本发明涉及一种拟南芥的抑菌水培方法。
背景技术：
拟南芥属于被子植物门，双子叶植物纲。二年生草本，我国内蒙、新疆、陕西、甘肃、西藏、山东、江苏、安徽、湖北、四川、云南等省区均有发现。拟南芥的优点是植株小、结子多。拟南芥的基因组是目前已知植物基因组中最小的。拟南芥是自花受粉植物，基因高度纯合，用理化因素处理突变率很高，容易获得各种代谢功能的缺陷型。由于有上述这些优点，所以拟南芥是进行遗传学研究的好材料，被科学家誉为“植物中的果蝇”。在科学研究中经常需要用到拟南芥幼苗或者不同时期的小苗，由于水培拟南芥具有快速、方便、幼苗生长快且幼苗生长过程受到胁迫程度较低等原因，实验人员普遍倾向于水培拟南芥。但是，随着培养时间延长或者培养室使用时间较长，多会出现培养液中杂菌较多、污染严重，以致严重影响拟南芥幼苗生长，严重影响实验进度。
技术实现要素：
本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种拟南芥的抑菌水培方法。
本发明提供的技术方案为：
一种拟南芥的抑菌水培方法，包括如下步骤：
步骤一、将拟南芥种子放入质量体积浓度60％-90％的酒精溶液中浸泡10-30min，之后于温度0～4℃和黑暗条件下处理3～4天，置于固体培养基中培育成根长1.2cm以上的幼苗；
步骤二、将步骤一中得到的根长1.2cm以上的幼苗移至第一液体培养液中培养，并在该第一液体培养液的底层铺设一层蛭石，于温度18～22℃、湿度60％～80％、光照2000～3000lux和24h光照的条件下，培养10～15天，得到小苗；所述第一液体培养液包含：1/5～1/3MS，0.1-1.0mg/L 6-BA、0.05-0.5mg/L KT、0.1-0.5mg/L IAA和0.10％-0.40％(w/v)的贝壳碳酸钙；
步骤三、更换第二液体培养液，同时在该第二液体培养液的低层也铺设一层蛭石，于温度18～22℃、湿度60％～80％、光照2000～3000lux和24h光照的条件下，继续培养小苗10～15天；所述第二液体培养液包含：1/5～1/3MS，0.1-0.4mg/L KT，0.5-1.0mg/L 6-BA，0.1-0.8mg/L NAA和0.60％-0.90％(w/v)的蛋壳粉末；
步骤四、循环重复步骤二和步骤三，直至将拟南芥小苗培养至需求的时期。
优选的是，所述的拟南芥的抑菌水培方法中，所述固体培养基为1/2MS固体培养基。
优选的是，所述的拟南芥的抑菌水培方法中，所述第一液体和第二液体培养液中均还包含：3％～5％(v/v)的蒲公英汁，所述蒲公英汁为蒲公英挤压后过100目筛得到的液体。
优选的是，所述的拟南芥的抑菌水培方法中，所述第一液体培养液和第二液体培养液中蛭石层的厚度为对应的液体培养液深度的1/5～1/3。
优选的是，所述的拟南芥的抑菌水培方法中，步骤一中，酒精溶液与拟南芥种子的体积比为3:1。
优选的是，所述的拟南芥的抑菌水培方法中，所述第一液体培养液和第二液体培养液的液面高度为0.5～1m。
本发明至少包括以下有益效果：
本发明首先采用酒精溶液对种子进行浸泡，之后进行后续步骤，能够有效去除种子中的有害虫软及细菌等，去除种子中可能含有的细菌等，同时在固体培养基中萌发，进一步减少了在液体培养液中被污染的可能；
本发明的液体培养液中的第一混合物层还有蛭石和贝壳碳酸钙，一是能够吸收足够的营养液，保持培养中的液体湿度和营养成分，二是贝壳碳酸钙可有效抑制细菌的滋生，保持水体干净；第二混合物层中含有的蛋壳粉末同样也具有抑制细菌滋生的作用，同时这几种成分都能够促进植株的生长，一举多得；
本发明将蒲公英汁液运用于培养液中，能够有效抑制液体中杂菌和其他杂草的生长。
利用液体培养液循环培养至植株生长至需求的时期，获取到的材料生长一致、生长状态良好，无杂菌污染，为科学实验的精确研究做好良好的准备。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
本发明提供一种拟南芥的抑菌水培方法，包括如下步骤：
步骤一、将拟南芥种子放入质量体积浓度60％-90％的酒精溶液中浸泡10-30min，之后于温度0～4℃和黑暗条件下处理3～4天，置于固体培养基中培育成根长1.2cm以上的幼苗；
步骤二、将步骤一中得到的根长1.2cm以上的幼苗移至第一液体培养液中培养，并在该第一液体培养液的底层铺设一层蛭石，于温度18～22℃、湿度60％～80％、光照2000～3000lux和24h光照的条件下，培养10～15天，得到小苗；所述第一液体培养液包含：1/5～1/3MS，0.1-1.0mg/L 6-BA、0.05-0.5mg/L KT、0.1-0.5mg/L IAA和0.10％-0.40％(w/v)的贝壳碳酸钙；
