一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法
【专利摘要】一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：取贵州半蒴苣苔顶芽作为外植体进行消毒；将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到丛生芽；将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株；将所述健壮植株置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗；取完整的带根苗进行炼苗后移植于石灰岩土壤生长一个半月，再移栽至大田。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量贵州半蒴苣苔的优质种苗，对贵州半蒴苣苔资源保护和可持续利用具有重要价值。
【专利说明】一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种贵州半蒴苣苔组织培养快速繁殖方 法。
【背景技术】
[0002] 贵州半蒴苣苔，为苦苣苔科植物贵州半蒴苣苔(ZfeffiiAoea carahriei ra_r. pawciflerris W. T. Wang & Z. Y. Li)。多年生草本。莖上升，无毛，不分枝或分枝，花期8- 10月，果期10-12月。分布于我国广西、广东、福建、湖南等省。生于山谷林下石上，海拔 250-1500m。全草入药，微酸、涩，凉。清热解毒。用于治疗痈、烫伤、跌打损伤、刀伤出血，腹 水。
[0003] 贵州半蒴苣苔花色褐紫色或淡绿色，具有较高的园林观赏和一定的药用价值，一 般生于山谷林下石上或阴处，林缘沟旁或岩石上、沟边石缝中，石灰岩山地阴湿处，对环境 要求比较苛刻，加之近年来环境资源遭到严重破坏，使贵州半蒴苣苔植株数量大大减少。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是采用生物技术组织培养方法，有效快速地提高贵州半蒴苣苔种苗 的繁殖速度和质量，在短期内就能提供大量贵州半蒴苣苔的优质种苗。
[0005] 本发明采取的技术方案是： 1、一种组织培养快速繁殖方法，其特征在于该方法包括以下步骤： (1) 外植体的选择与消毒：取贵州半蒴苣苔顶芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液 浸泡5-10min、线状自来水冲洗10-15min、添加了 2-3滴吐温-20的100 mlO. 1%升汞消毒 7-9min、无菌水冲洗3-5次，最后用灭菌滤纸吸去表面水分，剪成长约lcm长的外植体，其中 无菌水为经高压灭菌的蒸馏水， (2) 顶芽分化获得丛生芽培养：将步骤（1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养 温度为23-26°C，光照强度15001ux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养25-30天，顶 芽分化后获得丛生芽，其中MS培养基中含0. 5-1. 5mg/L的6-BA、0. 5-1. Omg/L的NAA(萘乙 酸）、25-30g/L蔗糖和4. 0-4. 5g/L的琼脂，培养基的pH值为5. 8， (3) 丛生芽继代培养：将步骤（2)中得到的试管苗不定芽置于MS增殖培养基中，在培养 温度23-26°C，光照强度15001ux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养20-25天得到完 整的健壮植株，其中MS壮苗培养基中含1. 0-2. Omg/L的6-BA(苄氨基腺嘌呤)、0. 5-1. Omg/ L的ΝΑΑ、0· 5-L 0mg/L KT (激动素），25-30g/L蔗糖和4. 0-4. 5g/L的琼脂，培养基的pH值 为 5.8， (4) 丛生芽生根培养：将步骤（3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温 度23-26°C，光照强度15001UX，光照时间为10-12小时/天的条件下培养25-30天得到带 根的完整植株，其中MS生根培养基中含1. 0-1. 5mg/L的IAA (吲哚乙酸)、0. 5 mg/L的ABT (生根粉)、25-30g/L蔗糖和4. 0-4. 5g/L的琼脂，培养基的pH值为5. 8， (5)炼苗与移栽：步骤（4)获得带根的完整植株后，在室温为25°C的室内散射光照射 2-4天，打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根 部培养基，立即移栽到通风良好且弱光石灰岩土壤中，在石灰岩土壤中生长一个半月后移 栽大田。
