[0077]如表1所示,一些EBIl转基因树示出体积生长指数(volume growth index)增加25-28%并且高度增加5-13%。一些EBI2转基因树示出体积生长指数增加15-36%并且高度增加6-14%。
[0078]表1
[0079]比值是转基因株系重复的平均值除以Wt值的平均值。
[0080]体积指数按照(直径X直径X高度)计算。t检验值示出P值。
[0081]

【权利要求】
1.用于生产与对应的未基因修饰的野生型植物相比具有改进的生长特性的基因修饰之植物的方法，所述方法包括: a.在植物细胞、植物或其部分中减少或缺失EBIl或EBI2多肽的量或活性；和 b.产生和/或选择与对应的未基因修饰的野生型植物相比具有改进的生长特性之基因修饰的植物并且在允许所述植物发育的条件下培养。
2.权利要求1所述的方法，所述方法步骤还包括: (c)使所述基因修饰的植物分别与其自身自交或与另一植物杂交以生产种子；和 (d)从所述种子培养出子代植物，其中所述子代植物具有改进的生长特性。
3.权利要求1或2所述的方法，其中所述多肽是包含具有至少约161个氨基酸之结构域的EBIl多肽，所述结构域与SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少80%同一性。
4.权利要求3所述的方法，其中所述EBIl多肽具有与选自SEQID NO:2和4之序列有至少80%氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
5.权利要求4所述的方法，其中所述EBIl多肽具有选自SEQID NO:2和4的氨基酸序列。
6.权利要求1或2所述的方法，其中所述多肽是包含具有至少约191个氨基酸之结构域的EBI2多肽，所述结构域与SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列具有至少80%同一性。
7.权利要求6所述的方法，其中所述亚基是EBI2多肽并且其中所述多肽的氨基酸序列与选自SEQ ID NO:7和9的序列有至少80%氨基酸序列同一性。
8.权利要求7所述的方法，其中所述EBI2多肽具有选自SEQID NO:7和9的氨基酸序列。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其包括减少或缺失至少一种核酸分子的表达，其中所述分子选自: a.编码EBIl多肽或EBI2多肽的核酸分子；和 b.具有选自SEQID NO:1、3、6和8之核酸序列的核酸分子。
10.根据权利要求9所述的方法，由此所述方法包括选自以下之中的至少一个步骤: a.将编码核糖核酸序列的核酸分子引入到至少一个植物细胞中，所述核酸分子能够形成双链核糖核酸分子，由此所述双链核糖核酸分子的至少17个核苷酸的片段具有与在权利要求9中所描述之核酸分子有至少50%核酸序列同一性的核酸序列； b.将RNAi或反义核酸分子引入到至少一个植物细胞中，由此所述RNAi或反义核酸分子包含至少17个核苷酸的片段，所述片段具有与权利要求9中所描述之核酸分子有至少50%核酸序列同一性的核酸序列； c.将能够与内源基因重组并且沉默、失活内源基因或降低内源基因之活性的核酸构建体引入到至少一个植物细胞中，所述内源基因包含如权利要求9中所描述的核酸分子；以及 d.在包含如权利要求9中所描述之核酸分子的内源基因中引入或检测非沉默突变。
11.根据权利要求9所述的方法，其中减少或缺失EBII多肽或EBI2多肽的量或活性是由以下任一造成的: a.在所述植物细胞、所述植物或其部分的内源基因中天然的突变或诱导的突变； b.内源基因的T-DNA失活；C.内源基因的定点诱变或定向育种， 其中所述内源基因包含如权利要求9中所描述的核酸分子。
12.根据权利要求9或10所述的方法，所述方法包括: a.提供包含以下的载体:(i)用于引入到至少一个植物细胞的所述核酸分子；(ii)包含与所述核酸 分子融合的一个或更多个调控元件的侧翼核酸分子，其中所述调控元件控制所述核酸分子的表达；以及 b.用所述载体转化所述植物的至少一个细胞以产生与对应的未经转化的野生型植物相比具有改进的生长特性的经转化植物。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述植物是多年生木本植物。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述植物是选自以下的阔叶植物:金合欢、桉树、角树、山毛榉、桃花心木、胡桃树、栎、柊树、柳树、山胡桃树、桦、栗、杨树、棺木、山杨、槭树、悬铃木、银杏、棕榈树和香枫。
15.基因修饰的植物，其通过根据权利要求1至14中任一项所述的方法生产。
16.基因修饰的植物，其与对应的未基因修饰的野生型植物相比具有改进的生长特性，其中所述植物具有减少的EBIl或EBI2多肽的量或活性，并且其中所述植物的基因组包含选自以下任一的基因修饰: i)在包含编码EBIl或EBI2多肽之核酸分子的内源基因中的非沉默突变； ?)插入到所述基因组中的转基因，所述转基因包含编码核糖核酸序列的核酸分子，所述核酸分子能够形成双链核糖核酸分子，由此所述双链核糖核酸分子的至少17个核苷酸的片段与编码EBIl或EBI2多肽的核酸分子有至少50%的同源性； iii)在包含编码EBIl或EBI2多肽之核酸分子的内源基因中的突变，其通过向至少一个植物细胞中引入能够与所述内源基因重组并且沉默、失活所述内源基因或降低所述内源基因活性的核酸构建体来诱导， 其中所述EBIl多肽具有与选自SEQ ID NO:2、4和5之中的序列有至少80%氨基酸序列同一性的氨基酸序列，或者其中所述EBI2多肽具有与选自SEQ ID NO:7、9和10之中的序列有至少80 %氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
【文档编号】A01H5/04GK104169423SQ201380012776
【公开日】2014年11月26日 申请日期:2013年3月5日 优先权日:2012年3月6日
【发明者】马里亚·埃里克松, 高田直树, 米卡埃尔·约翰松 申请人:瑞典树木科技公司