一种金花茶的组培快繁方法
【专利摘要】本发明公开一种金花茶的组培快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）外植体的消毒；（2）愈伤组织培养；（3）愈伤组织分化芽；（4）芽生根。本发明提供一种金花茶的组培快繁方法，能降低繁殖的成本，生长周期短、繁殖率高、方便管理、利于工业化生产和自动化监控大大的节约了人力、物力和田间作物的土地。
【专利说明】一种金花茶的组培快繁方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于组织培养生产【技术领域】，本发明涉及一种金花茶的组培快繁方法。
【背景技术】
[0002] 金花茶属于山茶科、山茶属，与茶、山茶、南山茶、油茶、茶梅等为孪生姐妹。金花茶 的花金黄色，耀眼夺目，仿佛涂着一层蜡，晶莹而油润，似有半透明之感。金花茶单生于叶 腋，花开时，有杯状的、壶状的或碗状的，娇艳多姿，秀丽雅致。以前，人们没有见到过花色金 黄的种类。I960年，中国科学工作者首次在广西南宁一带发现了一种金黄色的山茶花，被命 名为金花茶。国外称之为神奇的东方魔茶，被誉为"植物界大熊猫"、"茶族皇后"。
[0003] 金花茶是一种古老的植物，极为罕见，分布极其狭窄，全世界90%的野生金花茶仅 分布于中国广西防城港市十万大山的兰山支脉一带，生长于海拔700米以下，以海拔200? 500米之间的范围较常见，垂直分布的下限为海拔20米左右。如金花茶在防城县大王江附 近的滨海丘陵台地仍有分布。垂直分布的上限可达海拔890米，如宁明县那陶大山仍可见 到个别小瓣金花茶，数量极少，是世界上稀有的珍贵植物。金花茶喜温暖湿润气候，喜欢排 水良好的酸性土壤，苗期喜荫蔽，进入花期后，颇喜透射阳光。对土壤要求不严，微酸性至中 性均土壤中可生长。耐瘠薄，也喜肥，耐涝力强。
[0004] 据中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、广西壮族自治区疾病预防控制中 心、广西壮族自治区卫生监督检验中心、北京疾病预防控制中心中心营养与食品安全所、广 西壮族自治区分析测试研究中心、广西中医学院、广西农学院实验中心等权威机构检验表 明：金花茶属无毒级、含有400多种营养物质、无毒副作用。富含茶多糖、茶多酚、总皂甙、总 黄酮、茶色素、咖啡因、蛋白质、维生素 Bl、B2、维生素 C、维生素 E、叶酸、脂肪酸、B-胡萝卜 素等多种天然营养成份；金花茶含有茶氨酸、苏氨酸等几十种氨基酸，以及富含有多种对人 体具有重要保健作用的天然有机锗（Ge)、硒（Se)、钥（Mo)、锌（Zn)、钒（V)等微量元素，和 钾（K)、钙（Ca)、镁（Mg)等宏量元素。自2009年成功举办首届金花茶节以来，金花茶节成 为了防城港市主打的四大文化节庆品牌之一。金花茶产业也得到了迅速发展，涌现出桂人 堂金花茶、中港高科国宝金花茶、百喜金花茶等一批龙头企业，金花茶系列产品分获广西名 牌产品、广西著名商标，产品畅销国内外市场，年产值超过12亿元。
[0005] 由此可见金花茶深受大众的喜爱，提高金花茶的产量就要对金花茶进行后代繁 殖，为了满足这一需求，本发明提供一种金花茶的组培快繁方法，能够快速的对金花茶进行 组织培养繁殖，且出苗率较高。
【发明内容】
