一种促进非洲菊组培移栽苗生根的方法与流程

本发明涉及非洲菊育苗技术领域，尤其涉及一种促进非洲菊组培移栽苗生根的方法。

背景技术：

非洲菊为菊科多年生草本植物，是世界五大切花之一。非洲菊自花不授粉，传统非洲菊生产常采用分株繁殖的方法进行繁殖，但分株繁殖繁殖系数较低、易积累病害、分株后代生长不齐、苗弱、品种易退化。组培苗具有遗传性状稳定、长势均匀一致、生长快、抗逆能力强的优点，因此目前国内外非洲菊生产多采用组培苗。组培移栽苗若根系发育不好，将严重影响植株生长、降低其商品价值，多次继代的组培移栽苗更是会出现根系弱、生长缓慢、长势弱等问题，因此生产中大多需要每隔一段时间重新诱导一次而不是使用多次继代的组培苗。因此采取某些手段促进非洲菊组培移栽苗生根对非洲菊工厂化生产具有一定的意义。

印度梨形孢是一种可以人工培养的类丛枝菌根真菌，众多研究表明它对植物根系的形成、植株生长、植株抗性能力具有明显的促进作用。但目前尚无其在非洲菊生产中应用的报道。利用印度梨形孢促进非洲菊组培移栽苗生根一旦被证实可行，将会具有较大的生产应用价值和经济价值。本发明提供了一种利用印度梨形孢促进非洲菊组培移栽苗生根和恢复多次继代的非洲菊组培移栽苗根系活力的方法。

技术实现要素：

本发明提供了一种促进非洲菊组培移栽苗生根的方法，能够有效地解决非洲菊组培移栽苗根系发育较差及有其产生的一系列问题。

本发明的技术方案：

一种促进非洲菊组培移栽苗生根的方法，包括印度梨形孢发酵液的制备、非洲菊组培苗的移栽、印度梨形孢发酵液浇灌，之后验证印度梨形孢发酵液促进生根的效果。通过浇灌印度梨形孢，利用印度梨形孢促进非洲菊组培移栽苗生根、改善根系、进而促进植株生长，此外本发明还可较好地多次继代引起的再生植株根系弱、生长缓慢、苗弱、成活率低等问题，对非洲菊植株商品价值的提升具有重要意义。本发明步骤简单、可操作性强、效果显著。

具体方法为：

（1）印度梨形孢发酵液的制备

活化印度梨形孢菌株，然后挑取菌落边缘部分的气生菌丝接种于pda固体培养基上；放置于28℃的黑暗培养箱内培养5d，挑取菌丝于装有100ml灭菌的pda液体培养基的250ml三角瓶内，在温度为28℃，转速为120r/min的摇床内培养3天，经单层纱布过滤后收集滤液，用水稀释至孢子浓度为2×10⁷个/ml，获得印度梨形孢发酵液。

（2）非洲菊组培苗的移栽

选取连续继代了5-20代的在生根培养基中培养了30天高度为3~4cm的非洲菊组培苗；开盖炼苗2天后移栽至装有盆体积3/4的腐殖质的花盆中，每盆一株；所用花盆直径为10cm、高度为10cm。

（3）印度梨形孢发酵液浇灌

向非洲菊组培移栽苗根系附近浇入50ml印度梨形孢发酵液。置于25±2℃的恒温培养室内培养，培养室光照强度为1300±200lx，光照时间为12h/d。

本发明具有以下优点：

1、本发明所用印度梨形孢是一种可以人工培养的类菌根真菌，扩繁简单。

2、印度梨形孢发酵液制备工艺简单，可操作性强，能在较短时间内获得大量发酵液。

3、印度梨形孢发酵液浇灌操作简单。

4、本发明可以促进非洲菊组培移栽苗根系生长，可提高非洲菊的质量和商品价值。

5、本发明可以恢复多次继代的非洲菊组培移栽苗根系活力，可有效解决由于多次继代引起的再生植株根系弱、生长缓慢、苗弱、成活率低等问题，具有较大的生产实践应用价值和经济价值。