步骤三、更换第二液体培养液，同时在该第二液体培养液的低层也铺设一层蛭石，于温度18～22℃、湿度60％～80％、光照2000～3000lux和24h光照的条件下，继续培养小苗10～15天；所述第二液体培养液包含：1/5～1/3MS，0.1-0.4mg/L KT，0.5-1.0mg/L 6-BA，0.1-0.8mg/L NAA和0.60％-0.90％(w/v)的蛋壳粉末；
步骤四、循环重复步骤二和步骤三，直至将拟南芥小苗培养至需求的时期。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述固体培养基为1/2MS固体培养基。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述第一液体培养液和第二液体培养液中均还包含：3％～5％(v/v)的蒲公英汁，所述蒲公英汁为蒲公英挤压后过100目筛得到的液体。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述第一液体培养液和第二液体培养液中蛭石层的厚度为对应的液体培养液深度的1/5～1/3。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，步骤一中，酒精溶液与拟南芥种子的体积比为3:1。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述第一液体培养液和第二液体培养液的液面高度为0.5～1m。
实施例1
一种拟南芥的抑菌水培方法，包括如下步骤：
步骤一、将拟南芥种子放入质量体积浓度60％的酒精溶液中浸泡10min，之后于温度0℃和黑暗条件下处理3天，置于固体培养基中培育成根长1.2cm以上的幼苗；所述固体培养基为1/2MS固体培养基。酒精溶液与拟南芥种子的体积比为3:1。
步骤二、将步骤一中得到的根长1.2cm以上的幼苗移至第一液体培养液中培养，并在该第一液体培养液的底层铺设一层蛭石，于温度18℃、湿度60％、光照2000lux和24h光照的条件下，培养10天，得到小苗；所述第一液体培养液包含：1/5MS，0.1mg/L 6-BA、0.05mg/L KT、0.1mg/L IAA和0.10％(w/v)的贝壳碳酸钙；
步骤三、更换第二液体培养液，同时在该第二液体培养液的低层也铺设一层蛭石，于温度18℃、湿度60％、光照2000lux和24h光照的条件下，继续培养小苗10天；所述第二液体培养液包含：1/5MS，0.1mg/L KT，0.5mg/L 6-BA，0.1mg/L NAA和0.60％(w/v)的蛋壳粉末；
步骤四、循环重复步骤二和步骤三，直至将拟南芥小苗培养至需求的时期。所述第一液体培养液和第二液体培养液中均还包含：3％(v/v)的蒲公英汁，所述蒲公英汁为蒲公英挤压后过100目筛得到的液体。所述第一液体培养液和第二液体培养液中蛭石层的厚度为对应的液体培养液深度的1/5。所述第一液体培养液和第二液体培养液的液面高度为0.5m。
实施例2
一种拟南芥的抑菌水培方法，包括如下步骤：
步骤一、将拟南芥种子放入质量体积浓度90％的酒精溶液中浸泡30min，之后于温度4℃和黑暗条件下处理4天，置于固体培养基中培育成根长1.2cm以上的幼苗；所述固体培养基为1/2MS固体培养基。酒精溶液与拟南芥种子的体积比为3:1。
步骤二、将步骤一中得到的根长1.2cm以上的幼苗移至第一液体培养液中培养，并在该第一液体培养液的底层铺设一层蛭石，于温度22℃、湿度80％、光照3000lux和24h光照的条件下，培养15天，得到小苗；所述第一液体培养液包含：1/3MS，1.0mg/L 6-BA、0.5mg/L KT、0.5mg/L IAA和0.40％(w/v)的贝壳碳酸钙；
步骤三、更换第二液体培养液，同时在该第二液体培养液的低层也铺设一层蛭石，于温度22℃、湿度80％、光照3000lux和24h光照的条件下，继续培养小苗15天；所述第二液体培养液包含：1/3MS，0.4mg/L KT，1.0mg/L 6-BA，0.8mg/L NAA和0.90％(w/v)的蛋壳粉末；
步骤四、循环重复步骤二和步骤三，直至将拟南芥小苗培养至需求的时期。所述第一液体培养液和第二液体培养液中均还包含：5％(v/v)的蒲公英汁，所述蒲公英汁为蒲公英挤压后过100目筛得到的液体。所述第一液体培养液和第二液体培养液中蛭石层的厚度为对应的液体培养液深度的1/3。所述第一液体培养液和第二液体培养液的液面高度为1m。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。