[0006] 本发明针对上述存在的问题，提供一种金花茶的组培快繁方法，能降低繁殖的成 本，生长周期短、繁殖率高、方便管理、利于工业化生产和自动化监控大大的节约了人力、物 力和田间作物的土地。
[0007] 本发明的方案是通过这样实现的： 一种金花茶的组培快繁方法，包括如下步骤： 外植体的消毒：采摘6?7月份的金花茶叶，使用20?40%乐果乳剂稀释400?600 倍液浸泡5?lOmin，取出后放入超净工作台使用4%维生素 C水溶液浸泡30min后再3%的 次氯酸进行消毒5?IOmin,然后用无菌水冲洗3?5次，最后使用灭菌滤纸吸干金花茶叶 表面的无菌水；使用乐果乳剂对刚采摘的金花茶叶进行消毒，能将金花茶叶上的害虫爬行 过后残留下的有害液体去除，然后使用维生素 C浸泡再用次氯酸消毒不仅能有效延缓外植 体褐化时间和保持外植体活力，而且能将金花茶叶上的细菌杀死，再使用无菌水冲洗，确保 金花茶叶上其他液体无残留，最后使用灭菌滤纸吸干金花茶叶表面的无菌水，以防将金花 茶叶放入愈伤组织培养基中对培养基有稀释作用。
[0008] (2)愈伤组织培养：愈伤组织培养：使用解剖刀沿着金花茶叶的茎干位置横切出 长15?18cm，宽10?15cm的叶条片，将叶条片放入已经装入愈伤组织培养基的培养皿中， 轻压叶条片，在29?31°C下暗培养8?15天，而后转入26?28°C下进行8?15天的暗 培养，获得金花茶愈伤组织；采用光暗培养的方式，暗培养的时间原大于光培养，可以避免 金花茶叶修复期间过多的光照使其进行光合作用生成糖类，失去金花茶叶体内的一部分物 质和能量，使得完成修复过程的物质和能量的总量减少，造成形成愈伤组织的时间变慢。
[0009] (3)愈伤组织分化芽：将上述得到的愈伤组织移置芽诱导培养基中，其中，芽诱导 培养基的配方为MS+6?8g/L琼脂+25?29 g/L蔗糖+ 0. 3?0.8mg/L 6?苄基嘌呤 +0· 8?I. 5mg/L萘乙酸，调节培养基的pH值为6. 0?6. 5,于25?28°C条件下，光暗培养 30?45天后愈伤组织分化出芽；添加6?苄基嘌呤在培养基中具有抑制植物叶内叶绿素、 核酸、蛋白质的分解，保绿防老；将氨基酸、生长素、无机盐等向处理部位调运等多种效能。
[0010] (4)芽生根：待步骤（3)中芽长至5?6cm时，将芽移置根诱导培养基中，其中，根 诱导培养基的配方为MS+6?8g/L琼脂+25?29g/L蔗糖+0· 8?2. 5mg/L吲哚乙酸+0· 5? I. 5mg/L萘乙酸+0. 8?I. 5mg/L活性炭+0. 8?I. 5mg/L的硫酸亚铁，于25?28°C条件下， 光暗培养20?30天，培养出幼苗，组培结束。采用萘乙酸为培养基其中之一的添加物质能 够促进细胞分裂和扩大，可诱导生根；而抗褐化剂活性炭+〇. 8?I. 5mg/L的硫酸亚铁可降 低组培过程中外植体、原球茎和丛生芽产生褐化，目前已达到外植体初诱导、原球茎继代增 殖褐化率控制在15%以下，丛生芽生根诱导褐化率低于5%以下。
[0011] 本发明中，作为进一步说明，所述每个培养皿放入3?5片的叶条片。适当放入叶 条片能保证每条叶条片能充分的吸收足量的养分，防止养分不足造成培养失败，即提高繁 殖率。
[0012] 本发明中，作为进一步说明，所述愈伤组织培养基的配方为MS+6?8g/L琼脂 +25?29 g/L蔗糖+ 0. 3?0. 8mg/L 6?苄基嘌呤+0. 8?I. 5mg/L萘乙酸，调节培养基 的pH值为6. 5?7. 0 ;将培养基放入高温灭菌锅，在121?130°C、I. 1?I. 5 kg/cm2条件 下进行灭菌30?50min，然后取出冷却至45°C后迅速在超净工作台中倾倒分装到已经经过 高温灭菌锅灭菌的培养皿中。
