板蓝根的杂交方法与流程

本发明涉及杂交育种技术领域，具体而言，涉及板蓝根的杂交方法。

背景技术：

北板蓝根为十字花科植物，具有很强的清热、解毒和抗炎等效果，板蓝根注射液对甲型流感病毒、乙型脑炎病毒、腮腺炎病毒和流感病毒等有抑制感染作用，主要产于河北、江苏、安徽和陕西等地。南板蓝根为爵床科植物，其清热、解毒和抗炎等效果弱于北板蓝根，能治疗温疫时毒、发热咽痛、温毒发斑和丹毒等，主要产于福建、四川、云南、湖南、江西、贵州、广东和广西等地。

现有技术没有将板蓝根进行杂交的研究。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种板蓝根的杂交方法，将驯化的北板蓝根的花粉人工授粉于北板蓝根的花蕊，通过此方法得到的杂交板蓝根对环境的适应性有很大的增强，杂交板蓝根的产量有很大地提高。

本发明的另一目的在于提供一种板蓝根的杂交方法，将驯化的南板蓝根的花粉人工授粉于南板蓝根的花蕊，通过此方法得到的杂交板蓝根对环境的适应性有很大的增强，杂交板蓝根的产量有很大地提高。

本发明是采用以下技术方案实现的：

一种板蓝根的杂交方法，在北板蓝根抽薹现蕾前0.5-1天第一次喷施SX-1化学杂交剂，当北板蓝根开花以后，使用驯化的北板蓝根的花粉对第一次喷施后的北板蓝根进行人工授粉。

另一种板蓝根的杂交方法，在南板蓝根抽薹现蕾前1-2天第一次喷施SX-1化学杂交剂，当南板蓝根开花以后，使用驯化的南板蓝根的花粉对第一次喷施后的南板蓝根进行人工授粉。

本发明提供的一种板蓝根的杂交方法的有益效果为：在北板蓝根抽薹现蕾前0.5-1天，即北板蓝根即将开花的时候，进行喷施SX-1化学杂交剂，使北板蓝根的雄性花粉能够被杀死，避免北板蓝根进行自然授粉。当北板蓝根开花以后，喷施的SX-1化学杂交剂将北板蓝根的雄性花粉杀死，然后使用驯化的北板蓝根的花粉对喷施后的北板蓝根进行人工授粉，即使驯化的北板蓝根的花粉和北板蓝根的花蕊进行授粉，从而得到杂交板蓝根。杂交板蓝根的种植对地域的要求不严，对环境的适应性有很大的增强，且杂交板蓝根的产量有很大地提高。

本发明提供的另一种板蓝根的杂交方法的有益效果为：在南板蓝根抽薹现蕾前1-2天，即南板蓝根即将开花的时候，进行喷施SX-1化学杂交剂，使南板蓝根的雄性花粉能够被杀死，避免南板蓝根进行自然授粉。当南板蓝根开花以后，喷施的SX-1化学杂交剂将南板蓝根的雄性花粉杀死，然后使用驯化的南板蓝根的花粉对喷施后的南板蓝根进行人工授粉，即使驯化的南板蓝根的花粉和南板蓝根的花蕊进行授粉，从而得到杂交板蓝根。杂交板蓝根的种植对地域的要求不严，对环境的适应性有很大的增强，且杂交板蓝根的产量有很大地提高。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图也属于本发明的保护范围。

图1为本发明试验例1中提供的未喷施SX-1化学杂交剂的北板蓝根的花粉显微镜图像；

图2为本发明试验例1中提供的第一次喷施SX-1化学杂交剂后的北板蓝根的花粉显微镜图像；

图3为本发明试验例1中提供的第二次喷施SX-1化学杂交剂后的北板蓝根的花粉显微镜图像；

图4为本发明试验例2中提供的未喷施SX-1化学杂交剂的南板蓝根的花粉显微镜图像；

图5为本发明试验例2中提供的第一次喷施SX-1化学杂交剂后的南板蓝根的花粉显微镜图像；

图6为本发明试验例2中提供的第二次喷施SX-1化学杂交剂后的南板蓝根的花粉显微镜图像。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例的板蓝根的杂交方法进行具体说明。

