一种促进檀香石斛快速繁殖的方法
【专利摘要】本发明建立了一种檀香石斛种子的组织培养和快速繁殖体系，以檀香石斛种子为外材料，依次经过诱导发芽、丛生芽的继代培养以及生根培养后得到完整植株。本发明的方法操作容易，生产成本低，不污染环境，可以实现规模化生产。通过本发明培育出的檀香石斛种苗，其遗传性状稳定，具备包括不变性、投入少、产出高、周期短在内的诸多优势。
【专利说明】一种促进擅香石斛快速繁殖的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药用植物种植领域，尤其涉及一种促进檀香石斛快速繁殖的方法。
【背景技术】
[0002] 檀香石斛（DenparishiiXDen.superbum)，是由廣香石斛和越南十八棒杂交而 成，为知名度甚高的春石斛之一，茎枝直立或略为弯曲、叶片为长椭圆形、冬季落叶性。花苞 由较上方无叶的茎节处抽出，通常每节着花1?5朵；花色紫红、花瓣质地厚、有浓厚的檀木 香味，花期在3?5月之间。具有很好的观赏性，经济价值较高。
[0003] 随着社会的发展，人民对美的追求以及对高端花卉的追求，春石斛市场需求潜力 大，现在已经有国外进口转型到国内生产，受产量制约，价格一直居高不下。春石斛作为后 起之秀的兰花品种，被盆花生产企业看做是未来最有希望的"洋兰之星"。
[0004] 现市场销售的檀香石斛的组培方法直接从檀香石斛的嫩芽开始培养，通过继代方 式培养出檀香石斛。但是嫩芽组培需经过多次继代，正常形成规模化生产需要继代15-20 次以上，不足在于：在继代多次以后就会出现变异，玻璃化、种质衰退等情况，严重影响后续 的发展；生长周期时间过长，一次继代时间为40-60天，经过多次继代方能形成的生产规 模，延长了檀香石斛的生长时间，无形之中增加了成本。
[0005] 本发明采用现代生物技术，采取种子培养模式，规模化生产种苗，得到优质的整齐 的檀香石斛种苗，解决檀香石斛人工种植的种苗问题，为檀香石斛的发展做出贡献。
【发明内容】
[0006] 为了解决【背景技术】中存在的檀香石斛生长慢，继代多次会变异、玻璃化、种质衰退 等问题，本发明提供了一种促进檀香石斛快速繁殖的方法，其技术方案如下：
[0007] 1)诱导发芽：在檀香石斛种子发黄未开裂之前，取硕果，在流水下清洗干净，置 于浓度为75-80 %的乙醇溶液浸泡30-40秒，然后置于浓度为1-1. 2 %的升汞溶液中消毒 15-20分钟，无菌水清洗5-6遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于诱导培 养基中，其中诱导培养基是按照以下的原料比例制备而成1/2MS为基本培养基附加萘乙酸 (NAA) 0? 2-2.Omg/L，糖 25-30g/L，琼脂 3-6g/L，茶多酚 5-30.Omg/L，香蕉 2 % -20 %，椰子汁 5%-30%，？11值为5.6，培养温度为29-321：，光照强度为2100-250011?，光照时间为14-16 小时/天，培养16-20天后得到檀香石斛小芽；
[0008] 2)继代培养：将步骤1)获得的大量的檀香石斛小芽置于继代培养基中，其中 继代培养基是按照以下的原料比例制备而成，1/2MS基本培养基附加（6-苄氨基嘌呤 (6-BA)0. 5-4.Omg/L，吲哚乙酸（IAA)O. 5-2.Omg/L，糖 25-30g/L，琼脂 3-6g/L，茶多酚 5-30.Omg/L，香蕉2 % -20 %，椰子汁5 % -30 %，PH值为5. 6,培养温度为29-32 °C，培养时 间为14-16小时/天，光照强度为2100-25001ux，62-70天左右可获得2cm左右高度的檀香 石斛组培分化苗；
[0009] 3)檀香石斛组培分化苗的生根培养：将步骤2)中获得的大量的檀香石斛分化苗 移栽到生根培养基，其中生根培养基是按照以下的原料比例制备而成，1/2MS为基本培养基 附加香蕉 5%-20%，IBA0. 1-2. 0,糖 2-10%，茶多酚 5-30.Omg/L，香蕉 2%-20%，椰子汁 5% -30%，活性炭0. 2-0. 4%，PH值5. 6培养温度为28°C，光照强度2100-25001ux，光照时 间为14-16小时/天的条件下培养62-70天后，把组培苗移到自然光下培养，25-28天后可 得到具有3-4条根的檀香石斛生根组培苗；
