本发明涉及植物繁殖技术领域，特别涉及一种药用白芨无菌播种快速育苗方法。
背景技术：
白芨是兰科白芨属的一种，也称白及。多年生草本，高20～50厘米，叶4～5枚，基部互相套叠成茎状，中央抽出花葶。总状花序具数朵花；花紫色或淡红色，直径约5厘米，由3枚萼片、2枚花瓣和1枚特化的唇瓣组成；唇瓣3裂，上面有纵褶片；雄蕊与花柱合生而成合蕊柱，合蕊柱顶端有一个花药，前上方有一个柱头凹穴。地下有粗厚的根状茎，如鸡头状，富粘性，含白及胶质，即白及甘露聚糖，可供药用，有止血补肺、生肌止痛之效，也可供作糊料。
目前，公告号为cn106416972a的中国专利公开了一种快速培养白芨种苗的方法，它包括将白芨的种子经萌发培养、原球茎分化培养、鳞茎诱导培养和驯化后，得到白芨幼苗的方法。
这种快速培养白芨种苗的方法虽然整齐性较好，变异几率小，但是其主要通过剖开白芨无菌塑果，从而取出种子直接在萌发液体培养基上进行培养从而得到白芨原球茎，但是这种种植方式是通过将种子放置在培养基内从而进行繁殖培育，但是很难进行大规模种植，对于工厂化、商业化繁育培植来说较为困难。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种药用白芨无菌播种快速育苗方法，其具有可以满足白芨大规模种植对商业种苗繁育需要，通过使用上述育苗方式，可以使得白芨育苗繁殖工厂化、规模化的优点。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
一种药用白芨无菌播种快速育苗方法，包括如下培养步骤：
s1：外植体选取：选用结实的白芨果荚，在果荚成熟开裂前采收，选用表面无裂缝的果荚作为外植体；
s2：外植体消毒，使用酒精棉擦拭外植体表面的灰尘，使用消毒水对外植体进行浸泡，浸泡30～60分钟，浸泡消毒完成后使用无菌水对外植体进行冲洗，冲洗3～4次；
s3：启动培养，将消毒后的外植体沿中间部位切开，切成1cm～2cm的节段，用镊子夹住外植体在培养基瓶口上方轻轻抖动数下，将果荚内成黄色的粉末状裸胚接种到启动培养基中，转入培养室进行培养；对培养室进行光照，在培养4～8周后，休眠腋芽萌发，裸胚由黄色转为绿色膨大个体时，继续进行培养4～10周，使得萌芽裸胚继续增大，完成启动培养；
s4：壮苗培养，将萌发的裸胚接种于固体壮苗培养基中，暗培养2～7天，然后给予光照，培养8～16周后，裸胚进一步发育并长出真叶；
s5：生根培养，将经过壮苗培养的无根组培苗，用勺子舀出，平铺于生根培养基中培养，暗培养2～7天，给予光照，培养8～16周，完成生根。
通过采用上述技术方案，常规育苗方式是靠低下根状茎分株繁殖，繁殖系数低，繁殖速度缓慢，无法满足大规模种植需求；其种子为不具胚乳的裸胚，自然条件下不具有存活力，因此现有技术将种子直接放置在培养基上，从而提供种子营养使得种子生长成白芨原球茎，通过种子进行培养，本发明通过将种子剖开，从而使得裸胚直接与启动培养基接触，从而通过对裸胚的培育，使得裸胚萌芽，启动培养基可以快速打破裸胚休眠，促进裸胚萌发，同时能够有效促使愈伤组织的产生，在培养一段时间后将萌芽的裸胚放入壮苗培养基中，使得萌芽的裸胚长出真叶，壮苗培养基可以保障萌芽裸胚的生长人为可控，在苗长高，长出真叶的同时抑制根系生长，便于后续转瓶分株操作，由于白芨的种子去除后容易失水干瘪，从而使得种子散失生命力，通过裸胚与启动培养基的直接接触，从而使得出苗率达到100％，同时可以使得萌芽快速生长出苗，出苗越快，苗越壮大，因此使用该方法可以快速大规模的培养白芨，从而使得培育白芨可以工厂化，规模化，而在培育过程中，首先外植体的选择应当选择当年春末夏初人工授粉并成功结实的果荚，在9月中下旬果荚成熟开裂前采收，选取果荚个大，下垂，没开裂的果荚为外植体，避免开裂的外植体被细菌等入侵到内部，其次对外植体进行消毒，保证在培养过程中培养基等不会被外植体所携带的病菌侵蚀，从而再进行进一步的启动、壮苗及生根培养。
进一步设置：所述消毒液包括如下组份：漂白水1份及4份无菌水。
通过采用上述技术方案，需要对外植体进行有效的消毒，将外植体表面携带的病菌深层次的去除，使得后期培育时减少出现因为被病菌侵蚀而出现失败的可能。
进一步设置：所述启动培养阶段的培养室内温度为25℃，光照强度2000lux，光照16小时，暗培养8小时，培养6周，裸胚由黄色转为绿色膨大个体时，继续培养8周，完成启动培养。
通过采用上述技术方案，在启动培养阶段，需要将通过合适的环境打破裸胚休眠，促进裸胚萌发，通过光照作用使得裸胚进行光合作用，而暗培养则是胚芽进行呼吸作用，从而通过控制光周期的时间以及光照强度，选择最为合适裸胚生长萌芽的光周期，从而使得裸胚萌芽，直至从黄色转变为绿色膨大个体。