一种板蓝根的杂交方法，在北板蓝根抽薹现蕾前0.5-1天第一次喷施SX-1化学杂交剂，当北板蓝根开花以后，使用驯化的北板蓝根的花粉对第一次喷施后的北板蓝根进行人工授粉。

在北板蓝根抽薹现蕾前0.5-1天，即北板蓝根即将开花的时候，进行喷施SX-1化学杂交剂，使北板蓝根的雄性花粉能够被杀死，避免北板蓝根进行自然授粉。当北板蓝根开花以后，喷施的SX-1化学杂交剂将北板蓝根的雄性花粉杀死，然后使用驯化的北板蓝根的花粉对喷施后的北板蓝根进行人工授粉，即使驯化的北板蓝根的花粉和北板蓝根的花蕊进行授粉，从而得到杂交板蓝根。杂交板蓝根的种植对地域的要求不严，对环境的适应性有很大的增强，且杂交板蓝根的产量有很大地提高。

其中，SX-1化学杂交剂为现有的杀死雄性花粉的化学杂交剂，为陕西省杂交油菜中心研究的新型化学杂交剂。驯化的北板蓝根为长期在南方种植的北板蓝根，其基因发生一定的变化，能够适应南方的生长环境，但其产量可能会受到一定的限制。

具体地，进行第一次喷施的时，北板蓝根的植株高度为10-30cm，当北板蓝根长至10-30cm的时候，其植株的高度基本不会再增加，而会生长花蕾，在还没有开花的时候进行第一次喷施，开花以后，第一次喷施的SX-1化学杂交剂就可以立即杀死北板蓝根的雄性花粉，以便后续进行杂交人工授粉。

本发明中，开花以后2-4天进行人工授粉，尽量使SX-1化学杂交剂将北板蓝根的雄性花粉全部杀死以后再进行授粉，并且，北板蓝根的花蕊完全成熟，以便得到的杂交板蓝根的纯度较高，并且其产量较高。

具体地，第一次喷施的SX-1化学杂交剂的浓度为4-5mg/kg，第一次喷施的SX-1化学杂交剂的量为200-250kg/hm²，其浓度和喷施的量可以杀死北板蓝根的雄性花粉的同时，避免SX-1化学杂交剂对北板蓝根的植株造成损伤。

为了使北板蓝根的雄性花粉全部被杀死，使北板蓝根在杂交过程中从始至终达到雄性不育，得到纯种的杂交板蓝根，当北板蓝根开花以后，还需要进行第二次喷施SX-1化学杂交剂，进行第二次喷施可以进一步杀死北板蓝根中残余的具有活性的花粉。

具体地，进行第二次喷施时，北板蓝根的花蕾直径为2-5cm，北板蓝根刚开始开花或已经完全开花，使第二次喷施的SX-1化学杂交剂可以直接喷施在已经开花的北板蓝根上，对北板蓝根的花粉进行直接杀死，使北板蓝根的雄性花粉全部杀死，避免北板蓝根自然授粉。

第二次喷施的SX-1化学杂交剂的浓度为6-7mg/kg，第二次喷施的SX-1化学杂交剂的量为250-300kg/hm²，其浓度和喷施的量可以杀死北板蓝根的雄性花粉的同时，避免SX-1化学杂交剂对北板蓝根的植株造成损伤。

第二次喷施的过程中，SX-1化学杂交剂的浓度和量都加大，是因为第二次喷施的过程中，北板蓝根已经开花，没有失活的北板蓝根的花粉已经成熟，需要相对较大的SX-1化学杂交剂的量才能将成熟的北板蓝根花粉杀死。