[0010] 4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的檀香石斛生根组培苗根部的培养基，晾干 水汽，将檀香石斛生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待1-2个月后檀香 石斛小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照 强度为800-100011?，湿度控制在50-60%，温度控制在20-251：。
[0011] 优选的是，所述的促进檀香石斛快速繁殖的方法，其特征在于，步骤1)中的诱导 培养基为：1/2MS为基本培养基附加萘乙酸（NAA) 1-2.Omg/L，糖30g/L，琼脂4g/L，茶多酚 25mg/L，香蕉2%，椰子汁5%。
[0012] 优选的是，所述的促进檀香石斛快速繁殖的方法，其特征在于，步骤2)中继 代培养基为：1/2MS基本培养基附加（6-苄氨基嘌呤（6-BA) 1. 5-4.Omg/L，吲哚乙酸 (IAA)L5-2.Omg/L，糖 30g/L，琼脂 3-6g/L，茶多酚 15-30.Omg/L，香蕉 10-20 %，椰子汁 25-30%。
[0013] 优选的是，所述的促进檀香石斛快速繁殖的方法，其特征在于，步骤3)中的生根 培养基为：1/2MS为基本培养基附加香蕉15% -20%，IBA1. 0-2. 0,糖2-5%，茶多酚15mg/ L，香蕉4%，椰子汁15%，活性炭0.2-0. 4%。
[0014] 本发明的有益效果：
[0015] 1、组培的原始材料来说，嫩芽和种子都可以，檀香石斛嫩芽是从外面的植株上取 的部分材料，由于一株石斛只有一个芽，用茎段也只能获得几个芽，每个芽采下来以后消毒 灭菌，最后获得的无菌材料大概只有40%左右，然后利用无菌材料才能继续增殖、诱导原球 茎、扩繁，要经过非常长的时间，一般需要经过10-20代才能获得足够多的材料，然而组培 过程中继代代数越长，成本升高，玻璃化变异加大，因此此时的材料已经没有很大的价值， 随着继代的增加。材料退化也是很严重的问题。
[0016] 2、石斛种子优势在于，量大，每个石斛硕果中含有大约10-100万左右数量的石 斛种子，经过筛选的培养基种子发芽率可以达到约95%以上，因此一个种子就可以做到几 十万的苗。而嫩芽需要经过15-20代左右的时间才能做到这个量，而且质量还不能保证。
[0017] 3、时间种子发芽到最后出苗所需时间远远短于嫩芽继代，几乎是嫩芽的零头，这 在很大程度上节约了资金，节约了能源，提高了竞争力，利用种子所需仅200多天可以出 苗，而利用嫩芽做到出苗所需的时间将是1000多天，因此从市场角度考虑也远远优于嫩芽 诱导苗。
[0018] 嫩芽作为组培材料：采集到足量的材料所需的材料也是很大的，所损耗的石斛成 本也非常高，而种子几乎对植株无任何影响。因此
[0019] 采用种子组培方法第一成本低，第二推广容易，第三，经济性好，技术先进，第四 ： 市场价值高，可以很大程度降低成本，让利种植，有利于扩大推广，对石斛资源的保护提供 了新的思路。
[0020] 4、培养基的优选，由基本培养基配合不同浓度激素再添加不同的有机物和茶多酚 组成在现所使用的培养基，其中添加的茶多酚作用于菌体细胞，能逐步破坏其细胞壁的完 整性，使得碱性磷酸酶渗出，继而使细胞膜的通透性增强，导致金属离子，蛋白质的渗漏使 细胞代发生紊乱，逐渐破坏细胞结构，从而起到抑菌的作用，香蕉、椰子汁的加入引用天然 符合物，促愈伤组织，促进种苗茁壮成长。经过多次尝试的基础上，按照一定的原则筛选出 来的对檀香石斛具有很好诱导，能在保持原植物的优良特性情况下，不变异情况下，增值率 高，生长快的优良培养基。
【具体实施方式】
[0021] 实施例1
[0022] 1)诱导培养：在檀香石斛种子发黄未开裂之前，取硕果，在流水下清洗干净，利用 75%乙醇浸泡30秒,浓度为1 %的升萊消毒15分钟,无菌水清洗5遍,在灭菌盘内利用手术 刀切开硕果，取出种子，播种于适当的培养基中，培养温度为29°C，光照强度为21001UX，光 照时间为14小时/天，培养16天后可见檀香石斛小芽发出，其中培养基为：1/2MS为基本培 养基附加萘乙酸（NAA) 2. Omg/L，糖30g/L，琼脂4. Og/L，香蕉25g，椰子汁25g，茶多酚15g， PH值为5.6 ;
[0023] 2)继代培养：将步骤1)获得的大量的檀香石斛小芽置于1/2MS为基本培养基附 加6-苄氨基嘌呤（6-BA)0. 5mg/L，吲哚乙酸（IAA)2. Omg/L，糖30g/L，琼脂4. Og/L，香蕉 25g，椰子汁25g，茶多酚15g，，PH值为5. 6的培养基中培养，培养温度为29°C，培养时间为 14小时/天，光照强度为21001UX，44天左右可获得2cm左右高度的整齐的檀香石斛组培分 化苗；
