一种二歧银莲花的组培繁殖方法
【专利摘要】本发明公开了一种二歧银莲花的组培繁殖方法，主要通过对初代培养、增殖培养、生根培养以及炼苗移栽的步骤，达到了增殖速度快、遗传性状稳定、繁殖系数高、试管苗生长旺盛的优良效果，二歧银莲花的愈伤组织的萌动率达到了99％，增殖倍数达到了8.7倍，生根率达到了100％，最终的成活率达到了97％。
【专利说明】一种二歧银莲花的组培繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及的是一种适用于二歧银莲花的组培繁殖方法。
【背景技术】
[0002]二歧银莲花(学名:Anemone dichotoma L.)是草本植物,植株高35-60厘米。基生叶1，总苞苞片2，扇形，三深裂近基部。花单生于花序分枝处；萼片5，白色或带粉红色，倒卵形或椭圆形，心皮约30，子房长圆形，有向外弯的短花柱。瘦果扁平，卵形或椭圆形，有边缘和稍弯的宿存花柱。6月开花。生丘陵或山坡湿草地或林中。分布于亚洲北部和欧洲、中国吉林和黑龙江。
[0003]目前，利用组培技术繁育二歧银莲花的技术尚未有人研究，组织培养体系尚未建立，优良品种的推广普及尚未完成，苗木供求矛盾日益加剧，严重影响了二歧银莲花的园林应用和推广。
【发明内容】
[0004]本发明针对现有的不足提供了一种二歧银莲花的组培繁殖方法。
[0005]本发明通过以下方法实现上述目的。
[0006]一种二歧银莲花的组培繁殖方法，其特征在于该方法包括下列步骤:
[0007](1)外植体的选择:于4?7月采取生长健壮的二歧银莲花幼嫩茎段作外植体；
[0008](2)材料处理方法:先用软毛刷将二歧银莲花表面的灰尘轻轻刷去，用流水冲洗3分钟后用紫外灯照射20min，转入超净工作台，在超净工作台上先用70%的乙醇浸泡10秒，然后再转入滴加了 2?3滴土温80的0.1%的升汞溶液中浸泡2-3min，再用无菌水冲洗2?3次,最后在无菌条件下分割材料,?段切割成0.6?0.8cm长；
[0009](3)初代培养:在无菌的条件下将步骤⑵得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了 2.2mg/L的2，4_D、0.8mg/L的NAA、0.5mg/L的GA，PH 6.6，培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为2300_25001ux，待新芽长至2.0cm左右时，即开始下一个阶段；
[0010](4)增殖培养:将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上，该培养基是在 1/2MS 常规培养基中添加了 2.2mg/L 的 2，4_D、0.8mg/L 的 ΝΑΑ、0.5mg/L 的 GA, PH 6.6，培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为2300-25001UX，待新芽长至2.0cm时，即开始下一个阶段；
[0011](5)生根培养:将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了 2.4mg/L的IAA、0.5mg/L的NAA, 1.5mg/L的ΚΤ,ΡΗ 6.6，培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为19001UX，待新苗长至2.0cm时，即开始下一个阶段；
[0012](6)炼苗移栽:先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗7d，然后解开封口膜，炼苗3d，炼苗期间适当遮光，使光照强度为自然光的45%，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比砻糠灰:珍珠岩:沙子:蛭石=2: 2: 1:1的混合基质中，温度控制在2:3°C，前5d湿度控制在80%左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。
[0013]有益效果:本发明对二歧银莲花采用组织培养技术，以嫩茎段为外植体，经外植体灭菌、初代培养、增殖培养、生根培养和炼苗移栽步骤，研究培养过程中试管苗的营养需求、激素对苗木生长分化的调控，解决二歧银莲花的微体快速增殖、诱导生根的重要技术问题，建立了完善的二歧银莲花组织培养体系，达到了高效诱导外植体分化增殖和高质量保证幼苗成活的目的，并且保存了母体的全部优良性状，遗传性状稳定。这种方法可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产。
【具体实施方式】
[0014]下面结合实施例对本发明作进一步的说明，下述实施例仅用于说明本发明，对本发明并没有限制。
[0015]二歧银莲花的组培繁殖方法，该方法包括下列步骤:
[0016](1)外植体的选择:于4?7月采取生长健壮的二歧银莲花幼嫩茎段作外植体；
[0017](2)材料处理方法:先用软毛刷将二歧银莲花表面的灰尘轻轻刷去，用流水冲洗3分钟后用紫外灯照射20min，转入超净工作台，在超净工作台上先用70%的乙醇浸泡10秒，然后再转入滴加了 2滴土温80的0.1%的升汞溶液中浸泡2min，再用无菌水冲洗2次，最后在无菌条件下分割材料，莖段切割成0.7cm长；