北板蓝根在生长的过程中，第二次喷施SX-1化学杂交剂2-4天以后能将北板蓝根的雄性花粉完全杀死，第二次喷施后2-4天使用驯化的北板蓝根的花粉对第二次喷施后的北板蓝根进行人工授粉，使人工授粉后得到的板蓝根为杂交板蓝根。

为了对北板蓝根的花蕊和植株进行保护，避免多次喷施SX-1化学杂交剂后对北板蓝根的花蕊和植株造成损坏，当北板蓝根开花之后，第二次喷施SX-1化学杂交剂之前，在北板蓝根上喷施NaCl溶液，可以直接喷施在北板蓝根的花朵中，对北板蓝根的植株尤其是北板蓝根的花蕊的非授粉部分进行保护，以免在喷施SX-1化学杂交剂时，喷施不够精确，导致非授粉部分(例如花萼、花托、花瓣)被喷施了大量的SX-1化学杂交剂，而SX-1化学杂交剂会使植物细胞中的叶绿素明显减少，降低其光合作用，进而影响蛋白质和碳水化合物的合成和运转，对花造成损伤。通过喷施NaCl溶液，由于非授粉部分的外部充斥较高浓度的NaCl溶液，非授粉部分的细胞极难将喷施到其表面的SX-1化学杂交剂通过渗透作用吸收进细胞内，起到一定的保护作用，当杀雄完成，使用清水将NaCl溶液和附着的残余杀雄剂冲掉即可。

优选地，NaCl溶液的质量百分数为0.55-0.60％，喷施的量为1000-2000kg/hm²，能够对北板蓝根植株提供一定的营养，并且能够对北板蓝根的植株和花蕊形成足够的保护。

本发明得到的杂交板蓝根，可以将驯化的北板蓝根50％的优良性状基因和北板蓝根50％的优良性状基因相结合，克服北板蓝根和驯化的北板蓝根原有的不良性状，使杂交板蓝根中的基因越多，具有更强的适应性或稳定性。得到的杂交板蓝根的种植对地域的要求不严，对环境的适应性有很大的增强，且杂交板蓝根的产量有很大地提高。

另一种板蓝根的杂交方法，在南板蓝根抽薹现蕾前1-2天第一次喷施SX-1化学杂交剂，当南板蓝根开花以后，使用驯化的南板蓝根的花粉对第一次喷施后的南板蓝根进行人工授粉。

在南板蓝根抽薹现蕾前1-2天，即南板蓝根即将开花的时候，进行喷施SX-1化学杂交剂，使南板蓝根的雄性花粉能够被杀死，避免南板蓝根进行自然授粉。当南板蓝根开花以后，喷施的SX-1化学杂交剂将南板蓝根的雄性花粉杀死，然后使用驯化的南板蓝根的花粉对喷施后的南板蓝根进行人工授粉，即使驯化的南板蓝根的花粉和南板蓝根的花蕊进行授粉，从而得到杂交板蓝根。杂交板蓝根的种植对地域的要求不严，对环境的适应性有很大的增强，且杂交板蓝根的产量有很大地提高。

其中，驯化的南板蓝根为长期在北方种植的南板蓝根，其基因发生一定的变化，能够适应北方的生长环境，但其产量可能会受到一定的限制。

具体地，进行第一次喷施的时，南板蓝根的植株高度为30-50cm，当南板蓝根长至30-50cm的时候，其植株的高度基本不会再增加，而会生长花蕾，在还没有开花的时候进行第一次喷施，开花以后，第一次喷施的SX-1化学杂交剂就可以立即杀死南板蓝根的雄性花粉，以便后续进行杂交人工授粉。

本发明中，开花以后3-7天进行人工授粉，尽量使SX-1化学杂交剂将南板蓝根的雄性花粉全部杀死以后再进行授粉，并且，南板蓝根的花蕊完全成熟，以便得到的杂交板蓝根的纯度较高，并且其产量较高。