进一步设置：所述s5中培养环境为温度25℃，暗培养5天，给予光照，光照强度1500lux，光照周期为每天光照16小时，暗培养8小时，培养12周。
通过采用上述技术方案，当萌芽的裸胚需要进行壮苗时，放入壮苗培养基内，给予光照，使其快速生长，呼吸作用和光合作用的不断交替，从而使得长出的苗较为高大，同时整体生长良好。
进一步设置：所述无根组培苗为高度1～1.5cm的壮苗，用勺子舀出，平铺于生根培养基中培养，暗培养5天，然后给予光照，光照强度2000lux，光照周期为每天16小时光照，8小时暗培养，环境温度控制在25℃，培养12周，完成生根通过采用上述技术方案，对无根组培苗进行培养后将其移到生根培养基中进行生根。
进一步设置：所述启动培养基包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；6-苄氨基腺嘌呤：1.0～3.5mg/l；蔗糖：15～45g/l；琼脂：5.5～7.0g/l。
通过采用上述技术方案，ms培养基其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，用其主要作为培养基的基本培养基，6-苄氨基腺嘌呤具有高效、稳定、廉价和易于使用等特点，6-苄氨基腺嘌呤的主要作用是促进芽的形成，也可以诱导愈伤组织发生，而加入琼脂的固体培养基与液体培养基相比优点在于操作简便，通气问题易于解决，便于经常观察研究，而蔗糖则作为培养基的标准碳源，供给细胞生长所需要的养分。
进一步设置：所述壮苗培养基包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；6-苄氨基腺嘌呤：0.5～1.5mg/l；蔗糖：20～30g/l；琼脂：5.0～7.0g/l。
通过采用上述技术方案，该配方能够保障萌芽裸胚的生长人为可控，在苗长高，并长出真叶的同时抑制根系生长，便于后续转瓶分株操作，通过分株的操作使其可以大规模生产。
进一步设置：所述生根培养基主要包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；萘乙酸：1～3.0mg/l；活性炭：0.5～1.0g/l；蔗糖：15～30g/l；琼脂：5.0～7.0g/l。
通过采用上述技术方案，配方和操作方式能够保障种苗充分生根，并且根系都位于培养基表面，便于在移栽时取苗，降低损伤，促进快速成活，活性炭由于其本身为吸附性较强的吸附剂，可以更好的减轻外植体的褐变现象。
综上所述，本发明具有以下有益效果：通过上述种植方式可以满足白芨大规模种植对商业种苗繁育的需要，并通过裸胚培育使得生根率达到100％，远高于现有技术，有效满足白芨工厂化、规模化的培育。
具体实施方式
以下对本发明作进一步详细说明。
实施例1：一种药用白芨无菌播种快速育苗方法，包括如下培养步骤：
s1：外植体选取：选用结实的白芨果荚，在果荚成熟开裂前采收，选用表面无裂缝的果荚作为外植体；
s2：外植体消毒，使用酒精棉擦拭外植体表面的灰尘，使用消毒水对外植体进行浸泡，浸泡30～60分钟，浸泡消毒完成后使用无菌水对外植体进行冲洗，冲洗3～4次，取出放无菌滤纸上吸干明水备用；
s3：启动培养，将消毒后的外植体沿中间部位切开，切成1cm～2cm的节段，用镊子夹住外植体在培养基瓶口上方轻轻抖动数下，将果荚内成黄色的粉末状裸胚接种到芽启动培养基中，转入培养室进行培养，启动培养基包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；6-苄氨基腺嘌呤：3.0mg/l；蔗糖：30g/l；琼脂：6.0g/l；对培养室进行光照，培养室内温度为25℃，光照强度2000lux，光照16小时，暗培养8小时，培养6周，裸胚由黄色转为绿色膨大个体时，继续培养8周，使得萌芽裸胚继续增大，完成启动培养；
s4：壮苗培养，将萌发的裸胚接种于固体壮苗培养基中，壮苗培养基包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；6-苄氨基腺嘌呤：1.0mg/l；蔗糖：20g/l；琼脂：6.0g/l，温度25℃，暗培养5天，给予光照，光照强度1500lux，光照周期为每天光照16小时，暗培养8小时，培养12周，使壮苗长出真叶；
