本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种瑶药翅茎白粉藤的组培快繁方法。
背景技术：
翅茎白粉藤(cissuxhexangularisthorelexplanch)是葡萄科白粉藤属的干燥茎，俗称六方钻或抽筋藤，为瑶族“虎牛钻风”中的六万钻，其富含黄酮类、萜类、芪类、生物碱、香豆素类、甾体类化合物，具有祛风除湿、活血通络的功效，在瑶族民间常用于跌打损伤、风湿关节痛、骨折、痛疮、肿毒、痢疾、蛇咬伤等多种疾病的治疗。
白粉藤属植物全世界有200多种，我国有15种，主要包括毛叶白粉藤、翅茎白粉藤、戟叶白粉藤等，主要分布在南方各省。白粉藤属植物在心血管、抗肿瘤、治疗糖尿病等方面显示出独特的优势。但目前对该属植物研究还不深入，长期处于野生状态，尚未被开发利用，加之炼山造林、生境破坏等原因，其野生资源锐减，因此人工栽培白粉藤植物是十分迫切的！
为了满足翅茎白粉藤规模化种植对种苗的需求，本发明选择翅茎白粉藤带节藤茎为外植体，经诱导、继代、生根、炼苗以及移栽等步骤，建立了翅茎白粉藤的组培快速繁殖体系。本发明具有成本低、周期短、操作性简单等特点，可直接用于翅茎白粉藤种苗的工厂化生产，以利于瑶药翅茎白粉藤的开发利用。
至目前为止，国内外尚未有瑶药翅茎白粉藤组织培养技术的报道，也未见有瑶药翅茎白粉藤组培快繁专利的申请。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种瑶药翅茎白粉藤的组培快繁方法，本发明选择翅茎白粉藤带节藤茎为外植体，经诱导、继代、生根、炼苗以及移栽等步骤，建立了瑶药翅茎白粉藤的组培快速繁殖体系，从而实现了本发明的目的。
本发明所提供的技术方案是：
一种瑶药翅茎白粉藤的组培快繁方法，包括如下步骤：
(1)外植体采集：在野外选取生长健壮、无明显病害的翅茎白粉藤植株向阳带节茎段为外植体，采集后立即进行保水保湿处理并及时带回实验室；
(2)外植体诱导：当步骤(1)采集回实验室外植体置于自来水下冲洗冲洗过夜，在超净工作台中用75％的酒精液浸泡15-20s后立即用无菌水冲洗3-5次；在0.1％的升汞溶液中浸泡10-15min后立即用无菌水冲洗5-7次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分后切成1.5-2.0cm的带节茎段并接种到不定芽诱导培养基中，置于25-28℃进行全暗培养30-40天，即可诱导形成不定芽；
(3)继代培养：将步骤(2)诱导得到的不定芽切成长约1.5-2.0cm的茎段并接种到继代培养基中培养28-32d，即可实现不定芽的增殖；
(4)生根培养：将步骤(3)继代得到的长约1.5-2.0cm的不定芽从基部切下并接种到生根培养基中培养30-40d，即能实现试管苗的生根；
(5)移栽：将步骤(4)根系生长良好的试管苗在温室的自然光下炼苗3-5d，洗净根部的培养基移栽于混合基质中培育成苗，即得翅茎白粉藤种苗。
作为优选，步骤(2)中所述的诱导培养基为：ms培养基+1.5-2.0mg/l6-ba+0.1-0.5mg/lnaa+25-30g/l蔗糖+3.5-4.0g/l琼脂+0.5-1.0g/l活性炭，ph为5.4-5.8。
作为优选，步骤(3)中所述的继代培养基为：ms培养基+0.3-0.6mg/l6-ba+0.1-0.3mg/lnaa+25-30g/l蔗糖+3.5-4.0g/l琼脂+0.1-0.5g/l活性炭，ph为5.4-5.8。
作为优选，步骤(4)中所述的生根培养基为：1/2ms培养基+0.5-1.0mg/lnaa+0.3-0.6mg/liba+15-20g/l蔗糖+3.0-4.0g/l琼脂，ph为5.4-5.8。
作为优选，上述步骤(3)-(4)中的培养条件为：培养温度为25-28℃，光照强度为2500-3000lx，光照时间为13-14h/d。
作为优选，步骤(5)中的混合基质是由腐殖土和泥炭土按照体积比1:1混合而成。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明的方法采用植物组织培养技术建立了瑶药翅茎白粉藤的组培快速繁殖体系，具有成本低、周期短、操作性简单等特点，可直接用于翅茎白粉藤种苗的工厂化生产，以利于瑶药翅茎白粉藤的开发利用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
实施例1：
一种瑶药翅茎白粉藤的组培快繁方法，包括如下步骤：
(1)外植体采集：在野外选取生长健壮、无明显病害的翅茎白粉藤植株向阳带节茎段为外植体，采集后立即进行保水保湿处理并及时带回实验室。
(2)外植体诱导：当步骤(1)采集回实验室外植体置于自来水下冲洗冲洗过夜。在超净工作台中用75％的酒精液浸泡15秒钟后立即用无菌水冲洗3次。在0.1％的升汞溶液中浸泡10分钟后立即用无菌水冲洗5次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分后切成1.5cm左右的带节茎段并接种到不定芽诱导培养基中，置于25℃进行全暗培养30天即可诱导形成不定芽，所述的诱导培养基为：ms培养基+1.5mg/l6-ba+0.1mg/lnaa+25g/l蔗糖+3.5g/l琼脂+0.5g/l活性炭，ph为5.4。