具体地，第一次喷施的SX-1化学杂交剂的浓度为5-6mg/kg，第一次喷施的SX-1化学杂交剂的量为250-300kg/hm²，其浓度和喷施的量可以杀死南板蓝根的雄性花粉的同时，避免SX-1化学杂交剂对南板蓝根的植株造成损伤。

为了使南板蓝根的雄性花粉全部被杀死，使南板蓝根在杂交过程中从始至终达到雄性不育，得到纯种的杂交板蓝根，当南板蓝根开花以后，还需要进行第二次喷施SX-1化学杂交剂，进行第二次喷施可以进一步杀死南板蓝根中残余的具有活性的花粉。

具体地，进行第二次喷施时，南板蓝根的花蕾直径为3-8cm，南板蓝根刚开始开花或已经完全开花，使第二次喷施的SX-1化学杂交剂可以直接喷施在已经开花的南板蓝根上，对南板蓝根的花粉进行直接杀死，使南板蓝根的雄性花粉全部杀死，避免南板蓝根自然授粉。

第二次喷施的SX-1化学杂交剂的浓度为7-8mg/kg，第二次喷施的SX-1化学杂交剂的量为300-350kg/hm²，其浓度和喷施的量可以杀死南板蓝根的雄性花粉的同时，避免SX-1化学杂交剂对南板蓝根的植株造成损伤。

第二次喷施的过程中，SX-1化学杂交剂的浓度和量都加大，是因为第二次喷施的过程中，南板蓝根已经开花，没有失活的南板蓝根的花粉已经成熟，需要相对较大的SX-1化学杂交剂的量才能将成熟的南板蓝根花粉杀死。

南板蓝根在生长的过程中，第二次喷施SX-1化学杂交剂3-7天以后能将南板蓝根的雄性花粉完全杀死，第二次喷施后3-7天使用驯化的南板蓝根的花粉对第二次喷施后的南板蓝根进行人工授粉，使人工授粉后得到的板蓝根为杂交板蓝根。

为了对南板蓝根的花蕊和植株进行保护，避免多次喷施SX-1化学杂交剂后对南板蓝根的花蕊和植株造成损坏，当南板蓝根开花之后，第二次喷施SX-1化学杂交剂之前，在南板蓝根上喷施NaCl溶液，可以直接喷施在南板蓝根的花朵中，对南板蓝根的植株尤其是南板蓝根的花蕊的非授粉部分进行保护，以免在喷施SX-1化学杂交剂时，喷施不够精确，导致非授粉部分(例如花萼、花托、花瓣)被喷施了大量的SX-1化学杂交剂，而SX-1化学杂交剂会使植物细胞中的叶绿素明显减少，降低其光合作用，进而影响蛋白质和碳水化合物的合成和运转，对花造成损伤。通过喷施NaCl溶液，由于非授粉部分的外部充斥较高浓度的NaCl溶液，非授粉部分的细胞极难将喷施到其表面的SX-1化学杂交剂通过渗透作用吸收进细胞内，起到一定的保护作用，当杀雄完成，使用清水将NaCl溶液和附着的残余杀雄剂冲掉即可。

优选地，NaCl溶液的质量百分数为0.55-0.60％，喷施的量为1000-2000kg/hm²，能够对南板蓝根植株提供一定的营养，并且能够对南板蓝根的植株和花蕊形成足够的保护。

本发明得到的杂交板蓝根，可以将驯化的南板蓝根50％的优良性状基因和南板蓝根50％的优良性状基因相结合，克服南板蓝根和驯化的南板蓝根原有的不良性状，使杂交板蓝根中的基因越多，具有更强的适应性或稳定性。得到的杂交板蓝根的种植对地域的要求不严，对环境的适应性有很大的增强，且杂交板蓝根的产量有很大地提高。