s5：生根培养，选取无根组培苗为高度1cm的壮苗，用勺子舀出，平铺于生根培养基中培养，生根培养基主要包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；萘乙酸：2.0mg/l；活性炭：0.8g/l；蔗糖：20g/l；琼脂：6.0g/l，暗培养5天，然后给予光照，光照强度2000lux，光照周期为每天16小时光照，8小时暗培养，环境温度控制在25℃，培养12周完成生根。
实施例2：一种药用白芨无菌播种快速育苗方法，包括如下培养步骤：
s1：外植体选取：选用结实的白芨果荚，在果荚成熟开裂前采收，选用表面无裂缝的果荚作为外植体；
s2：外植体消毒，使用酒精棉擦拭外植体表面的灰尘，使用消毒水对外植体进行浸泡，浸泡30～60分钟，浸泡消毒完成后使用无菌水对外植体进行冲洗，冲洗3～4次，取出放无菌滤纸上吸干明水备用；
s3：启动培养，将消毒后的外植体沿中间部位切开，切成1cm～2cm的节段，用镊子夹住外植体在培养基瓶口上方轻轻抖动数下，将果荚内成黄色的粉末状裸胚接种到芽启动培养基中，转入培养室进行培养，启动培养基包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；6-苄氨基腺嘌呤：3.5mg/l；蔗糖：45g/l；琼脂：7.0g/l；对培养室进行光照，培养室内温度为25℃，光照强度2000lux，光照16小时，暗培养8小时，培养6周，裸胚由黄色转为绿色膨大个体时，继续培养8周，使得萌芽裸胚继续增大，完成启动培养；
s4：壮苗培养，将萌发裸胚接种于固体壮苗培养基中，壮苗培养基包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；6-苄氨基腺嘌呤：1.5mg/l；蔗糖：30g/l；琼脂：7.0g/l，温度25℃，暗培养5天，给予光照，光照强度1500lux，光照周期为每天光照16小时，暗培养8小时，培养12周，使壮苗长出真叶；
s5：生根培养，选取无根组培苗为高度1cm的壮苗，用勺子舀出，平铺于生根培养基中培养，生根培养基主要包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；萘乙酸：1～3.0mg/l；活性炭：1.0g/l；蔗糖：30g/l；琼脂：7.0g/l，暗培养5天，然后给予光照，光照强度2000lux，光照周期为每天16小时光照，8小时暗培养，环境温度控制在25℃，培养12周完成生根。
实施例3：一种药用白芨无菌播种快速育苗方法，包括如下培养步骤：
s1：外植体选取：选用结实的白芨果荚，在果荚成熟开裂前采收，选用表面无裂缝的果荚作为外植体；
s2：外植体消毒，使用酒精棉擦拭外植体表面的灰尘，使用消毒水对外植体进行浸泡，浸泡30～60分钟，浸泡消毒完成后使用无菌水对外植体进行冲洗，冲洗3～4次，取出放无菌滤纸上吸干明水备用；
s3：启动培养，将消毒后的外植体沿中间部位切开，切成1cm～2cm的节段，用镊子夹住外植体在培养基瓶口上方轻轻抖动数下，将果荚内成黄色的粉末状裸胚接种到芽启动培养基中，转入培养室进行培养，启动培养基包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；6-苄氨基腺嘌呤：1.0mg/l；蔗糖：15g/l；琼脂：5.5g/l；对培养室进行光照，培养室内温度为25℃，光照强度2000lux，光照16小时，暗培养8小时，培养6周，裸胚由黄色转为绿色膨大个体时，继续培养8周，使得萌芽裸胚继续增大，完成启动培养；
s4：壮苗培养，将萌发的裸胚接种于固体壮苗培养基中，壮苗培养基包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；6-苄氨基腺嘌呤：0.50mg/l；蔗糖：20g/l；琼脂：5.0g/l，温度25℃，暗培养5天，给予光照，光照强度1500lux，光照周期为每天光照16小时，暗培养8小时，培养12周，使壮苗长出真叶；
s5：生根培养，选取无根组培苗为高度1cm的壮苗，用勺子舀出，平铺于生根培养基中培养，生根培养基主要包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；萘乙酸：1.0mg/l；活性炭：0.5g/l；蔗糖：15g/l；琼脂：5.0g/l，暗培养5天，然后给予光照，光照强度2000lux，光照周期为每天16小时光照，8小时暗培养，环境温度控制在25℃，培养12周完成生根。
实施例4：一种药用白芨无菌播种快速育苗方法，包括如下培养步骤：