(3)继代培养：将步骤(2)诱导得到的不定芽切成长约1.5cm的茎段并接种到继代培养基中培养28天即可实现不定芽的增殖，增殖系数达到2.5倍。所述的继代培养基为：ms培养基+0.3mg/l6-ba+0.1mg/lnaa+25g/l蔗糖+3.5g/l琼脂+0.1g/l活性炭，ph为5.4。
(4)生根培养：将步骤(3)继代得到的长约1.5cm的不定芽从基部切下并接种到生根培养基中培养30天即能实现试管苗的生根。所述的生根培养基为：1/2ms培养基+0.5mg/lnaa+0.3mg/liba+15g/l蔗糖+3.0g/l琼脂，ph为5.4。
(5)移栽：将步骤(4)根系生长良好的试管苗在温室的自然光下炼苗3-5天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、泥炭土混合基质中培育成苗即得翅茎白粉藤种苗。
上述步骤(3)-(4)中的培养条件为：培养温度为25℃，光照强度为2500lx，光照时间为13小时/天。
实施例2：
一种瑶药翅茎白粉藤的组培快繁方法，包括如下步骤：
(1)外植体采集：在野外选取生长健壮、无明显病害的翅茎白粉藤植株向阳带节茎段为外植体，采集后立即进行保水保湿处理并及时带回实验室。
(2)外植体诱导：当步骤(1)采集回实验室外植体置于自来水下冲洗冲洗过夜。在超净工作台中用75％的酒精液浸泡20秒钟后立即用无菌水冲洗5次。在0.1％的升汞溶液中浸泡15分钟后立即用无菌水冲洗7次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分后切成2.0cm左右的带节茎段并接种到不定芽诱导培养基中，置于28℃进行全暗培养40天即可诱导形成不定芽，所述的诱导培养基为：ms培养基+2.0mg/l6-ba+0.5mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.0g/l琼脂+1.0g/l活性炭，ph为5.8。
(3)继代培养：将步骤(2)诱导得到的不定芽切成长2.0cm的茎段并接种到继代培养基中培养32天即可实现不定芽的增殖，增殖系数达到3.0倍。所述的继代培养基为：ms培养基+0.6mg/l6-ba+0.3mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.0g/l琼脂+0.5g/l活性炭，ph为5.8。
(4)生根培养：将步骤(3)继代得到的长2.0cm的不定芽从基部切下并接种到生根培养基中培养40天即能实现试管苗的生根。所述的生根培养基为：1/2ms培养基+1.0mg/lnaa+0.6mg/liba+20g/l蔗糖+4.0g/l琼脂，ph为5.8。
(5)移栽：将步骤(4)根系生长良好的试管苗在温室的自然光下炼苗5天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、泥炭土混合基质中培育成苗即得翅茎白粉藤种苗。
上述步骤(3)-(4)中的培养条件为：培养温度为28℃，光照强度为3000lx，光照时间为14小时/天。
实施例3：
一种瑶药翅茎白粉藤的组培快繁方法，包括如下步骤：
(1)外植体采集：在野外选取生长健壮、无明显病害的翅茎白粉藤植株向阳带节茎段为外植体，采集后立即进行保水保湿处理并及时带回实验室。
(2)外植体诱导：当步骤(1)采集回实验室外植体置于自来水下冲洗冲洗过夜。在超净工作台中用75％的酒精液浸泡18秒钟后立即用无菌水冲洗4次。在0.1％的升汞溶液中浸泡12分钟后立即用无菌水冲洗6次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分后切成1.6cm左右的带节茎段并接种到不定芽诱导培养基中，置于26℃进行全暗培养35天即可诱导形成不定芽，所述的诱导培养基为：ms培养基+1.8mg/l6-ba+0.3mg/lnaa+28g/l蔗糖+3.8g/l琼脂+0.7g/l活性炭，ph为5.6。
(3)继代培养：将步骤(2)诱导得到的不定芽切成长1.8cm的茎段并接种到继代培养基中培养30天即可实现不定芽的增殖，增殖系数达到2.6倍。所述的继代培养基为：ms培养基+0.5mg/l6-ba+0.2mg/lnaa+28g/l蔗糖+3.6g/l琼脂+0.2g/l活性炭，ph为5.5。
(4)生根培养：将步骤(3)继代得到的长约1.8cm的不定芽从基部切下并接种到生根培养基中培养34天即能实现试管苗的生根。所述的生根培养基为：1/2ms培养基+0.9mg/lnaa+0.4mg/liba+17g/l蔗糖+3.5g/l琼脂，ph为5.6。
(5)移栽：将步骤(4)根系生长良好的试管苗在温室的自然光下炼苗4天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、泥炭土混合基质中培育成苗即得翅茎白粉藤种苗。
上述步骤(3)-(4)中的培养条件为：培养温度为26℃，光照强度为2800lx，光照时间为13小时/天。
将上述实施例1-3得到的瑶药翅茎白粉藤的组培快繁方法中不定芽诱导、愈伤组织诱导、不定芽的增殖、愈伤组织分化、生根情况进行调查统计，结果见表1。
表1本发明的瑶药翅茎白粉藤的组织培养方法对不定芽诱导、愈伤组织诱导、不定芽的增殖、愈伤组织分化、生根情况的测定
由表1可知，本发明的瑶药翅茎白粉藤的组培快繁方法得到的不定芽长势良好，不定芽多；其诱导率和生根率均为100％。可见，本发明的方法具有明显的技术优势，值得进一步推广和应用。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。