一种欧李组培快繁方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种欧李组培快繁方法。
【背景技术】
[0002]欧李(Cfera1SW1S Aw?i7i5.)为蔷薇科楼桃属多年生落叶矮小灌木，是世界上最矮小的木本果树，也是我国特有的果药兼用野生树种。核果，形似樱桃，味似李子，酸甜可口，风味独特，有红、黄、紫等多种颜色，因其植株矮、果实色多而艳丽，可进行盆栽，既可观赏又可食用；果实营养价值丰富。其种仁和根皆可药用，种仁在中药上称为“郁李仁”，可消毒化肿。此外，欧李也是一种适应性很强的树种，具有耐干旱、耐瘠薄、耐寒冷、耐盐碱等特点，是一种良好的生态树种。由于欧李的营养价值高，其生态价值和社会价值也不可估量，开发利用前景非常广阔，今后欧李良种种苗会供不应求，苗木需求量会越来越大，这为工厂化育苗提供了广阔的市场。
[0003]目前，欧李主要采用播种、扦插、嫁接等方式进行繁殖，但繁殖系数低，生长周期长，同时易受外界环境条件等因素的影响。近年来，已培育了不少的优良欧李品种，但传统的繁殖方式已不能满足其良种推广对种苗的需要，而釆用组织培养的方法，繁殖系数高，可以在任意生长阶段进行选材扩繁，对欧李优良品种的选育和工厂化育苗提供了便利的条件。本发明以欧李带腋芽茎段为外植体，经过诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等步骤获得了欧李离体再生植株，建立了欧李再生体系，为今后工厂化育苗及驯化栽培奠定坚实的基础。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供出一种欧李组培快繁方法，本发明以欧李带腋芽茎段为外植体，经过诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等步骤获得了欧李离体再生植株，建立了欧李再生体系，从而实现了本发明的目的。
[0005]本发明的一种欧李组培快繁方法，包括以下的步骤:
(I)外植体消毒:欧李枝条带回实验室，自来水冲去表面灰尘后置于饱和的洗衣粉水中浸泡20?40min，用软毛刷彻底洗去灰尘后，放在流水下冲洗2?3 h，冲净材料表面上残留的洗衣液，在超净工作台上先置于70%?75%的酒精中浸泡30?60s，迅速用无菌水漂洗2?5次，然后用0.1%的升汞溶液消毒处理6?15 min，注意将外植体完全浸泡在升汞中，消毒后用无菌水冲洗4?7次，每次冲洗I?3min，无菌滤纸吸干外植体表面残留水分后备用。
[0006](2)诱导培养:将经步骤(I)处理后的外植体剪成带有I?2个腋芽、长度约为I?2cm的茎段，切掉与消毒液接触的切口部分后接种于诱导培养基中进行丛生芽诱导。接种后置于每天光照12?16小时，光照强度为2000?40001x，置于培养温度为18?22°C，空气相对湿度为75%?80%的条件下培养30天后统计萌动率。
[0007](3)增殖培养:将步骤(2)茎段腋芽诱导得到的萌枝剪切成I?2cm长的茎段并接种到增殖培养基进行继代增殖培养以得到更多的萌条。接种后置于每天光照14?16小时，光照强度为3000?50001x，培养温度为15?20°C，空气相对湿度为75%?80%的条件下培养25天后以不定芽长度多1.0cm为有效芽统计增殖倍数。
[0008](4)生根培养:经步骤(3)继代3?5次后，选取健壮、生长势相对一致的试管苗接种至生根培养中诱导生根。接种后置于每天光照14?16小时，光照强度为3000?50001x，培养温度为15?20°C，空气相对湿度为75%?80%的条件下培养25天后统计生根率及平均生根数。
[0009](5)炼苗移栽:选取经生根培养后，根系发达且植株生长健壮的组培苗进行炼苗移栽，首先洗去组培苗基部附着的琼脂，之后将其移栽到事先浇透由草炭土:腐殖土:珍珠岩=2:1:1组成的混合基质中，之后向小苗进行喷雾，搭建简易塑料拱棚，保证棚内空气相对湿度达100%，覆盖塑料薄膜，以保证炼苗期间棚内的湿度，之后逐渐掀膜通风透光并注意棚内的湿度。移栽20天后统计移栽成活率。
[0010]上述步骤(2)所述的诱导培养基为:MS+0.1?1.0mg/L NAA+1.0?3.0mg/L6-BA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂 +1.0 ?3.0g/L LH+50 ?100g/L 马铃薯，pH 为
5.4 ?5.8ο
[0011]上述步骤(3)所述的增殖培养基为:MS+0.1?1.0mg/L NAA+1.0?3.0mg/L6-BA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0012]上述步骤(4)所述的生根培养基为:1/2MS+1.0?3.0mg/L NAA+1.0?2.0mg/LABTi+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0013]与现有技术相比本发明的优点是:欧李(Cera1SW1S力應i7i5.)为蔷薇科楼桃属多年生落叶矮小灌木，是世界上最矮小的木本果树，也是我国特有的果药兼用野生树种。近年来，已培育了不少的优良欧李品种，但传统的繁殖方式已不能满足其良种推广对种苗的需要。植物组织培养的方法具有繁殖系数高、周期短、成本低等特点，是欧李快速繁殖的最佳方式。本发明以欧李带腋芽茎段为外植体，经过诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等步骤获得了欧李离体再生植株，建立了欧李再生体系，为今后工厂化育苗及驯化栽培奠定坚实的基础。
【具体实施方式】
[0014]以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
[0015]实施例1
(O外植体消毒:欧李枝条带回实验室，自来水冲去表面灰尘后置于饱和的洗衣粉水中浸泡20min，用软毛刷彻底洗去灰尘后，放在流水下冲洗2h，冲净材料表面上残留的洗衣液，在超净工作台上先置于70%的酒精中浸泡60s，迅速用无菌水漂洗4次，然后用0.1%的升汞溶液消毒处理12min，注意将外植体完全浸泡在升汞中，消毒后用无菌水冲洗5次，每次冲洗2min，无菌滤纸吸干外植体表面残留水分后备用。
[0016](2)诱导培养:将经步骤(I)处理后的外植体剪成带有I?2个腋芽、长度约为I?2cm的茎段，切掉与消毒液接触的切口部分后接种于诱导培养基中进行丛生芽诱导。接种后置于每天光照14小时，光照强度为30001χ，置于培养温度为18°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计萌动率为86.66%ο所述的诱导培养基为:MS+0.3mg/LNAA+1.5mg/L 6_BA+25g/L 蔗糖 +4.9g/L 琼脂 +1.5g/L LH+70g/L 马铃薯，pH 为 5.8。
[0017](3)增殖培养:将步骤(2)茎段腋芽诱导得到的萌枝剪切成I?2cm长的茎段并接种到增殖培养基进行继代增殖培养以得到更多的萌条。接种后置于每天光照14小时，光照强度为30001x，培养温度为15°C，空气相对湿度为75%的条件下培养25天后以不定芽长度多1.0cm为有效芽统计增殖倍数为6.53，培养30天后苗平均株高在3.5 cm左右，苗健壮，叶深绿色或黄绿色，叶片大而完全伸展。所述的增殖培养基为:MS+0.5mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA+18g/L 蔗糖 +3.5g/L 琼脂，pH 为 5.8。
[0018](4)生根培养:经步骤(3)继代3次后，选取健壮、生长势相对一致的试管苗接种至生根培养中诱导生根