一种白首乌组培快繁方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种白首乌组培快繁方法。
【背景技术】
[0002]白首乌为萝摩科鹅绒藤属植物，其块根入药，味甘、苦、性微温。白首乌主要有效成分为C21留苷，还含有丰富的淀粉、蛋白质、多种维生素和多种矿物质等。白首乌具补血、补气、抗衰老、降血脂、降胆固醇以及促进乌发生长的作用，且无毒。在生产上白首乌用于制取优质淀粉，经济价值高。
[0003]一般白首乌来自野生资源。随着生产的发展随着生活水平的不断提高，人民对医疗保健品的需求量与日俱增，野生资源不能满足需要，而且很快会导致野生资源的枯竭，故需要开展人工栽培。目前，白首乌的人工栽培主要靠块根的营养繁殖和种子育苗，易受病毒浸染，导致种性退化，产量和品质下降，不能适应规模化和标准化生产的需要，因此有必要建立以组织培养的方法快速繁殖白首乌的成套技术。因此，本发明以白首乌种子为外植体，通过外植体消毒、不定芽诱导、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了白首乌离体再植株，建立了有效的白首乌组培快繁殖技术体系，短时期内即可生产大量种苗，提高繁殖效率，降低生产成本，有利加快其繁育及推广。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供出一种白首乌组培快繁方法，本发明以白首乌种子为外植体，通过外植体消毒、不定芽诱导、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了白首乌离体再植株，建立了有效的白首乌组培快繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。
[0005]本发明的一种白首乌组培快繁方法，包括以下的步骤:
(I)外植体准备及消毒:选取成熟饱满的白首乌种子，放入清水中浸种24?48h，在超净工作台上先75%的乙醇消毒30?60s，再用0.1%的升汞消毒10?20min，然后用无菌水冲洗3?5次，用无菌滤纸吸干水分，接种到1/2MS培养基中(0.4%琼脂、3.0%白糖，pH5.8)。后置于每天光照12?14小时，光照强度为1000?20001x培养14?30天。
[0006](2)诱导培养:将步骤(I)处理得到的无菌苗的带腋芽茎段切成约0.5cm，顶端向上接入诱导培养基上，保持节位腋芽点在培养基表面上。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为1000?20001x，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计诱导率。
[0007](3)增殖培养:以步骤(2)诱导得到不定芽作为材料，将老化的和生长不良的不定芽去掉，并将生长状态良好的不定芽切成单芽并转入增殖培养基进行扩繁。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计增殖情况。
[0008](4)生根培养:将增殖培养基中长到3cm以上的芽苗转入生根培养基中。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计生根情况。
[0009](5)炼苗移栽:当组培苗具备发达健壮的根后，即可移栽。移栽在遮阴棚中进行。将生长健壮的试管苗在自然条件下炼苗5?7天，再开盖炼苗3?5天.在试管苗移栽前，基质先用0.5%的KMnSO4溶液消毒，后装入营养袋。用小勺轻轻取出带根小苗(带少许培养基)移到营养小钵中。移栽完用自动喷水装置将移栽苗浇透。以后每2h喷一次，每次喷 50s。
[0010]上述步骤(2)所述的诱导培养基为:MS+1.0?5.0mg/L ΚΤ+0.1?0.5mg/LNAA+25 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0011]上述步骤(3)所述的增殖培养基为:ΚΤ+1.0?2.0mg/L ΚΤ+0.01?0.1mg/LNAA+25 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0012]上述步骤(4)所述的生根培养基为:l/2MS+0.5?1.0mg/LNAA+0.1?0.5mg/LIAA+20 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
本发明的优点是:以白首乌种子为外植体，通过外植体消毒、不定芽诱导、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了白首乌离体再植株，建立了有效的白首乌组培快繁殖技术体系，短时期内即可生产大量种苗，提高繁殖效率，降低生产成本，有利加快其繁育及推广。
【具体实施方式】
[0013]以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
[0014]实施例1
(I)外植体准备及消毒:选取成熟饱满的白首乌种子，放入清水中浸种24h，在超净工作台上先75%的乙醇消毒30s，再用0.1%的升汞消毒lOmin，然后用无菌水冲洗3次，用无菌滤纸吸干水分，接种到1/2MS培养基中(0.4%琼脂、3.0%白糖，pH5.8)。后置于每天光照12小时，光照强度为100lx培养14天。
[0015](2)诱导培养:将步骤(I)处理得到的无菌苗的带腋芽茎段切成约0.5cm，顶端向上接入诱导培养基上，保持节位腋芽点在培养基表面上。接种后置于每天光照12小时，光照强度为ΙΟΟΟΙχ，置于培养温度为25°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天诱导率达到 100%。所述的诱导培养基为:MS+2.5mg/L KT+0.3mg/L NAA+25g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为 5.4。
[0016](3)增殖培养:以步骤(2)诱导得到不定芽作为材料，将老化的和生长不良的不定芽去掉，并将生长状态良好的不定芽切成单芽并转入增殖培养基进行扩繁。接种后置于每天光照12小时，光照强度为20001x，置于培养温度为25 V，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后增殖系数达到5.6。所述的增殖培养基为:KT+1.0mg/L KT+0.01mg/LNAA+25g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.4。
[0017](4)生根培养:将增殖培养基中长到3cm以上的芽苗转入生根培养基中。接种后置于每天光照12小时，光照强度为20001x，置于培养温度为25°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后生根率达到95%以上。所述的生根培养基为: