红马银花的组培繁殖方法
【专利摘要】提供红马银花的组培繁殖方法。包括选取红马银花的种子为外植体，经种子萌发、丛生芽诱导、壮苗并生根培养和试管苗移栽步骤。培养的温度为20-23℃，湿度为30-45％，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX。使用该方法可达到一个无菌苗诱导4-5或者更多的丛生芽，生根率达68％，移栽成活率达89％以上，极大地提高了红马银花的繁殖能力，为红马银花的保存和规模化生产提供了技术支撑。
【专利说明】红马银花的组培繁殖方法
【技术领域】
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[0001]本发明属于植物生物技术中植物组织培养方法，具体地说，涉及杜鹃花红马银花的组织培养快速繁殖方法。
【背景技术】
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[0002]红马银花Rhododendron vialii 属于杜花科(Erieaceae)杜花属(Rhododendron)马银花亚属，常绿小灌木。红马银花为杜鹃花中的早花种类，开花期为2_3月份，花鲜红色，新叶为红色，具有较高的观赏价值。分布范围狭窄，居群数目有限，由于植被不断受到破坏，生存受到威胁，已被IUCN和《The Red List of Rhododendrons)) (2011版)列为易危VU (Vulnerable species)杜醒花种类，亟需扩繁、保存和可持续利用。迄今，红马银花没有相关生物技术方法繁殖的研宄与报道，为了使红马银花优良的特性能够保存和可持续利用，需要研宄该种的组织培养，并形成一套专门的组织培养繁殖技术体系。
【发明内容】
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[0003]本发明的目的是提供红马银花的组织培养方法，使之在种子成苗和扦插困难的的情况下能够繁衍，使该品种的优良性状的保存能够得到保障，同时缩短离体培养时间，提高生根率和幼苗移栽成活率，为易危杜鹃花红马银花的可持续利用奠定组培种苗繁育基础。
[0004]为了实现本发明的目的，本发明提供了如下的技术方案:
[0005]红马银花的组培繁殖方法，包括选择外植体、消毒、丛生芽诱导、壮苗并生根培养、试管苗移栽步骤，选择红马银花的种子为外植体，进行种子萌发，种子萌发培养基为改良 Anderson+0.lmg/L NAA ;丛芽诱导培养基为改良 Anderson+1.2mg/L ZT+0.lmg/L NAA,pH5.2-5.4 ;壮苗培养基为改良Anderson+0.5mg/L 2-1P+0.lmg/L NAA ;生根培养基为改良Anderson+0.lmg/L ZT+2mg/L NAA+0.5g/L AC，其中所述的改良 Anderson 培养基为 NH4NO3减半。
[0006]根据所述的组培繁殖方法，其中所述外植体消毒先用5%洗衣粉水浸泡清洗lOmin，再用无菌水冲洗至无泡沫，然后采用75%的酒精消毒30s，无菌水冲洗3遍后再用0.1 %升汞溶液进行表面消毒5min，不断震荡后用无菌水清洗3_5遍。
[0007]根据所述的组培繁殖方法，其中所述丛生芽诱导和壮苗及生根培养的温度为20-23 °C，湿度 30-45%。
[0008]根据所述的组培繁殖方法，其中所述丛生芽诱导和壮苗及生根培养的光照条件为自然光 2000-2500LUX+ 人工辅助光 1500-2000LUX。
[0009]根据所述的组培繁殖方法，其中所述试管苗移栽是生根组培苗在培养瓶内培养60天以后，炼苗7天，再移栽于温室大棚。
[0010]根据所述的组培繁殖方法，其中试管苗移栽基质为I份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.2~5.4ο
[0011]根据所述的组培繁殖方法，其中试管苗移栽在早上8-11点，温度为18-25°c下进行。
[0012]本发明的红马银花的组培繁殖方法可具体描述为:选取红马银花种子为外植体，用5%的洗衣粉水进行浸泡10分钟后反复冲洗3-5遍直至无泡沫，然后用75%酒精消毒30s，后用0.1 %升汞溶液进行消毒5min，不断震荡后用无菌水清洗3_5遍；将种子置于消毒后的滤纸上吸干水分，接种至诱导萌发培养基改良Anderson+0.lmg/1 NAA, pH5.4，温度20-23°C，湿度30-45%，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养，无菌苗长到l-2cm后转接入丛芽诱导培养基改良Anderson+1.2mg/L ZT+0.lmg/L NAA中进行增殖，待丛生芽长到2_3cm转入壮苗培养基改良Anderson+0.5mg/L 2-1P+0.lmg/LNAA进行壮苗，完成壮苗周期后将苗转入生根培养基，生根培养基为改良Anderson+0.lmg/LZT+2mg/L NAA+0.5g/L AC，50天生根培养后进行组培苗炼苗7天后，移栽于基质为I份珍珠岩+1份腐殖土，PH为5.4，湿度50-60%的大棚内，每天早晚各喷水一次；其中所述的改良Anderson培养基为NH4Nty咸半。
