高虫草素富硒虫草培植方法
【专利摘要】本发明一种高虫草素富硒虫草培植方法，包括如下步骤：1)虫草菌一级固体培养；2)虫草菌二级扩种液体培养；3)虫草固体生产性培养。本发明适用于冬虫夏草和北虫草的人工培养，所获得的虫草含虫草素高，可达到野生虫草的100-200倍以上；硒含量高，可达到野生虫草的水平，极大地提高了人工培植虫草的有效成分和功效，并且用该法培植虫草菌的抗杂菌力强，产量高，能缩短人工培植时间，有很好的经济效益。
【专利说明】高虫草素富砸虫草培植方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物领域，涉及一种高虫草素富硒虫草培植方法。
【背景技术】
[0002]虫草分冬虫夏草和北虫草两种，两者是同科不同种。冬虫夏草是麦角科虫草菌寄生于蝙蝠蛾幼虫体上的子座与幼虫体的复合物。北虫草是北冬虫草的简称，也叫蛹虫草或踊虫草、蛹草，俗名不老草，是虫，菌结合的药用真菌，现代珍稀中草药，北冬虫夏草属于真菌门，子囊菌纲，肉座菌目，麦角菌科，虫草属，主要生长在我国的北方地区。虫草有野生和人工培植两种。对人体发挥作用的有效成分是虫草素、虫草酸、虫草多糖、超氧化物歧化酶。有补肾益肺，止血化痰，抗癌，提高免疫力，抗疲劳，保护肺、肾、肝等多种功能。深受广大人群欢迎，称为保健品中的软黄金。
[0003]冬虫夏草和北虫草的有效成份和功效基本相似，虫草素是其重要成份，现在市场上人工培植的大多为北虫草。人工培植虽然提高了实体产量，但是忽视了提高虫草素的含量。野生虫草的硒含量是中药黄芪的三倍，达到了 0.44mg/kg，符合卫生部规定的富硒食品要求。现在还没有虫草的人工培植方法能够使虫草的硒含量达到野生虫草的硒含量水平。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种虫草素和硒含量高、抗性强的虫草培植方法。
[0005]本发明的目的是这样实现的:一种高虫草素富硒虫草培植方法，包括如下步骤:
[0006]I)虫草菌一级固体培养:
[0007]①制备斜面固体培养基:培养基成分配比为:土豆100_140g、葡萄糖10_14g、牛肉膏 4-6g、KH2P04 0.4-0.6g、MgS04 0.2-0.3g、蛋氨酸硒 0.008-0.012g、琼脂 8_12g ;先将土豆煮熟，捣烂，加入前述其余成分，加热煮沸让琼脂完全融化，加蒸馏水至500ml，搅拌均匀装制斜面，灭菌，冷至室温准备接种；
[0008]②接种、培养:用步骤I制备的斜面固体培养基在无菌条件下接种虫草的菌丝体，避光24°C培养3-4天，再在20°C培养4-5天，然后在18?22°C自然光照24小时，待用；
[0009]2)虫草菌二级扩种液体培养:
[0010]①制备二级液体培养基:用蒸馏水配制液体培养基，各组分含量为:蛋白胨13-17g/L、葡萄糖 18-22g/L、KH2PO4 0.8-1.2g/L，7H20.MgSO4 0.4-0.6g/L、VB1 8_12mg/L，蛋氨酸硒0.04-0.06g/L,灭菌待用；
[0011]②接种、培养:用步骤I制备的液体培养基在无菌条件下接种前述一级固体培养得到的菌丝体，避光20?24°C，摇床培养，出现小米粒样菌丝球时即完成二级扩种液体培养;
[0012]3)虫草固体生产性培养:
[0013]①制备固体生产性培养基:培养基成分配比为:大米800_1200g、蒸馏水1100-1300g、蛋白胨 10-14g、葡萄糖 16_20g、KH2PO4 1.5-2.5g、7H20.MgSO4 0.8-1.2g、蛋氨酸硒0.4-0.6g、VB1 1.5-2.5mg ;先将除大米以外的各成分用蒸馏水溶解配制成为营养液，再将大米和营养液按比例装入培养瓶中，封口，蒸至大米熟，冷却至室温待用；
[0014]②接种、培养:用步骤I制备的固体培养基在无菌条件下接种前述二级扩种液体培养得到的培养液；放入培养暗室18?23°C避光培养；培养基表面长出白色菌丝时放入自然光或人工光照，18?23°C环境生长，当子座长齐、尖端膨大、孢子形成时即可采收。
[0015]所述步骤2虫草菌二级扩种液体培养中，接种后摇床培养为130?150转/min摇床培养48小时。
[0016]所述步骤2中的虫草菌二级扩种液体培养步骤中，每200ml液体培养基接种一级固体培养得到的菌丝体3-3.5g。
[0017]所述步骤3中虫草固体生产性培养，大米和营养液按重量比1:1.2的比例装入培养瓶中，封口，95-100°C蒸30-40分钟，冷却至室温待用。