[0013] 本发明中，作为进一步说明，所述培养皿的规格为90X 15mm ;所述装入培养皿中 的培养基为培养皿体积的1/3?1/2。采用直接倾倒的方法，相比使用量筒量取定量的培养 基，具有快速，简便的优点。
[0014] 本发明中，作为进一步说明，所述步骤（3)和步骤（4)中的光暗培养周期为光培养 20?22h，暗培养2?4h。在愈伤组织发芽和生根期间，需要吸收足够的光源来形成叶绿素 继而能通过吸收光源来完成光合作用，光合作用能够合成能源，补充生长所需的能量。
[0015] 本发明中，作为进一步说明，所述步骤（3)中光培养的光照强度为1500?1700勒 克斯，步骤（4)中光培养的光照强度为2000?3000勒克斯。愈伤组织培养时采用弱光的 光培养，提高了金花茶组培的增殖倍数，缩短周期培养的时间，且采用较弱光的光培养能够 减少日光灯补光时产生的电耗和产生的热量，减少降温所需的费用，因此采用此方法可提 高生产效率，降低生产成本，有利产业的发展。芽生根培养加强了光照的强度，顺应金花茶 的生活习性，促进其快速生根发芽。
[0016] 本发明中，作为进一步说明，所述金花茶叶为颜色嫩绿、完整、无病虫害；金花茶叶 的采摘时间为晚上1?2点。在深夜对金花茶叶进行采摘,深夜的金花茶叶已经停止进行 光合作用，但是还是进行呼吸作用，消耗了体内的淀粉，为金花茶叶进行愈伤组织培养提供 良好的条件，减少形成愈伤组织的时间。与现有技术中先采摘叶片后进行暗培养一段时间 后再进行愈伤组织培养的工序更加简单。
[0017] 本发明的突出的实质性特点和显著进步是： 1.本发明利用深夜的金花茶叶进行组培，为金花茶叶进行愈伤组织培养提供良好的 条件，能够快速使金花茶叶形成金花茶叶愈伤组织，进而减少了组培的时间。
[0018] 2.本发明形成金花茶叶愈伤组织后发芽、生根都进行光暗培养，不仅仅通过光培 养促进金花茶叶愈伤组织形成叶绿素，进行光合作用合成能源提供生长所需能量，而且通 过暗培养促进其进行呼吸作用，物质转换，促进生长。
[0019] 3.本发明光培养使用的是较弱的光照强度，不仅提高了金花茶组培的增殖倍数， 缩短周期培养的时间，且采用弱光的光培养能够减少日光灯补光时产生的电耗和产生的热 量，减少降温所需的费用，因此采用此方法可提高生产效率，降低生产成本，有利产业的发 展，通过本发明的方法金花茶的发芽率达到75%以上。
[0020] 4.本发明的方法有利于工业化生产和自动化监控，大大的节约了人力、物力和田 间作物的土地；在金花茶苗栽培生产领域中具有极大的推广价值。
【具体实施方式】
[0021] 下面通过具体实施例进一步说明本发明，以使本发明的优点和特征更易于被理 解，应该理解的是，本发明的实施例仅仅是用于本发明，而不是对本发明的限制。