s1：外植体选取：选用结实的白芨果荚，在果荚成熟开裂前采收，选用表面无裂缝的果荚作为外植体；
s2：外植体消毒，使用酒精棉擦拭外植体表面的灰尘，使用消毒水对外植体进行浸泡，浸泡30～60分钟，浸泡消毒完成后使用无菌水对外植体进行冲洗，冲洗3～4次，取出放无菌滤纸上吸干明水备用；
s3：启动培养，将消毒后的外植体沿中间部位切开，切成1cm～2cm的节段，用镊子夹住外植体在培养基瓶口上方轻轻抖动数下，将果荚内成黄色的粉末状裸胚接种到芽启动培养基中，转入培养室进行培养，启动培养基包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；6-苄氨基腺嘌呤：3.0mg/l；蔗糖：30g/l；琼脂：6.0g/l；对培养室进行光照，培养室内温度为25℃，光照强度2000lux，光照16小时，暗培养8小时，培养4周，裸胚由黄色转为绿色膨大个体时，继续培养4周，使得萌芽裸胚继续增大，完成启动培养；
s4：壮苗培养，将萌发的裸胚接种于固体壮苗培养基中，壮苗培养基包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；6-苄氨基腺嘌呤：1.0mg/l；蔗糖：20g/l；琼脂：6.0g/l，温度25℃，暗培养2天，给予光照，光照强度1500lux，光照周期为每天光照12小时，暗培养12小时，培养8周，使壮苗长出真叶；
s5：生根培养，选取组培苗为高度1cm的壮苗，用勺子舀出，平铺于生根培养基中培养，生根培养基主要包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；萘乙酸：2.0mg/l；活性炭：0.8g/l；蔗糖：20g/l；琼脂：6.0g/l，暗培养5天，然后给予光照，光照强度2000lux，光照周期为每天12小时光照，12小时暗培养，环境温度控制在25℃，培养8周完成生根。
实施例5：一种药用白芨无菌播种快速育苗方法，包括如下培养步骤：
s1：外植体选取：选用结实的白芨果荚，在果荚成熟开裂前采收，选用表面无裂缝的果荚作为外植体；
s2：外植体消毒，使用酒精棉擦拭外植体表面的灰尘，使用消毒水对外植体进行浸泡，浸泡30～60分钟，浸泡消毒完成后使用无菌水对外植体进行冲洗，冲洗3～4次，取出放无菌滤纸上吸干明水备用；
s3：启动培养，将消毒后的外植体沿中间部位切开，切成1cm～2cm的节段，用镊子夹住外植体在培养基瓶口上方轻轻抖动数下，将果荚内成黄色的粉末状裸胚接种到芽启动培养基中，转入培养室进行培养，启动培养基包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；6-苄氨基腺嘌呤：3.0mg/l；蔗糖：30g/l；琼脂：6.0g/l；对培养室进行光照，培养室内温度为25℃，光照强度2000lux，光照20小时，暗培养4小时，培养8周，裸胚由黄色转为绿色膨大个体时，继续培养10周，使得萌芽裸胚继续增大，完成启动培养；
s4：壮苗培养，将萌发的裸胚接种于固体壮苗培养基中，壮苗培养基包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；6-苄氨基腺嘌呤：1.0mg/l；蔗糖：20g/l；琼脂：6.0g/l，温度25℃，暗培养7天，给予光照，光照强度1500lux，光照周期为每天光照20小时，暗培养4小时，培养16周，使壮苗长出真叶；
s5：生根培养，选取组培苗为高度1.5cm的壮苗，用勺子舀出，平铺于生根培养基中培养，
生根培养基主要包括以下组份：每升水中添加ms培养基：4.7g/l；萘乙酸：2.0mg/l；活性炭：0.8g/l；蔗糖：20g/l；琼脂：6.0g/l，暗培养5天，然后给予光照，光照强度2000lux，光照周期为每天20小时光照，4小时暗培养，环境温度控制在25℃，培养16周完成生根。
将上述实施例1至实施例5在对外植体消毒后进行病毒检测，同时观察裸胚放入启动培养基后观察萌芽裸胚的生长情况，放入壮苗培养基内的真叶生长情况，放入生根培养基后的苗高情况及生根系数进行分析对比，结果如下表所示：
从上表可以得出，通过上述繁殖方式以及运用合适启动培养基、壮苗培养基及生根培养基，可以快速繁殖白芨，生根率达到100％，同时有效健壮根1～3条，根长20～40mm，根粗1～2mm，苗高3～5cm，完全适合白芨的工厂化生产，有利于大规模生产优质椴树种苗。
上述的实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。