对于北板蓝根和南板蓝根，其每次喷施的SX-1化学杂交剂的浓度和喷施的量都不同，还有其喷施SX-1化学杂交剂后与人工授粉的间隔时间不同，是因为北板蓝根为十字花科植物，南板蓝根为爵床科植物，其性质不同，开花的花期和植株的生长情况也不同，所以，SX-1化学杂交剂的浓度和喷施的量都不同。

实施例1

在北板蓝根抽薹现蕾前0.5天第一次喷施浓度为4mg/kg、量为250kg/hm²的SX-1化学杂交剂，在北板蓝根开花以后2天，使用驯化的北板蓝根花粉对第一次喷施以后的北板蓝根进行人工授粉得到杂交板蓝根。

实施例2

在北板蓝根抽薹现蕾前1天第一次喷施浓度为5mg/kg、量为200kg/hm²的SX-1化学杂交剂，在北板蓝根开花以后，第二次喷施浓度为6mg/kg、量为300kg/hm²的SX-1化学杂交剂，并在第二次喷施以后4天使用驯化的北板蓝根花粉对第二次喷施以后的北板蓝根进行人工授粉得到杂交板蓝根。

实施例3

在北板蓝根抽薹现蕾前0.7天第一次喷施浓度为4.5mg/kg、量为220kg/hm²的SX-1化学杂交剂，在北板蓝根开花以后，喷施质量百分数为0.55％、量为2000kg/hm²的NaCl溶液，后第二次喷施浓度为7mg/kg、量为250kg/hm²的SX-1化学杂交剂，并在第二次喷施以后3天使用驯化的北板蓝根花粉对第二次喷施以后的北板蓝根进行人工授粉得到杂交板蓝根。

实施例4

在南板蓝根抽薹现蕾前1天第一次喷施浓度为5mg/kg、量为300kg/hm²的SX-1化学杂交剂，在南板蓝根开花以后3天，使用驯化的南板蓝根花粉对第一次喷施以后的南板蓝根进行人工授粉得到杂交板蓝根。

实施例5

在南板蓝根抽薹现蕾前2天第一次喷施浓度为6mg/kg、量为250kg/hm²的SX-1化学杂交剂，在南板蓝根开花以后，第二次喷施浓度为7mg/kg、量为350kg/hm²的SX-1化学杂交剂，并在第二次喷施以后7天使用驯化的南板蓝根花粉对第二次喷施以后的南板蓝根进行人工授粉得到杂交板蓝根。

实施例6

在南板蓝根抽薹现蕾前1.5天第一次喷施浓度为5.5mg/kg、量为270kg/hm²的SX-1化学杂交剂，在南板蓝根开花以后，喷施质量百分数为0.60％、量为1000kg/hm²的NaCl溶液，后第二次喷施浓度为8mg/kg、量为300kg/hm²的SX-1化学杂交剂，并在第二次喷施以后5天使用驯化的南板蓝根花粉对第二次喷施以后的南板蓝根进行人工授粉得到杂交板蓝根。

试验例1

本试验例主要是对未喷施SX-1化学杂交剂的北板蓝根花粉Ⅰ、经过第一次喷施SX-1化学杂交剂后的北板蓝根花粉Ⅱ和经过第二次喷施SX-1化学杂交剂后的北板蓝根花粉Ⅲ的花粉活性的测试。

本试验例通过染色法对花粉活性进行测试，染色法又称夏尔达柯夫法，因为有生活力的花粉粒中含有过氧化物酶，它能促使从过氧化物中放出活性氧。这种活性氧是在花粉萌芽时所进行的许多综合反应所必需的，所以通过过氧化物酶的测定，即可测定花粉是否具有生活力。

在应用这种方法测定花粉生活力时，为了测定过氧化物酶的存在，必须预先配制下面几种溶液：(1)、将0.20g联苯胺溶于100ml纯度为50％的酒精中；(2)、将0.15g萘酚溶于100ml纯度为50％的酒精中；(3)、将0.25g碳酸钠溶于100ml蒸馏水中；(4)、在测试前准备纯度为0.3％的过氧化氢溶液。