附图说明

图1移栽后30天（a）和90天（b）的继代5代的非洲菊植株，从左到右依次为：印度梨形孢发酵液处理组、灭菌的印度梨形孢发酵液处理组和pda液体培养基对照组。

图2移栽后30天（a）和90天（b）的继代10代的非洲菊植株，从左到右依次为：印度梨形孢发酵液处理组、灭菌的印度梨形孢发酵液处理组和pda液体培养基对照组。

图3移栽后30天（a）和90天（b）的继代15代的非洲菊植株，从左到右依次为：印度梨形孢发酵液处理组、灭菌的印度梨形孢发酵液处理组和pda液体培养基对照组。

图4移栽后30天（a）和90天（b）的继代20代的非洲菊植株，从左到右依次为：印度梨形孢发酵液处理组、灭菌的印度梨形孢发酵液处理组和pda液体培养基对照组。

图5继代20代的无印度梨形孢处理的非洲菊植株（a）和有印度梨形孢处理的非洲菊植株成活情况（b）。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明的技术方案作进一步说明，但本发明并不仅限于此。

实施例1

1、印度梨形孢发酵液的制备

活化印度梨形孢菌株，然后挑取菌落边缘部分的气生菌丝接种于新的pda固体培养基上。放置于28℃的黑暗培养箱内培养5d，挑取菌丝于装有100ml灭菌的pda液体培养基的250ml三角瓶内，在温度为28℃，转速为120r/min的摇床内培养3天，经单层纱布过滤后收集滤液，用水稀释至孢子浓度为2×10⁷个/ml，获得印度梨形孢发酵液。

2、非洲菊组培苗的移栽

选取连续继代了5代的在生根培养基中培养了30天高度为3~4cm的非洲菊组培苗。开盖炼苗2天后移栽至装有3/4腐殖质的花盆中，每盆一株。所用花盆直径为10cm、高度为10cm。

3、印度梨形孢发酵液浇灌

向非洲菊组培移栽苗根系附近浇入50ml印度梨形孢发酵液。同时设置灭菌印度梨形孢发酵液处理组和pda液体培养基对照组。置于25±2℃的恒温培养室内培养，培养室光照强度为1300±200lx，光照时间为12h/d。分别在移栽后30天和90天观察三组非洲菊植株根系生长情况并拍照。

连续继代了5代的非洲菊组培移栽苗在移栽30天后（图1a）：印度梨形孢发酵液处理组非洲菊移栽苗生根情况最佳，须根较多。灭菌的印度梨形孢发酵液处理组次之，pda液体培养基对照组根系生长情况最差。在移栽后90天（图1b），印度梨形孢发酵液处理组和灭菌的印度梨形孢发酵液处理组非洲菊根系须根数均明显多于pda液体培养基。

实施例2

1、印度梨形孢发酵液的制备

活化印度梨形孢菌株，然后挑取菌落边缘部分的气生菌丝接种于新的pda固体培养基上。放置于28℃的黑暗培养箱内培养5d，挑取菌丝于装有100ml灭菌的pda液体培养基的250ml三角瓶内，在温度为28℃，转速为120r/min的摇床内培养3天，经单层纱布过滤后收集滤液，用水稀释至孢子浓度为2×10⁷个/ml，获得印度梨形孢发酵液。

2、非洲菊组培苗的移栽

选取连续继代了10代的在生根培养基中培养了30天高度为3~4cm的非洲菊组培苗。开盖炼苗2天后移栽至装有3/4腐殖质的花盆中，每盆一株。所用花盆直径为10cm、高度为10cm。

3、印度梨形孢发酵液浇灌

向连续继代了10代的非洲菊组培移栽苗根系附近浇入50ml印度梨形孢发酵液。同时设置灭菌印度梨形孢发酵液处理组和pda液体培养基对照组。置于25±2℃的恒温培养室内培养，培养室光照强度为1300±200lx，光照时间为12h/d。分别在移栽后30天和90天观察三组非洲菊植株根系生长情况并拍照。

连续继代了10代的非洲菊组培移栽苗在移栽30天后（图2a），印度梨形孢发酵液处理组和灭菌印度梨形孢发酵液处理组非洲菊植株生根情况均略好于pda液体培养基对照组最佳，其中印度梨形孢发酵液处理组植株根系最佳。在移栽后90天（图2b），pda液体培养基对照组植株根系比连续继代了5代的非洲菊组培移栽苗差。印度梨形孢发酵液处理组和灭菌的印度梨形孢发酵液处理组非洲菊根系须根数均明显多于pda液体培养基对照组，其中印度梨形孢发酵液处理组植株根系最佳。