[0022] 实施例1: 一种金花茶的组培快繁方法，包括如下步骤： (1) 外植体的消毒：于6月份晚上1点采摘颜色嫩绿、完整、无病虫害的金花茶叶，然后 使用20%乐果乳剂稀释400倍液浸泡5min，取出后放入超净工作台使用4%维生素 C水溶液 浸泡30min后再3%的次氯酸进行消毒5min，然后用无菌水冲洗3次，最后使用灭菌滤纸吸 干金花茶叶表面的无菌水； (2) 愈伤组织培养：使用解剖刀沿着金花茶叶的茎干位置横切出长15cm，宽IOcm的 叶条片，将3片的叶条片放入已经装入愈伤组织培养基的规格为90X 15mm的培养皿中，轻 压叶条片，在29°C下暗培养8天，而后转入26°C下进行8天的暗培养，获得金花茶愈伤组 织，其中，愈伤组织培养基的配方为MS+6g/L琼脂+25 g/L蔗糖+ 0. 3mg/L 6?苄基嘌呤 +0. 8mg/L萘乙酸，调节培养基的pH值为6. 5 ;将培养基放入高温灭菌锅，在121°C、1. lkg/ cm2条件下进行灭菌30min，然后取出冷却至45°C后迅速在超净工作台中倾倒分装到已经经 过高温灭菌锅灭菌的培养皿中，装入培养皿中的培养基为培养皿体积的1/3 ; (3) 愈伤组织分化芽：将上述得到的愈伤组织移置芽诱导培养基中，其中，芽诱导培养 基的配方为MS+6g/L琼脂+25g/L蔗糖+ 0. 3mg/L 6?苄基嘌呤+0.8mg/L萘乙酸，调节培 养基的pH值为6. 0,于25°C条件下，进行光培养20h，暗培养4h的光暗培养30天后愈伤组 织分化出芽，其中，光培养的光照强度为1500勒克斯； (4) 芽生根：待步骤（3)中芽长至5cm时，将芽移置根诱导培养基中，其中，根诱导培养 基的配方为MS+6g/L琼脂+25g/L蔗糖+0· 8mg/L吲哚乙酸+0· 5mg/L萘乙酸+0· 8mg/L活性 炭+0. 8mg/L的硫酸亚铁，于25°C条件下，进行光培养20h，暗培养4h的光暗培养20天，其 中，光培养的光照强度为3000勒克斯，至培养出幼苗，组培结束。
[0023] 实施例2: 一种金花茶的组培快繁方法，包括如下步骤： (1) 外植体的消毒：于7月份晚上2点采摘颜色嫩绿、完整、无病虫害的金花茶叶，然后 使用40%乐果乳剂稀释600倍液浸泡lOmin，取出后放入超净工作台使用4%维生素 C水溶 液浸泡30min后再3%的次氯酸进行消毒lOmin，然后用无菌水冲洗5次，最后使用灭菌滤纸 吸干金花茶叶表面的无菌水； (2) 愈伤组织培养：使用解剖刀沿着金花茶叶的茎干位置横切出长18cm，宽15cm的叶 条片，将5片的叶条片放入已经装入愈伤组织培养基的规格为90X 15mm的培养皿中，轻压 叶条片，在31°C下暗培养15天，而后转入28°C下进行15天的暗培养，获得金花茶愈伤组 织，其中，愈伤组织培养基的配方为MS+8g/L琼脂+29 g/L蔗糖+ 0.8mg/L 6?苄基嘌呤 +1.5mg/L萘乙酸，调节培养基的pH值为6.0;将培养基放入高温灭菌锅，在130°C、1.5 kg/ cm2条件下进行灭菌50min，然后取出冷却至45°C后迅速在超净工作台中倾倒分装到已经经 过高温灭菌锅灭菌的培养皿中，装入培养皿中的培养基为培养皿体积的1/2 ; (3) 愈伤组织分化芽：将上述得到的愈伤组织移置芽诱导培养基中，其中，芽诱导培养 基的配方为MS+8g/L琼脂+29 g/L蔗糖+ 0.8mg/L 6?苄基嘌呤+1.5mg/L萘乙酸，调节培 养基的pH值为7. 5,于28°C条件下，进行光培养22h，暗培养2h的光暗培养45天后愈伤组 织分化出芽，其中，光培养的光照强度为1700勒克斯； (4) 芽生根：待步骤（3)中芽长至6cm时，将芽移置根诱导培养基中，其中，根诱导培养 基的配方为MS+8g/L琼脂+29g/L蔗糖+ 2. 5mg/L吲哚乙酸+1. 5mg/L萘乙酸+1. 5mg/L活 性炭+1. 5mg/L的硫酸亚铁，于28°C条件下，进行光培养22h，暗培养2h的光暗培养30天， 其中，光培养的光照强度为2000勒克斯，至培养出幼苗，组培结束。