[0024] 3)檀香石斛分化苗生根培养，将步骤2)获得的大量的檀香石斛分化苗移栽到生 根培养基，培养温度为29°C，，光照强度25001UX，光照时间为14小时/天的条件下培养40 天后，把组培苗移到自然光下培养，50天后可得到具有4条根的檀香石斛生根组培苗，其中 生根培养基为：1/2MS为基本培养基4 %，茶多酚3. 5 %，香蕉5 %，椰子汁5 %，生长素IBA 0? 1%，糖 2%，活性炭 0.2%，，PH 值为 5.6 ;
[0025] 4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的檀香石斛生根组培苗根部的培养基，晾干 水汽，将檀香石斛生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待2个月后檀香石 斛小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强 度为8001ux，湿度控制在60%，温度控制在20°C。
[0026] 实施例2
[0027] 1)诱导培养：在檀香石斛种子发黄未开裂之前，取硕果，在流水下清洗干净，利用 80%乙醇浸泡40秒,浓度为1. 2%的升萊消毒15分钟,无菌水清洗6遍,在灭菌盘内利用手 术刀切开硕果，取出种子，播种于适当的培养基中，培养温度为30°C，光照强度为22001UX， 光照时间为16小时/天，培养20天后可见檀香石斛小芽发出，其中培养基为：1/2MS为基 本培养基附加萘乙酸（NAA) I. Smg/L，糖28g/L，琼脂3. 8g/L，椰子汁25g，茶多酚15g，PH值 为 5.6 ;
[0028] 2)继代培养：将步骤1)获得的大量的檀香石斛小芽置于1/2MS为基本培养基附 加6-苄氨基嘌呤（6-BA) 4. Omg/L，吲哚乙酸（IAA) 2. Omg/L，糖30g/L，琼脂4. Og/L，椰子汁 25g，茶多酚15g，PH值为5. 6的培养基中培养，培养温度为30°C，培养时间为16小时/天， 光照强度为22001ux，70天左右可获得2cm左右高度的整齐的檀香石斛组培分化苗；
[0029] 3)檀香石斛分化苗生根培养，将步骤2)获得的大量的檀香石斛分化苗移栽到生 根培养基，培养温度为30°C，，光照强度25001u X，光照时间为16小时/天的条件下培养35 天后，把组培苗移到自然光下培养，65天后可得到具有4条根的檀香石斛生根组培苗，其 中生根培养基为：1/2MS为基本培养基附加椰子汁20%，生长素IBA 2.0%，糖2%，活性炭 0.2%，茶多酚15g，PH值为5.6 ;
[0030] 4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的檀香石斛生根组培苗根部的培养基，晾干 水汽，将檀香石斛生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待2个月后檀香石 斛小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强 度为8001ux，湿度控制在60%，温度控制在20°C。
[0031] 实施例3
[0032] 1)诱导培养：在檀香石斛种子发黄未开裂之前，取硕果，在流水下清洗干净，利用 75%乙醇浸泡35秒,浓度为1. 2%的升萊消毒15分钟,无菌水清洗6遍,在灭菌盘内利用手 术刀切开硕果，取出种子，播种于适当的培养基中，培养温度为32°C，光照强度为23001UX， 光照时间为16小时/天，培养20天后可见檀香石斛小芽发出，其中培养基为：1/2MS为基 本培养基附加萘乙酸（NAA) I. 5mg/L，，糖28g/L，琼脂3. 8g/L，香蕉25g，茶多酚15g，PH值为 5. 6 ；
[0033] 2)继代培养：将步骤1)获得的大量的檀香石斛小芽置于1/2MS为基本培养基附 加6-苄氨基嘌呤（6-BA)4. Omg/L，吲哚乙酸（IAA)2. Omg/L，糖30g/L，琼脂4. Og/L，，香蕉 25g，茶多酚15g，PH值为5. 6的培养基中培养，培养温度为30°C，培养时间为16小时/天， 光照强度为22001UX，55天左右可获得2cm左右高度的整齐的檀香石斛组培分化苗；