[0018]所述步骤3中虫草固体生产性培养，用固体培养基接种二级扩种液体培养得到的培养液，接种量为每10g大米接种0.5ml培养液。
[0019]所述步骤3中虫草固体生产性培养，接种后放入培养暗室18?23°C避光培养8-10 天。
[0020]本发明的有益效果是:提供了一种低成本、高产出、能够培养出虫草素含量高、富硒的虫草的培植方法。本发明适用于冬虫夏草和北虫草的人工培养，所获得的虫草含虫草素高，可达到野生虫草的100-200倍以上；硒含量高，可达到野生虫草的水平，极大地提高了人工培植虫草的有效成分和功效，并且用该法培植虫草菌的抗杂菌力强，产量高，能缩短人工培植时间，有很好的经济效益。
【具体实施方式】
[0021]实施例1高虫草素富硒冬虫夏草的培植方法
[0022]培植高虫草素富硒冬虫夏草的方法，按照如下步骤操作:
[0023]I)虫草菌一级固体培养:
[0024]①制备斜面固体培养基:培养基成分配比为:土豆120g、葡萄糖12g、牛肉膏5g、KH2PO4 0.5g、MgSO4 0.25g、蛋氨酸硒0.0lg、琼脂1g ;土豆先煮熟，捣烂，加入前述其余成分，加热煮沸让琼脂完全融化，加蒸懼水至500ml,搅拌均勻,取40ml的试管,每管装入培养基7ml，制成斜面，高压蒸汽灭菌，冷却至室温准备接种；
[0025]②接种、培养:用步骤I制备的斜面固体培养基在无菌条件下接种冬虫夏草的菌丝体3mm2，避光24°C培养3天，再在20°C培养4天，然后在18?22°C自然光照24小时，完成激活。
[0026]2)虫草菌二级扩种液体培养:
[0027]①制备二级液体培养基:用蒸馏水配制液体培养基，各组分含量为:蛋白胨15g/L、葡萄糖 20g/L、KH2PO4 lg/L,7H20 -MgSO4 0.5g/L、VBi 10mg/L，蛋氨酸硒 0.05g/L，测得 pH值为7.0，灭菌待用；
[0028]②接种、培养:用步骤I制备的液体培养基在无菌条件下接种前述一级固体培养得到的菌丝体，每200ml液体培养基接种菌丝体3g，避光20?24°C，130?150转/min摇床培养48小时，出现小米粒样菌丝球时即完成二级扩种液体培养；
[0029]3)虫草固体生产性培养:
[0030]①制备固体生产性培养基:培养基成分配比为:大米1000g、蒸馏水1200g、蛋白胨12g、葡萄糖 18g、KH2PO4 2g、7H20.MgSO4 lg、蛋氨酸硒 0.5g、VB1 2mg，测得 pH 值为 6.5 ;先将除大米以外的各成分用蒸馏水溶解成为营养液，再将大米和营养液按重量比1:1.2的比例装入培养瓶，每个500ml的培养瓶中装入50克大米、60克营养液，封口，95_100°C蒸30分钟，冷却至室温待用；
[0031]②接种、培养:用步骤I制备的固体培养基在无菌条件下接种前述二级扩种液体培养得到的培养液，每10g大米接种0.5ml培养液；放入培养暗室18?23°C避光培养8_10天；培养基表面长出白色菌丝时放入自然光或人工光照，18?23°C环境生长40-55天，当子座长齐、尖端膨大、孢子形成时即可采收。
[0032]利用中国药典中的方法测得培植出的冬虫夏草中每10g中虫草素含量为217.63mg ;测得硒含量为0.327mg/kg，达到了野生虫草的硒含量水平。
[0033]实施例2高虫草素富硒北虫草的培植方法
[0034]培植高虫草素富硒北虫草的方法，按照如下步骤操作:
[0035]I)虫草菌一级固体培养:
[0036]①制备斜面固体培养基:培养基成分配比为:土豆110g、葡萄糖llg、牛肉膏4.5g、KH2PO4 0.4g、MgSO4 0.2g、蛋氨酸硒0.009g、琼脂9g;土豆先煮熟，捣烂，加入前述其余成分，加热煮沸让琼脂完全融化，加蒸懼水至500ml,搅拌均勻,取40ml的试管,每管装入培养基8ml，制成斜面，高压蒸汽灭菌，冷却至室温准备接种；
[0037]②接种、培养:用步骤I制备的斜面固体培养基在无菌条件下接种北虫草的菌丝体3mm2，避光24°C培养3天，再在20°C培养4天，然后在18?22°C自然光照24小时，完成激活。
[0038]2)虫草菌二级扩种液体培养:
[0039]①制备二级液体培养基:用蒸馏水配制液体培养基，各组分含量为:蛋白胨Hg/L、葡萄糖 18g/L、KH2PO4 0.9g/L，7H20.MgSO4 0.4g/L、VB1 9mg/L,蛋氨酸硒 0.04g/L,测得pH值为7.1，灭菌待用；