[0024] 实施例3: 一种金花茶的组培快繁方法，包括如下步骤： (1) 外植体的消毒：于6月份晚上1点20分时采摘颜色嫩绿、完整、无病虫害的金花茶 叶，然后使用25%乐果乳剂稀释450倍液浸泡6min，取出后放入超净工作台使用4%维生素 C水溶液浸泡30min后再3%的次氯酸进行消毒6min，然后用无菌水冲洗4次，最后使用灭 菌滤纸吸干金花茶叶表面的无菌水； (2) 愈伤组织培养：使用解剖刀沿着金花茶叶的茎干位置横切出长16cm，宽Ilcm的 叶条片，将4片的叶条片放入已经装入愈伤组织培养基的规格为90X 15mm的培养皿中，轻 压叶条片，在30°C下暗培养9天，而后转入27°C下进行9天的暗培养，获得金花茶愈伤组 织，其中，愈伤组织培养基的配方为MS+7g/L琼脂+26 g/L蔗糖+ 0.4mg/L 6?苄基嘌呤 +0.9mg/L萘乙酸，调节培养基的pH值为6. 2;将培养基放入高温灭菌锅，在122°C、1.2 kg/ cm2条件下进行灭菌35min，然后取出冷却至45°C后迅速在超净工作台中倾倒分装到已经经 过高温灭菌锅灭菌的培养皿中，装入培养皿中的培养基为培养皿体积的1/3 ; (3) 愈伤组织分化芽：将上述得到的愈伤组织移置芽诱导培养基中，其中，芽诱导培养 基的配方为MS+7g/L琼脂+26 g/L蔗糖+ 0.4mg/L 6?苄基嘌呤+0.9mg/L萘乙酸，调节培 养基的pH值为6. 6,于26°C条件下，进行光培养21h，暗培养3h的光暗培养33天后愈伤组 织分化出芽，其中，光培养的光照强度为1550勒克斯； (4) 芽生根：待步骤（3)中芽长至5. 5cm时，将芽移置根诱导培养基中，其中，根诱导培 养基的配方为MS+7g/L琼脂+26g/L蔗糖+0· 9mg/L吲哚乙酸+0· 8mg/L萘乙酸+0· 9mg/L活 性炭+1. Omg/L的硫酸亚铁，于26°C条件下，进行光培养21h，暗培养3h的光暗培养25天， 其中，光培养的光照强度为2300勒克斯，至培养出幼苗，组培结束。
[0025] 实施例4: 一种金花茶的组培快繁方法，包括如下步骤： (1) 外植体的消毒：于7月份晚上1点30分时采摘颜色嫩绿、完整、无病虫害的金花茶 叶，然后使用35%乐果乳剂稀释500倍液浸泡7min，取出后放入超净工作台使用4%维生素 C水溶液浸泡30min后再3%的次氯酸进行消毒7min，然后用无菌水冲洗3次，最后使用灭 菌滤纸吸干金花茶叶表面的无菌水； (2) 愈伤组织培养：使用解剖刀沿着金花茶叶的茎干位置横切出长17cm，宽12cm的叶 条片，将3片的叶条片放入已经装入愈伤组织培养基的规格为90X 15mm的培养皿中，轻压 叶条片，在29°C下暗培养14天，而后转入27°C下进行13天的暗培养，获得金花茶愈伤组 织，其中，愈伤组织培养基的配方为MS+7g/L琼脂+28 g/L蔗糖+ 0. 7mg/L 6?苄基嘌呤 +1.0mg/L萘乙酸，调节培养基的pH值为6. 