[0013]本发明技术方案的提出是基于下述的研宄基础:
[0014]红马银花为云南野生杜鹃花中的早花种类，开花期为2-3月份，花鲜红色，新叶为红色，具有较高的观赏价值。由于植被不断受到破坏，生存受到威胁，原有生境破坏严重。红马银花的扦插生根难度较大，且种子非常细小，千粒重仅为0.024g，种苗成活率非常低，为了解决其大量繁殖、保存和可持续利用，故此发明红马银花组织培养的技术。组培扩繁不仅可以在短时间内获得大量的再生植株，而且移栽生长良好且能保持其优良性状不变。试管苗移栽的温度控制在18-23?，最好在早上8-11点进行移栽，组培苗虽然在生长过程中很少受病虫害的浸染，但为了预防病虫害的发生，在生长季内喷施多菌灵2-3次为宜。夏季要注意通风。
[0015]本发明红马银花的组培繁殖方法的优点在于:
[0016]1、建立了有效的红马银花组培快繁方法，解决了其种苗成活率低，扦插生根困难，繁殖受阻的状况。
[0017]2、通过组培快繁得到的幼苗，成苗容易，一致性强，生长健壮，叶色浓绿，很少病虫害，易于管理。
[0018]3、利用组培快繁方法繁殖的红马银花不受季节限制，任何时候都可以进行组培。
[0019]4、利用组培快繁的方法繁殖的红马银花可以保持物种特性，使该种能够延续和可持续利用。
[0020]5、通过本发明的组培快繁方法繁育的红马银花在I个月内增殖系数为4-5，生根率为68%，移栽成活率达89%以上，极大地提高了红马银花的繁殖系数，为该物种的保存和可持续利用提供了非常有效的繁殖方法。
【具体实施方式】
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[0021]下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。
[0022]实施例1:
[0023]品种来源:
[0024]红马银花(R.vialii)属于杜 |$ 花科(Erieaceae)杜 |$ 花属(RhododendronL.)马银花亚属(Subgen.Azaleastrum Planch, ex K.Koch)马银花组(Sect.Azaleastrum(Planch.)Maxim.)，是一种常绿灌木树种。红马银花为杜醒花中的早花种类，开花期为2-3月份，花鲜红色，新叶为红色，具有较高的观赏价值。分布范围狭窄，居群数目有限，由于植被不断受到破坏，生存受到威胁，已被IUCN和《The Red List ofRhododendrons)) (2011 版)列为易危 VU (Vulnerable species)杜花种类。
[0025]选取红马银花Rhododendron vialii (Ericaceae)的种子(采自于云南省玉溪市洛河乡，经玮度24° IV N, 102° 20' E，2012年12月)为外植体，用5 %的洗衣粉水浸泡和冲洗lOmin，后用70%的酒精消毒30s，无菌水冲洗3遍后，用0.1 %升汞溶液进行消毒5min，不断震荡后用无菌水清洗3遍，用无菌滤纸吸干表面水分后接种至萌发培养基改良Anderson+0.lmg/1 NAA，pH5.2，温度 20°C，湿度 30%，光照条件为自然光 2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养，长出无菌苗后转接入Anderson+1.2mg/L ZT+0.lmg/LNAA中进行增殖，再将长到2cm的幼苗转到改良Anderson+0.5mg/L 2-1P+0.lmg/L NAA中进行壮苗，生根为改良 Anderson+0.lmg/L ZT+2mg/l NAA+0.5g/L AC，壮苗 3-4 次，周期 30 天；组培苗炼苗7天后，在早上10点，温度为18°C下进行移栽，移栽于基质为I份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.2，湿度60%的大棚内，每天早晚各喷水一次。
[0026]所述的改良Anderson培养基为NH4N03减半。
[0027]通过上述的组培快繁方法繁育的红马银花在I个月内增殖系数为4，生根率为65%，移栽成活率为86%，极大地提高了迷人杜鹃的繁殖系数，为该物种的保存和可持续利用提供了非常有效的繁殖方法。
[0028]实施例2:
[0029]选取红马银花Rhododendron vialii (Ericaceae)的种子(采自于云南省玉溪市洛河乡，经玮度24° IV N, 102° 20' E，2012年12月)为外植体，用5 %的洗衣粉水浸泡和冲洗lOmin，后用70%的酒精消毒30s，无菌水冲洗5遍后，用0.1 %升汞溶液进行消毒5min，不断震荡后用无菌水清洗5遍，用无菌滤纸吸干表面水分后接种至萌发培养基改良Anderson+0.lmg/1 NAA，pH5.4，温度 23°C，湿度 30%，光照条件为自然光 2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养，长出无菌苗后转接入Anderson+1.2mg/L ZT+0.lmg/L NAA中进行增殖，再将长到3cm的幼苗转到改良Anderson+0.5mg/L 2-1P+0.lmg/L NAA中进行壮苗，生根为改良 Anderson+0.lmg/L ZT+2mg/l NAA+0.5g/L AC，壮苗 3-4 次，周期 30 天；组培苗炼苗7天后，在早上11点，温度为25°C下进行移栽，移栽于基质为I份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.4，湿度60%的大棚内，每天早晚各喷水一次。
[0030]所述的改良Anderson培养基为NH4Nty咸半。
[0031]通过上述的组培快繁方法繁育的红马银花在I个月内增殖系数为5，生根率为71%,移栽成活率为92%，极大地提高了迷人杜鹃的繁殖系数，为该物种的保存和可持续利用提供了非常有效的繁殖方法。
【权利要求】
1.红马银花的组培繁殖方法，包括选择外植体、消毒、丛生芽诱导、壮苗并生根培养、试管苗移栽步骤，其特征在于选择红马银花的种子为外植体，进行种子萌发，种子萌发培养基为改良 Anderson+0.lmg/L NAA ;丛芽诱导培养基为改良 Anderson+1.2mg/L ZT+0.lmg/L NAA, pH5.2-5.4 ;壮苗培养基为改良 Anderson+0.5mg/L 2-1P+0.lmg/L NAA ;生根培养基为改良 Anderson+0.lmg/L ZT+2mg/L NAA+0.5g/L AC，其中所述的改良 Anderson 培养基为NH4NCV咸半。
2.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述外植体消毒先用5%洗衣粉水浸泡清洗lOmin，再用无菌水冲洗至无泡沫，然后采用75 %的酒精消毒30s，无菌水冲洗3遍后再用0.1 %升汞溶液进行表面消毒5min，不断震荡后用无菌水清洗3_5遍。
3.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述丛生芽诱导和壮苗及生根培养的温度为20-23 °C，湿度30-45%。
4.根据权利I所述的组培繁殖方法，其特征在于所述丛生芽诱导和壮苗及生根培养的光照条件为自然光2000 - 2500LUX+人工辅助光1500 - 2000LUX。
5.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述试管苗移栽是生根组培苗在培养瓶内培养60天以后，炼苗7天，再移栽于温室大棚。
6.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述试管苗移栽基质为I份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.2-5.4。
7.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述试管苗移栽在早上8-11点，温度为18-25 °C下进行。
8.根据权利要求书1-7中的任意一项所述的组培繁殖方法，其特征在于选取红马银花种子为外植体，用5%的洗衣粉水进行浸泡10分钟后反复冲洗3-5遍直至无泡沫，然后用75%酒精消毒30s，后用0.1 %升汞溶液进行消毒5min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍；将种子置于消毒后的滤纸上吸干水分，接种至诱导萌发培养基改良Anderson+0.lmg/1NAA, pH5.4，温度20-23°C，湿度30-45 %，光照条件为自然光2000 - 2500LUX+人工辅助光.1500 -2000LUX下培养，无菌苗长到l_2cm后转接入丛芽诱导培养基改良Anderson+1.2mg/LZT+0.lmg/L NAA中进行增殖，待丛生芽长到2_3cm转入壮苗培养基改良Anderson+0.5mg/L 2-1P+0.lmg/L NAA进行壮苗，完成壮苗周期后将苗转入生根培养基，生根培养基为改良Anderson+0.lmg/L ZT+2mg/L NAA+0.5g/L AC，50天生根培养后进行组培苗炼苗7天后，移栽于基质为I份珍珠岩+1份腐殖土，PH为5.4，湿度50-60%的大棚内，每天早晚各喷水一次；其中所述的改良Anderson培养基为NH4Nty咸半。
【文档编号】A01H4/00GK104488704SQ201410706386
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年11月28日 优先权日:2014年11月28日
【发明者】张敬丽, 李枝林, 张巧玲, 吴红芝, 王有国, 郑硕理, 刘巧 申请人:云南农业大学