[0034] 3)檀香石斛分化苗生根培养，将步骤2)获得的大量的檀香石斛分化苗移栽到生 根培养基，培养温度为30°C，，光照强度25001u X，光照时间为16小时/天的条件下培养35 天后，把组培苗移到自然光下培养，60天后可得到具有4条根的檀香石斛生根组培苗，其中 生根培养基为：1/2MS为基本培养基4 %，香蕉20 %，茶多酚12 %，生长素IBA2. 0 %，糖2 %， 活性炭0.2%，，PH值为5.6 ;
[0035] 4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的檀香石斛生根组培苗根部的培养基，晾干 水汽，将檀香石斛生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待2个月后檀香石 斛小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强 度为8001ux，湿度控制在60%，温度控制在20°C。
[0036] 实施例4
[0037] 1)诱导培养：在檀香石斛种子发黄未开裂之前，取硕果，在流水下清洗干净，利用 75%乙醇浸泡35秒,浓度为1. 2%的升萊消毒15分钟,无菌水清洗6遍,在灭菌盘内利用手 术刀切开硕果，取出种子，播种于适当的培养基中，培养温度为32°C，光照强度为23001UX， 光照时间为16小时/天，培养20天后可见檀香石斛小芽发出，其中培养基为：1/2MS为基 本培养基附加萘乙酸（NAA) I. 5mg/L，，糖28g/L，琼脂3. 8g/L，香蕉25g，椰子汁25g，PH值为 5. 6 ；
[0038]2)继代培养：将步骤1)获得的大量的檀香石斛小芽置于1/2MS为基本培养基附 加6-苄氨基嘌呤（6-BA)4. Omg/L，吲哚乙酸（IAA)2. Omg/L，糖30g/L，琼脂4. Og/L，，香蕉 25g，椰子汁25g，PH值为5. 6的培养基中培养，培养温度为30°C，培养时间为16小时/天， 光照强度为22001UX，60天左右可获得2cm左右高度的整齐的檀香石斛组培分化苗；
[0039] 3)檀香石斛分化苗生根培养，将步骤2)获得的大量的檀香石斛分化苗移栽到生 根培养基，培养温度为30°C，，光照强度25001u X，光照时间为16小时/天的条件下培养35 天后，把组培苗移到自然光下培养，45天后可得到具有4条根的檀香石斛生根组培苗，其 中生根培养基为：1/2MS为基本培养基4%，，香蕉20 %，椰子汁20 %，生长素IBA2. 0 %，糖 2%，活性炭0.2%，，PH值为5.6 ;
[0040] 4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的檀香石斛生根组培苗根部的培养基，晾干 水汽，将檀香石斛生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待2个月后檀香石 斛小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强 度为8001ux，湿度控制在60%，温度控制在20°C。
[0041] 实施例5
[0042] 1)诱导培养：在檀香石斛种子发黄未开裂之前，取硕果，在流水下清洗干净，利用 75%乙醇浸泡35秒,浓度为1. 2%的升萊消毒15分钟,无菌水清洗6遍,在灭菌盘内利用手 术刀切开硕果，取出种子，播种于适当的培养基中，培养温度为32°C，光照强度为23001UX， 光照时间为16小时/天，培养30天后可见檀香石斛小芽发出，其中培养基为：1/2MS为基 本培养基附加萘乙酸（NAA) I. 5mg/L，，糖28g/L，琼脂3. 8g/L，PH值为5. 6 ;
[0043] 2)继代培养：将步骤1)获得的大量的檀香石斛小芽置于1/2MS为基本培养基附 加6-苄氨基嘌呤（6-BA) 4. Omg/L，吲哚乙酸（IAA) 2. Omg/L，糖30g/L，琼脂4. Og/L，PH值为 5.6的培养基中培养，培养温度为30°C，培养时间为16小时/天，光照强度为22001ux，70 天左右可获得2cm左右高度的整齐的檀香石斛组培分化苗；
[0044] 3)檀香石斛分化苗生根培养，将步骤2)获得的大量的檀香石斛分化苗移栽到生 根培养基，培养温度为30°C，，光照强度25001UX，光照时间为16小时/天的条件下培养45 天后，把组培苗移到自然光下培养，65天后可得到具有4条根的檀香石斛生根组培苗，其中 生根培养基为：1/2MS为基本培养基4 %，生长素IBA 2. 0 %，糖2 %，活性炭0. 2 %，，PH值为 5. 6 ；