1 ;将培养基放入高温灭菌锅，在128°C、1.4 kg/ cm2条件下进行灭菌40min，然后取出冷却至45°C后迅速在超净工作台中倾倒分装到已经经 过高温灭菌锅灭菌的培养皿中，装入培养皿中的培养基为培养皿体积的1/2 ; (3) 愈伤组织分化芽：将上述得到的愈伤组织移置芽诱导培养基中，其中，芽诱导培养 基的配方为MS+7g/L琼脂+26 g/L蔗糖+ 0. 7mg/L 6?苄基嘌呤+1.3mg/L萘乙酸，调节培 养基的pH值为7. 0,于27°C条件下，进行光培养20h，暗培养4h的光暗培养32天后愈伤组 织分化出芽，其中，光培养的光照强度为1600勒克斯； (4) 芽生根：待步骤（3)中芽长至5. 3cm时，将芽移置根诱导培养基中，其中，根诱导培 养基的配方为MS+7g/L琼脂+28g/L蔗糖+2. Omg/L吲哚乙酸+1. Omg/L萘乙酸+1. Omg/L活 性炭+1. lmg/L的硫酸亚铁，于26°C条件下，进行光培养20h，暗培养4h的光暗培养27天， 其中，光培养的光照强度为2100勒克斯，至培养出幼苗，组培结束。
[0026] 实施例5: 一种金花茶的组培快繁方法，包括如下步骤： (1)外植体的消毒：于5月份晚上1点50分时采摘颜色嫩绿、完整、无病虫害的金花茶 叶，然后使用22%乐果乳剂稀释550倍液浸泡9min，取出后放入超净工作台使用4%维生素 C水溶液浸泡30min后再3%的次氯酸进行消毒9min，然后用无菌水冲洗4次，最后使用灭 菌滤纸吸干金花茶叶表面的无菌水； (2) 愈伤组织培养：使用解剖刀沿着金花茶叶的茎干位置横切出长17cm，宽14cm的叶 条片，将3片的叶条片放入已经装入愈伤组织培养基的规格为90X 15mm的培养皿中，轻压 叶条片，在29°C下暗培养11天，而后转入26°C下进行11天的暗培养，获得金花茶愈伤组 织，其中，愈伤组织培养基的配方为MS+6g/L琼脂+25 g/L蔗糖+ 0. 7mg/L 6?苄基嘌呤 +1.211^/1萘乙酸，调节培养基的？!1值为6.4;将培养基放入高温灭菌锅，在1291：、1.2 1^/ cm2条件下进行灭菌45min，然后取出冷却至45°C后迅速在超净工作台中倾倒分装到已经经 过高温灭菌锅灭菌的培养皿中，装入培养皿中的培养基为培养皿体积的1/2 ; (3) 愈伤组织分化芽：将上述得到的愈伤组织移置芽诱导培养基中，其中，芽诱导培养 基的配方为MS+6g/L琼脂+26 g/L蔗糖+ 0. 7mg/L 6?苄基嘌呤+1.3mg/L萘乙酸，调节培 养基的pH值为7. 3,于25°C条件下，进行光培养21h，暗培养3h的光暗培养42天后愈伤组 织分化出芽，其中，光培养的光照强度为1650勒克斯； (4) 芽生根：待步骤（3)中芽长至5cm时，将芽移置根诱导培养基中，其中，根诱导培养 基的配方为MS+6g/L琼脂+25g/L蔗糖+2. 3mg/L吲哚乙酸+0· 9mg/L萘乙酸+1. 3mg/L活性 炭+1. 3mg/L的硫酸亚铁，于25°C条件下，进行光培养22h，暗培养2h的光暗培养29天，其 中，光培养的光照强度为2500勒克斯，至培养出幼苗，组培结束。
[0027] 如实施例1?5各条件下进行组培的条件下，对各实施例的组织培养的总数、愈伤 组织培养阶段的情况变化和出苗率统计表如表1，愈伤组织培养期间每隔3天进行一次叶 片颜色变化的记录，总结变化趋势。
[0028] 表1出苗率统计表
【权利要求】