[0006] 采用生物技术组织培养技术，不仅可以有效快速地提高贵州半蒴苣苔种苗的繁殖 速度和质量，且采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，对贵州半蒴苣苔资源保护 和可持续利用具有重要价值。
【具体实施方式】
[0007] 下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0008] -种贵州半蒴苣苔组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤： (1) 外植体的选择与消毒：取贵州半蒴苣苔顶芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液 浸泡5-10min、线状自来水冲洗10-20min、添加了 2-3滴吐温-20的100 mlO. 1%升汞消毒 7-9min、无菌水冲洗3-5次，最后用灭菌滤纸吸去表面水分，剪成长约lcm长的外植体，其中 无菌水为经高压灭菌的蒸馏水， (2) 顶芽分化获得丛生芽快速繁殖：将步骤（1)得到的外植体接种到MS培养基中，在 培养温度为23-26°C，光照强度15001ux，光照时间为10-12h/d的条件下培养25-30天，顶 芽分化后获得大量丛生芽，其中MS培养基中含0. 5-1. 5mg/L的6-BA、0. 5-1. Omg/L的NAA、 25-30g/L蔗糖和4. 0-4. 5g/L的琼脂，培养基的pH值为5. 8,数据分析发现6-BA，NAA对贵 州半蒴苣苔丛生芽增殖倍率具有显著影响，根据生长率指标确定的最适培养基激素浓度为 1. 5 mg/L的6-BA和0. 5mg/L的NAA，此时贵州半蒴苣苔顶芽分化倍率为5. 72。
[0009] 表1不同激素对顶芽分化效果的影响
【权利要求】
1. 一种贵州半蒴苣苔组织培养快速繁殖方法，其特征在于该方法包括以下步骤： (1) 外植体的选择与消毒：取贵州半蒴苣苔顶芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶 液浸泡5-10min、线状自来水冲洗10-20min、添加2-3滴吐温-20的100 mlO. 1%升汞消毒 7-9min、无菌水冲洗3-5次，最后用灭菌滤纸吸去表面水分，剪成长约lcm长的外植体； (2) 顶芽分化获得丛生芽培养：将步骤（1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温 度为23-26°C、光照强度15001UX、光照时间为10-12小时/天的条件下培养25-30天，顶芽 分化后获得丛生芽，其中MS培养基中含0. 5-1. 5mg/L的6-BA、0. 5-1. Omg/L的NAA、25-30g/ L蔗糖和4. 0-4. 5g/L的琼脂，培养基的pH值为5. 8 ; (3) 丛生芽壮苗继代培养：将步骤（2)中得到的试管苗不定芽置于MS增殖培养基中，在 培养温度23-26°C、光照强度15001ux、光照时间为10-12小时/天的条件下培养20-25天 得到完整的健壮植株，其中MS壮苗培养基中含1. 0-2. Omg/L的6-BA、0. 5-1. Omg/L的NAA、 0· 5-1. Omg/L KT，25-30g/L 蔗糖和 4. 0-4. 5g/L 的琼脂，培养基的 pH 值为 5. 8 ; (4) 丛生芽生根培养：将步骤（3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温 度23-26°C、光照强度15001UX、光照时间为10-12小时/天的条件下培养25-30天得到带 根的完整植株，其中MS生根培养基中含1. 0-1. 5mg/L的IAA、0. 5 mg/L的ABT、25-30g/L蔗 糖和4. 0-4. 5g/L的琼脂，培养基的pH值为5. 8 ; (5) 炼苗与移栽：步骤（4)获得带根的完整植株后，在室温为25°C的室内散射光照射 2-4天，打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根 部培养基，立即移栽到通风良好且弱光石灰岩土壤中，在石灰岩土壤中生长一个半月后移 栽大田。
2. 如权利要求1所述的贵州半蒴苣苔组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述无菌 水为经高压灭菌的蒸馏水。
【文档编号】A01H4/00GK104041412SQ201410251602
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年6月9日 优先权日:2014年6月9日
【发明者】李翠, 张占江, 韦坤华, 李林轩, 韦莹, 王一诺, 王晓峰 申请人:广西壮族自治区药用植物园