实施例3

1、印度梨形孢发酵液的制备

活化印度梨形孢菌株，然后挑取菌落边缘部分的气生菌丝接种于新的pda固体培养基上。放置于28℃的黑暗培养箱内培养5d，挑取菌丝于装有100ml灭菌的pda液体培养基的250ml三角瓶内，在温度为28℃，转速为120r/min的摇床内培养3天，经单层纱布过滤后收集滤液，获得印度梨形孢发酵液。

2、非洲菊组培苗的移栽

选取连续继代了15代的在生根培养基中培养了30天高度为3~4cm的非洲菊组培苗。开盖炼苗2天后移栽至装有3/4腐殖质的花盆中，每盆一株。所用花盆直径为10cm、高度为10cm。

3、印度梨形孢发酵液浇灌

向连续继代了15代的非洲菊组培移栽苗根系附近浇入50ml印度梨形孢发酵液。同时设置灭菌印度梨形孢发酵液处理组和pda液体培养基对照组。置于25±2℃的恒温培养室内培养，培养室光照强度为1300±200lx，光照时间为12h/d。分别在移栽后30天和90天观察三组非洲菊植株根系生长情况并拍照。

连续继代了15代的非洲菊组培移栽苗在移栽30天后（图3a），印度梨形孢发酵液处理组和灭菌印度梨形孢发酵液处理组非洲菊植株生根情况均略好于pda液体培养基对照组。在移栽后90天（图3b），pda液体培养基对照组植株根系比连续继代了5代和10代的非洲菊植株差。印度梨形孢发酵液处理组和灭菌的印度梨形孢发酵液处理组非洲菊根系须根数均明显多于pda液体培养基对照组，其中印度梨形孢发酵液处理组植株根系最佳。

实施例4

1、印度梨形孢发酵液的制备

活化印度梨形孢菌株，然后挑取菌落边缘部分的气生菌丝接种于新的pda固体培养基上。放置于28℃的黑暗培养箱内培养5d，挑取菌丝于装有100ml灭菌的pda液体培养基的250ml三角瓶内，在温度为28℃，转速为120r/min的摇床内培养3天，经单层纱布过滤后收集滤液，用水稀释至孢子浓度为2×10⁷个/ml，获得印度梨形孢发酵液。

2、非洲菊组培苗的移栽

选取连续继代了20代的在生根培养基中培养了30天高度为3~4cm的非洲菊组培苗。开盖炼苗2天后移栽至装有3/4腐殖质的花盆中，每盆一株。所用花盆直径为10cm、高度为10cm。

3、印度梨形孢发酵液浇灌

向连续继代了20代的非洲菊组培移栽苗根系附近浇入50ml印度梨形孢发酵液。同时设置灭菌印度梨形孢发酵液处理组和pda液体培养基对照组。置于25±2℃的恒温培养室内培养，培养室光照强度为1300±200lx，光照时间为12h/d。分别在移栽后30天和90天观察三组非洲菊植株根系生长情况并拍照。

连续继代了20代的非洲菊组培移栽苗在移栽30天后（图4a），三组间根系差异不大，根系发育均较弱。在移栽后90天（图4b），pda液体培养基对照组植株根系比连续继代了5代、10代和15代的pda液体培养基对照组非洲菊植株差。印度梨形孢发酵液处理组和灭菌的印度梨形孢发酵液处理组非洲菊根系须根数均明显多于pda液体培养基对照组，其中印度梨形孢发酵液处理组植株根系最佳。无印度梨形孢处理组的移栽苗（图5a）成活率在86%左右，而印度梨形孢处理组的移栽苗（图5b）成活率则可达到93%以上。

因此可以看出：利用印度梨形孢发酵液浇灌非洲菊可以显著促进非洲菊组培移栽苗生根并能改善多次继代的非洲菊组培移栽苗根系、提高多次继代的组培移栽苗成活率。

本发明利用印度梨形孢发酵液浇灌非洲菊组培移栽苗，显著促进了非洲菊组培移栽苗生根，可较好地改善了多次继代的组培移栽苗根系，对于非洲菊生产意义重大，具有较高的应用和经济价值。