[0018](3)初代培养:在无菌的条件下将步骤⑵得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了 2.2mg/L的2，4_D、0.8mg/L的NAA、0.5mg/L的GA，PH 6.6，培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为24001ux，待新芽长至2.0cm左右时，即开始下一个阶段；
[0019](4)增殖培养:将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上，该培养基是在 1/2MS 常规培养基中添加了 2.2mg/L 的 2，4_D、0.8mg/L 的 ΝΑΑ、0.5mg/L 的 GA, PH 6.6，培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为24001UX，待新芽长至2.0cm时，即开始下一个阶段；
[0020](5)生根培养:将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了 2.4mg/L的IAA、0.5mg/L的NAA, 1.5mg/L的ΚΤ,ΡΗ 6.6，培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为19001UX，待新苗长至2.0cm时，即开始下一个阶段；
[0021](6)炼苗移栽:先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗7d，然后解开封口膜，炼苗3d，炼苗期间适当遮光，使光照强度为自然光的45%，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比砻糠灰:珍珠岩:沙子:蛭石=2:2:1:1的混合基质中，温度控制在2:3°C，前5d湿度控制在80%左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。
[0022]经过上述步骤的培养，二歧银莲花的愈伤组织的萌动率达到了 99%，增殖倍数达到了 8.7倍，生根率达到了 100%，最终的成活率达到了 97%。
【权利要求】
1.一种二歧银莲花的组培繁殖方法，其特征在于该方法包括下列步骤: (1)外植体的选择:于4?7月采取生长健壮的二歧银莲花幼嫩茎段作外植体； (2)材料处理方法:先用软毛刷将二歧银莲花表面的灰尘轻轻刷去，用流水冲洗3分钟后用紫外灯照射20min，转入超净工作台，在超净工作台上先用70%的乙醇浸泡10秒，然后再转入滴加了 2?3滴土温80的0.1 %的升汞溶液中浸泡2-3min，再用无菌水冲洗2?3次，最后在无菌条件下分割材料，莖段切割成0.6?0.8cm长； (3)初代培养:在无菌的条件下将步骤(2)得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了 2.2mg/L的2，4_D、0.8mg/L的NAA、0.5mg/L的GA，PH.6.6，培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为2300-25001ux，待新芽长至2.0cm左右时，即开始下一个阶段； (4)增殖培养:将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上，该培养基是在.1/2MS 常规培养基中添加了 2.2mg/L 的 2，4_D、0.8mg/L 的 NAA,0.5mg/L 的 GA，PH 6.6，培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为2300-25001UX，待新芽长至2.0cm时，即开始下一个阶段； (5)生根培养:将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了 2.4mg/L的IAA、0.5mg/L的NAA, 1.5mg/L的KT, PH 6.6，培养温度为.24V，光照周期13h/d，光强度为19001UX，待新苗长至2.0cm时，即开始下一个阶段； (6)炼苗移栽:先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗7d，然后解开封口膜，炼苗3d，炼苗期间适当遮光，使光照强度为自然光的45%，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比砻糠灰:珍珠岩:沙子:蛭石=2: 2: 1:1的混合基质中，温度控制在23°C，前5d湿度控制在80%左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。
【文档编号】A01H4/00GK104396748SQ201410657608
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月18日 优先权日:2014年11月18日
【发明者】罗翼 申请人:罗翼