[0045] 4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的檀香石斛生根组培苗根部的培养基，晾干 水汽，将檀香石斛生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待2个月后檀香石 斛小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强 度为8001ux，湿度控制在60%，温度控制在20°C。
[0046] 实施例6
[0047] 1)诱导培养：取檀香石斛嫩芽于75%乙醇浸泡30秒，浓度为1 %的升汞消毒15分 钟，无菌水清洗5遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于适当的培养基中， 培养温度为29°C，光照强度为21001UX，光照时间为14小时/天，培养40天后可见檀香石 斛小芽发出，其中培养基为：1/2MS为基本培养基附加萘乙酸（隱4)2.〇11^/1，，糖3(^/1，琼 脂4. Og/L，香蕉25g，椰子汁25g，茶多酚15g，PH值为5. 6;
[0048]2)继代培养：将步骤1)获得的大量的檀香石斛小芽置于1/2MS为基本培养基附 加6-苄氨基嘌呤（6-BA)0. 5mg/L，吲哚乙酸（IAA)2. Omg/L，糖30g/L，琼脂4. Og/L，香蕉 25g，椰子汁25g，茶多酚15g，PH值为5. 6的培养基中培养，培养温度为29°C，培养时间为14 小时/天，光照强度为21001ux，70天左右可获得檀香石斛组培分化苗；
[0049] 3)檀香石斛分化苗生根培养，将步骤2)获得的大量的檀香石斛分化苗移栽到生 根培养基，培养温度为29°C，光照强度25001UX，光照时间为14小时/天的条件下培养60 天后，把组培苗移到自然光下培养，80天后可得到具有4条根的檀香石斛生根组培苗，其中 生根培养基为：1/2MS为基本培养基4 %，木屑20 %，茶多酚3. 5 %，香蕉5 %，椰子汁10 %， 生长素IBA 0? 1%，糖2%，活性炭0.2%，，PH值为5.6 ;
[0050] 4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的檀香石斛生根组培苗根部的培养基，晾干 水汽，将檀香石斛生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待3个月后檀香石 斛小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强 度为8001ux，湿度控制在60%，温度控制在20°C。
[0051] 实施例7
[0052] 1)诱导培养：取檀香石斛嫩芽于75%乙醇浸泡30秒，浓度为1 %的升汞消毒15分 钟，无菌水清洗5遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于适当的培养基中， 培养温度为29°C，光照强度为21001UX，光照时间为14小时/天，培养40天后可见檀香石 斛小芽发出，其中培养基为：1/2MS为基本培养基附加萘乙酸（隱4)2.〇11^/1，糖3(^/1，琼脂 4. Og/L，香蕉25g，椰子汁25g，茶多酚15g，PH值为5. 6;
[0053] 2)继代培养：将步骤1)获得的大量的檀香石斛小芽置于1/2MS为基本培养基附 加6-苄氨基嘌呤（6-BA)0. 5mg/L，吲哚乙酸（IAA)2. Omg/L，糖30g/L，琼脂4. Og/L，香蕉 25g，椰子汁25g，茶多酚15g，，PH值为5. 6的培养基中培养，培养温度为29°C，培养时间为 14小时/天，光照强度为21001UX，60天完成一次继代培养，重复继代培养步骤十四次，继代 培养到十五次后，将得到的檀香石斛分化苗进行生根培养；
[0054] 3)檀香石斛分化苗生根培养，将步骤2)获得的大量的檀香石斛分化苗移栽到生 根培养基，培养温度为29°C，光照强度25001UX，光照时间为14小时/天的条件下培养40 天后，把组培苗移到自然光下培养，40天后可得到具有4条根的檀香石斛生根组培苗，其中 生根培养基为：1/2MS为基本培养基4 %，椰子汁10 %，茶多酚3. 5 %，香蕉5 %生长素IBA 0? 1%，糖 2%，活性炭 0.2%，PH 值为 5.6 ;