1. 一种金花茶的组培快繁方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 外植体的消毒：采摘5?7月份的金花茶叶，使用20?40%乐果乳剂稀释400? 600倍液浸泡5?lOmin，取出后放入超净工作台使用4%维生素 C水溶液浸泡30min后再 3%的次氯酸进行消毒5?lOmin，然后用无菌水冲洗3?5次，最后使用灭菌滤纸吸干金花 茶叶表面的无菌水； (2) 愈伤组织培养：使用解剖刀沿着金花茶叶的茎干位置横切出长15?18cm，宽10? 15cm的叶条片，将叶条片放入已经装入愈伤组织培养基的培养皿中，轻压叶条片，在29? 31°C下暗培养8?15天，而后转入26?28°C下进行8?15天的暗培养，获得金花茶愈伤 组织； (3) 愈伤组织分化芽：将上述得到的愈伤组织移置芽诱导培养基中，其中，芽诱导培养 基的配方为MS+6?8g/L琼脂+25?29 g/L鹿糖+ 0. 3?0. 8mg/L 6?节基噪呤+0. 8? 1. 5mg/L萘乙酸，调节培养基的pH值为6. 0?6. 5,于25?28°C条件下，光暗培养30?45 天后愈伤组织分化出芽； (4) 芽生根：待步骤（3)中芽长至5?6cm时，将芽移置根诱导培养基中，其中，根诱导 培养基的配方为MS+6?8g/L琼脂+25?29g/L蔗糖+0. 8?2. 5mg/L吲哚乙酸+0. 5? 1. 5mg/L萘乙酸+0. 8?1. 5mg/L活性炭+0. 8?1. 5mg/L的硫酸亚铁，于25?28°C条件下， 光暗培养20?30天，培养出幼苗，组培结束。
2. 根据权利要求1所述的金花茶的组培快繁方法，其特征在于，所述每个培养皿放入 3?5片的叶条片。
3. 根据权利要求1所述的金花茶的组培快繁方法，其特征在于，所述愈伤组织培养基 的配方为MS+6?8g/L琼脂+25?29 g/L蔗糖+ 0. 3?0. 8mg/L 6?苄基嘌呤+0. 8? 1. 5mg/L萘乙酸，调节培养基的pH值为6. 5?7. 0 ;将培养基放入高温灭菌锅，在121? 130°C、1. 1?1. 5 kg/cm2条件下进行灭菌30?50min，然后取出冷却至45°C后迅速在超净 工作台中倾倒分装到已经经过高温灭菌锅灭菌的培养皿中。
4. 根据权利要求1所述的金花茶的组培快繁方法，其特征在于，所述培养皿的规格为 90X 15mm ;所述装入培养皿中的培养基为培养皿体积的1/3?1/2。
5. 根据权利要求1所述的金花茶的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤（3)和步骤 (4)中的光暗培养周期为光培养20?22h，暗培养2?4h。
6. 根据权利要求1所述的金花茶的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤（3)中光培养 的光照强度为1500?1700勒克斯，步骤（4)中光培养的光照强度为2000?3000勒克斯。
7. 根据权利要求1所述的金花茶的组培快繁方法，其特征在于，所述金花茶叶为颜色 嫩绿、完整、无病虫害；金花茶叶的采摘时间为晚上1?2点。
【文档编号】A01H4/00GK104488713SQ201410755440
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月11日 优先权日:2014年12月11日
【发明者】张莘蔓, 韦玲菊, 陈程, 罗生芳 申请人:柳州博泽科技有限公司