测试前，将前述(1)、(2)和(3)三种溶液等体积混合得到混合溶液，并准备好前述(4)溶液。上述混合溶液和(4)溶液均需要现场配置使用，避免溶液变质。

测试时，放置三块载玻片，分别在载玻片上放置少量待测花粉Ⅰ或Ⅱ或Ⅲ，并在每一个载玻片上滴一滴上述配置的混合溶液和(4)溶液。然后分别使用玻璃针把待测花粉Ⅰ或Ⅱ或Ⅲ与滴在载玻片上的溶液仔细混合，并盖上盖玻片(为了消除在盖玻片下所形成的气泡，必须提起盖玻片，并重复地用玻璃针混合测花粉Ⅰ或Ⅱ或Ⅲ与试剂)，经过3-4分钟后，在显微镜下观察。凡具有生活力的花粉，因含有过氧化物酶便染成红色或玫瑰色，而不具有生活力的花粉，因其不含过氧化物酶，则仍然为黄色或无色。

其中，图1为待测花粉Ⅰ测试后获得的图像，图2为待测花粉Ⅱ测试后获得的图像，图3为待测花粉Ⅲ测试后获得的的图像。图1中全部花粉粒的颜色均显示为红色，图2中多数花粉粒的颜色为无色或黄色，少数花粉粒的颜色为红色，图3中全部花粉粒的颜色均为无色或黄色，没有红色出现。即图1中花粉粒的颜色较浅，图2中多数花粉粒的颜色变深，少数花粉粒的颜色依然较浅，图3中全部花粉粒的颜色都较深。

由上述测试结果可知，SX-1化学杂交剂能够杀死北板蓝根的花粉，使北板蓝根的花粉失活，第一次喷施SX-1化学杂交剂就能够使北板蓝根的多数花粉粒失活，从而避免北板蓝根本身自然授粉，而使驯化的北板蓝根的花粉与北板蓝根的花蕊进行人工授粉。第二次喷施SX-1化学杂交剂就能够使北板蓝根的花粉粒全部失活，从而使驯化的北板蓝根的花粉与北板蓝根的花蕊进行人工授粉后得到的板蓝根全部为杂交板蓝根。

试验例2

本试验例主要是对未喷施SX-1化学杂交剂的南板蓝根花粉Ⅳ、经过第一次喷施SX-1化学杂交剂后的南板蓝根花粉Ⅴ和经过第二次喷施SX-1化学杂交剂后的南板蓝根花粉Ⅵ的花粉活性的测试。

其测试方法与试验例1中的方法相同，得到图4为待测花粉Ⅳ测试后获得的图像，图5为待测花粉Ⅴ测试后获得的图像，图6为待测花粉Ⅵ测试后获得的的图像。图4中全部花粉粒的颜色均显示为红色，图5中多数花粉粒的颜色为无色或黄色，少数花粉粒的颜色为红色，图6中全部花粉粒的颜色均为无色或黄色，没有红色出现。即图4中花粉粒的颜色较浅，图5中多数花粉粒的颜色变深，少数花粉粒的颜色依然较浅，图6中全部花粉粒的颜色都较深。

由上述测试结果可知，SX-1化学杂交剂能够杀死南板蓝根的花粉，使南板蓝根的花粉失活，第一次喷施SX-1化学杂交剂就能够使南板蓝根的多数花粉粒失活，从而避免南板蓝根本身自然授粉，而使驯化的南板蓝根的花粉与南板蓝根的花蕊进行人工授粉。第二次喷施SX-1化学杂交剂就能够使南板蓝根的花粉粒全部失活，从而使驯化的南板蓝根的花粉与南板蓝根的花蕊进行人工授粉后得到的板蓝根全部为杂交板蓝根。

以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。