[0055] 4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的檀香石斛生根组培苗根部的培养基，晾干 水汽，将檀香石斛生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待2个月后檀香石 斛小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强 度为8001ux，湿度控制在60%，温度控制在20°C。
[0056] 实施例1-实施例7的组培方法试验数据对比 [00571
【权利要求】
1. 一种促进檀香石斛快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 诱导发芽：在檀香石斛种子发黄未开裂之前，取硕果，在流水下清洗干净，置于浓度 为75-80%的乙醇溶液浸泡30-40秒，然后置于浓度为1-1. 2%的升汞溶液中消毒15-20 分钟，无菌水清洗5-6遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于诱导培养 基中，其中诱导培养基是按照以下的原料比例制备而成1/2MS为基本培养基附加萘乙酸 (NAA) 0? 2-2. Omg/L，糖 25-30g/L，琼脂 3-6g/L，茶多酚 5-30. Omg/L，香蕉 2 % -20 %，椰子汁 5% -30%，PH值为5. 6,培养温度为29-32°C，光照强度为2100-25001ux，光照时间为14-16 小时/天，培养16-20天后得到檀香石斛小芽； 2) 继代培养：将步骤1)获得的大量的檀香石斛小芽置于继代培养基中，其中继 代培养基是按照以下的原料比例制备而成，1/2MS基本培养基附加（6-苄氨基嘌呤 (6-BA)0. 5-4. Omg/L，吲哚乙酸（IAA)O. 5-2. Omg/L，糖 25-30g/L，琼脂 3-6g/L，茶多酚 5-30.011^/1，香蕉2%-20%，椰子汁5%-30%，？11值为5.6，培养温度为29-321：，培养时 间为14-16小时/天，光照强度为2100-25001ux，62-70天左右可获得2cm左右高度的檀香 石斛组培分化苗； 3) 檀香石斛组培分化苗的生根培养：将步骤2)中获得的大量的檀香石斛分化苗移栽 到生根培养基，其中生根培养基是按照以下的原料比例制备而成，1/2MS为基本培养基附 加香蕉 5 % -20 %，IBA 0? 1-2. 0,糖 2-10 %，茶多酚 5-30. 0mg/L，香蕉 2 % -20 %，椰子汁 5% -30%，活性炭0. 2-0. 4%，PH值5. 6培养温度为28°C，光照强度2100-25001ux，光照时 间为14-16小时/天的条件下培养62-70天后，把组培苗移到自然光下培养，25-28天后可 得到具有3-4条根的檀香石斛生根组培苗； 4) 炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的檀香石斛生根组培苗根部的培养基，晾干水 汽，将檀香石斛生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待1-2个月后檀香石 斛小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强 度为800-100011?，湿度控制在50-60%，温度控制在20-251：。
2. 根据权利要求1所述的促进檀香石斛快速繁殖的方法，其特征在于，步骤1)中的诱 导培养基为：1/2MS为基本培养基附加萘乙酸（NAA) 1-2. 0mg/L，糖30g/L，琼脂4g/L，茶多酚 25mg/L，香蕉2%，椰子汁5%。
3. 根据权利要求1所述的促进檀香石斛快速繁殖的方法，其特征在于，步骤2)中 继代培养基为：1/2MS基本培养基附加（6-苄氨基嘌呤（6-BA)1.5-4.0mg/L，吲哚乙酸 (IAA) 1. 5-2. 0mg/L，糖 30g/L，琼脂 3-6g/L，茶多酚 15-30. 0mg/L，香蕉 10-20 %，椰子汁 25-30%。
4. 根据权利要求1所述的促进檀香石斛快速繁殖的方法，其特征在于，步骤3)中的 生根培养基为：1/2MS为基本培养基附加香蕉15% -20%，IBA1. 0-2.0,糖2-5%，茶多酚 15mg/L，香蕉4 %，椰子汁15 %，活性炭0? 2-0. 4 %。
【文档编号】A01H4/00GK104351056SQ201410676585
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年11月21日 优先权日:2014年11月21日
【发明者】霍丽妮, 苏钛, 陈睿, 李培源, 苏炜, 黄娟娟 申请人:广西中医药大学