一种蕙兰无毒苗培养繁殖方法与流程

文档序号:11781088阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种蕙兰无毒苗培养繁殖方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)植株热处理:将无病虫害长势良好的蕙兰放入培养箱中进行培养,培养期间,培养箱内湿度为80~90%,培养箱内温度开始时为30℃,每隔一天上升1℃,直至38℃,培养时间为22~25d,光照时间为16h/d,光照强度为3000~5000lx;

(2)材料选取:将上述热处理后的蕙兰从培养箱中取出,切取蕙兰的茎尖;

(3)材料消毒:将上述切取的茎尖用清水冲洗干净,冲洗后剥去外层叶片,在超净工作台上用体积分数为70%的酒精浸泡20~30s,然后用质量分数为0.2%的氯化汞溶液分2~3次共消毒5~6min,每次用氯化汞溶液消毒后用无菌水漂洗5次,并用消毒滤纸吸干表面水分;

(4)原球茎诱导培养:将上述消毒后的茎尖在解剖镜下剥离成长度为0.3~0.5mm的茎段,然后接种到诱导培养基中进行培养,所述诱导培养基为:B5培养基+0.3~0.7mg/L 6-BA+0.1~0.3mg/L IBA+0.2~0.3mg/L VC+0.05~0.15mg/L GA3,培养时间为22~25d,培养温度24~26℃,光照时间为12h/d,光照强度为1500~2000lx;培养时间结束后,再将培养材料整体移入新的诱导培养基中继续培养,培养时间为15~20d,培养温度24~26℃,光照时间为12h/d,光照强度为1500~2000lx;

(5)增殖继代培养:将培养后的原球茎在无菌工作台上进行分割,然后在接入到增殖培养基中继续培养,所述增殖培养基为:B5培养基+0.8~1.5mg/L6-BA+0.1~0.3mg/L NAA+8~12%椰汁,培养条件:培养温度24~26℃,光照时间为12h/d,光照强度为1500~2000lx;

(6)壮苗培养:增殖继代培养后,选择高2cm以上、基部有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养,所述壮苗培养基为:B5培养基+2~4mg/L NAA,培养时间为15~20d,培养温度24~26℃,光照时间为13h/d,光照强度为1800~21000lx;培养时间结束后,再向壮苗培养基中加入0.3%活性炭,培养温度27~29℃,光照时间为15h/d,光照强度为2500~3000lx;

(7)移栽:当试管苗生长至4~5cm高,根2~4条,叶1~2片时,将试管苗放在自然光下炼苗5~7天,打开瓶盖炼苗1~2天;然后取出培养苗,用清水洗净附着在根部的培养基,清洗时注意不要损害根部,然后移栽至水苔和腐殖土质量比为1:2的混合基质中,保持湿度和通风,空气湿度为75~85%,温度为20~25℃。

2.根据权利要求1所述的一种蕙兰无毒苗培养繁殖方法,其特征在于:所述材料消毒步骤中,每次用质量分数为0.2%的氯化汞溶液消毒时,向氯化汞溶液中加入一滴吐温-20。

3.根据权利要求1所述的一种蕙兰无毒苗培养繁殖方法,其特征在于:所述诱导培养基为:B5培养基+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA+0.25mg/L VC+0.1mg/LGA3。

4.根据权利要求1所述的一种蕙兰无毒苗培养繁殖方法,其特征在于:所述增殖培养基为:B5培养基+1mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+10%椰汁。

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