[0040]②接种、培养:用步骤I制备的液体培养基在无菌条件下接种前述一级固体培养得到的菌丝体，每200ml液体培养基接种菌丝体3.5g，避光20?24°C，130?150转/min摇床培养48小时，出现小米粒样菌丝球时即完成二级扩种液体培养；
[0041]3)虫草固体生产性培养:
[0042]①制备固体生产性培养基:培养基成分配比为:大米llOOg、蒸懼水1300g、蛋白胨 13g、葡萄糖 19g、KH2PO4 2.5g,7H20 -MgSO4 1.2g、蛋氨酸硒 0.eg.VB^.5mg，测得 pH 值为6.8 ;先将除大米以外的各成分用蒸馏水溶解，再将大米和营养液按重量比1:1.2的比例装入培养瓶中，封口，95-100°C蒸35分钟，冷却至室温待用；
[0043]②接种、培养:用步骤I制备的固体培养基在无菌条件下接种前述二级扩种液体培养得到的培养液，每10g大米接种0.5ml培养液；放入培养暗室18?23°C避光培养8_10天；培养基表面长出白色菌丝时放入自然光或人工光照，18?23°C环境生长40-55天，当子座长齐、尖端膨大、孢子形成时即可采收。
[0044]利用中国药典中的方法测得培植出的北虫草中每10g中虫草素含量为210.5mg ；测得硒含量为0.31mg/kg，达到了野生虫草的硒含量水平。
【权利要求】
1.一种高虫草素富硒虫草培植方法，其特征在于，包括如下步骤: 1)虫草菌一级固体培养: ①制备斜面固体培养基:培养基成分配比为:土豆100-140g、葡萄糖10-14g、牛肉膏4-6g、KH2PO40.4-0.6g、MgSO40.2-0.3g、蛋氨酸硒 0.008-0.012g、琼脂 8_12g ;先将土豆煮熟，捣烂，加入前述其余成分，加热煮沸让琼脂完全融化，加蒸懼水至500ml,搅拌均勻装制斜面，灭菌，冷至室温准备接种； ②接种、培养:用步骤I制备的斜面固体培养基在无菌条件下接种虫草的菌丝体，避光24°C培养3-4天，再在20°C培养4-5天，然后在18?22°C自然光照24小时，待用； 2)虫草菌二级扩种液体培养: ①制备二级液体培养基:用蒸馏水配制液体培养基，各组分含量为:蛋白胨13_17g/L、葡萄糖 18-22g/L、KH2PO40.8-1.2g/L，7H20.MgSO40.4-0.6g/L、VB^-^mg/L,蛋氨酸硒0.04-0.06g/L,灭菌待用； ②接种、培养:用步骤I制备的液体培养基在无菌条件下接种前述一级固体培养得到的菌丝体，避光20?24°C，摇床培养，出现小米粒样菌丝球时即完成二级扩种液体培养； 3)虫草固体生产性培养: ①制备固体生产性培养基:培养基成分配比为:大米800-1200g、蒸馏水1100-1300g、蛋白胨 10-14g、葡萄糖 16-20g、KH2PO4L 5-2.5g、7H20.MgSO40.8-1.2g、蛋氨酸硒 0.4-0.6g、VB1L 5-2.5mg ;先将除大米以外的各成分用蒸馏水溶解配制成为营养液，再将大米和营养液按比例装入培养瓶中，封口，蒸至大米熟，冷却至室温待用； ②接种、培养:用步骤I制备的固体培养基在无菌条件下接种前述二级扩种液体培养得到的培养液；放入培养暗室18?23°C避光培养；培养基表面长出白色菌丝时放入自然光或人工光照，18?23°C环境生长，当子座长齐、尖端膨大、孢子形成时即可采收。
2.根据权利要求1所述的高虫草素富硒虫草培植方法，其特征在于，所述步骤2虫草菌二级扩种液体培养中，接种后摇床培养为130?150转/min摇床培养48小时。
3.根据权利要求1所述的高虫草素富硒虫草培植方法，其特征在于，所述步骤2中的虫草菌二级扩种液体培养步骤中，每200ml液体培养基接种一级固体培养得到的菌丝体3-3.5g。
4.根据权利要求1所述的高虫草素富硒虫草培植方法，其特征在于，所述步骤3中虫草固体生产性培养，大米和营养液按重量比1:1.2的比例装入培养瓶中，封口，95-100°C蒸30-40分钟，冷却至室温待用。
5.根据权利要求1所述的高虫草素富硒虫草培植方法，其特征在于，所述步骤3中虫草固体生产性培养，用固体培养基接种二级扩种液体培养得到的培养液，接种量为每10g大米接种0.5ml培养液。
6.根据权利要求1所述的高虫草素富硒虫草培植方法，其特征在于，所述步骤3中虫草固体生产性培养，接种后放入培养暗室18?23°C避光培养8-10天。
【文档编号】A01G1/04GK104396571SQ201410775786
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年12月15日 优先权日:2014年12月15日
【发明者】梁金权 申请人:重庆综艺制药有限公司