本发明属于羊肚菌培养技术领域；具体涉及一种促进羊肚菌菌核形成的菌种基质；还涉及上述菌种基质的制备方法；还涉及基于上述菌种基质的羊肚菌菌种培养方法。
背景技术
羊肚菌是名贵珍稀食用菌菇，隶属于真菌门子囊菌纲盘菌目羊肚菌科羊肚菌属(morchellagenus)。羊肚菌味道鲜美，营养价值高，富含人体必需氨基酸、菌多糖和抗氧化物质，价格昂贵。采集野生羊肚菌已无法满足消费市场的需求。近年来，羊肚菌人工栽培技术取得突破，实现了成熟稳定的商业化大田栽培。
菌种是菌菇栽培的第一步。菌种质量的好坏决定着菌体的活力和生理状态，从而影响着最终收获的菌菇(子实体)的产量。目前已有的关于羊肚菌栽培技术的研究结果和专利显示，在羊肚菌的营养生长阶段促进其形成菌核，有助于促进羊肚菌出菇、提高羊肚菌的产量。例如，美国专利号us4866878的专利“cultivationofmorchella”(1989年)中叙述了营养生长阶段形成越多菌核则羊肚菌出菇越多的规律。美国专利号us6907691b2的专利“cultivationofmorchella”(2005年)直接利用菌核作为菌种播种到栽培基质里实现羊肚菌的工厂化栽培，揭示了羊肚菌菌核对于形成子实体的重要性。中国专利号zl201510532171.3的授权发明专利“一种促进羊肚菌菌核形成的转化袋及羊肚菌栽培方法”提供了一种转化袋，可以促进已经播种到农田土壤中的羊肚菌形成菌核并提高最终收获的羊肚菌子实体的产量。但是，在目前中国、澳大利亚、新西兰、土耳其、罗马尼亚、法国等国流行的羊肚菌大田农法栽培模式中，尚未有专利和论文通过理性设计羊肚菌菌种培养基质配方以促进菌种中形成更多菌核，也没有分析菌种基质配方与羊肚菌分解利用营养物质的酶的活性之间有何种联系、对菌核形成和最终的子实体产量有何种影响。公布号cn105779308a的申请阶段发明专利“一种高效促进羊肚菌菌核形成的方法”中通过向土豆-葡萄糖-琼脂培养基中添加土壤滤液，可以促进实验室培养皿中培养的羊肚菌菌丝形成更多的菌核，但是尚未有证据显示假如将其添加到目前生产实践中最广泛使用的菌种培养基质中是否有同样的促进效果。并且，该发明专利申请中提供的“土壤滤液”的制备方法需要用到“高有机质含量的土壤”和“羊肚菌菌柄土壤”，材料的易取得性和供应量均有限。制备步骤包括“离心、取上清液、用细胞过滤器过滤”，制备方法较繁琐。该发明专利申请中并未分析“土壤滤液”中的何种成分通过何种作用促进羊肚菌菌核的形成，而各地土壤成分存在差异，导致不同地区用该方法制备的“土壤滤液”的成分可能存在差异，效果的稳定性和重现性不易保证。
其他目前已有的羊肚菌菌种培养材料制作方法与菌种生产技术发明专利(含申请审查阶段的)，例如公布号cn1793315a的“尖顶羊肚菌菌株的筛选及菌种制备”、公布号cn1793316a的“黑脉羊肚菌菌株的筛选及菌种制备”、公布号cn103141302a的“梯棱羊肚菌栽培种的制作方法”、公布号cn104686196a的“一种通过阴干子实体保存和分离羊肚菌菌种的方法”、公布号cn101946634a的“一种羊肚菌母种制作方法”、公布号cn105154342a的“一种羊肚菌液态菌种的培养方法”、公布号cn102757291a的“一种羊肚菌栽培种培养基及其制备方法”、公布号cn101743854a的“一种以石斛纤维为基质的羊肚菌菌丝体的制备方法”等提供的菌种基质配方和制备方法均未涉及到对羊肚菌菌核形成有无促进作用。
技术实现要素：
本发明提供了一种羊肚菌菌种基质及其制备方法和羊肚菌菌种的培养方法；该基质能够激活羊肚菌的漆酶、锰过氧化物酶和木质素过氧化物酶的活性，使羊肚菌菌种基质中的羊肚菌菌丝生长更加旺盛、形成更多菌核，提高最终收获的子实体产量。
本发明的技术方案是：羊肚菌菌种基质，由油菜秸秆碎片和小麦粒组成，按质量份数，油菜秸秆碎片为60-75份，小麦粒为25-40份。
其中油菜秸秆碎片的长度为0.5-5cm，宽度为1-4mm。
本发明的另一技术方案是：上述羊肚菌菌种基质的制备方法，步骤s1，按质量份数取油菜秸秆碎片60-75份，小麦粒25-40份，用水将油菜秸秆碎片浸透，用质量浓度为1％-1.5％的石灰水将小麦粒浸透；步骤s2，将步骤1中得到的浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀装入菌种袋中，并且在121℃下灭菌2-2.5h，得到菌种基质。
其中油菜秸秆碎片的长度为0.5-5cm，宽度为1-4mm。
其中步骤s1中将油菜秸秆碎片在水中浸泡3-6h，将小麦粒在石灰水中浸泡8-14h。
本发明的另一技术方案是：羊肚菌菌种的培养方法，在上述促进羊肚菌菌核形成的菌种基质的制备方法得到的菌种基质上接种羊肚菌母种或原种，相应的得到羊肚菌原种或栽培种。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：该基质中主要原料为油菜秸秆，简单易得，成本较低，并且能够减少油菜产区秸秆焚烧、促进农业废弃物资源回收利用，具有良好的生态效益。该基质能全面提升菌种基质中生长的羊肚菌菌体的漆酶、锰过氧化物酶和木质素过氧化物酶的活性。不使用土壤，使得菌种基质制作方法简单、原料易取得，减轻菌种基质的重量，降低运输成本。能使菌种基质中的羊肚菌菌丝生长旺盛、形成更多菌核，对最终收获的羊肚菌子实体产量有提升效果。
具体实施方式
下面结合原理和具体实施例对本发明的技术方案进一步说明。
在本发明的技术方案研究过程中，通过对生长在一系列作物秸秆材料(包括小麦、水稻、玉米、油菜、大豆、棉花的秸秆，以及谷壳、麦麸、棉籽壳)上的羊肚菌菌体的长势进行观察，并对其纤维素酶、半纤维素酶、漆酶、锰过氧化物酶、木质素过氧化物酶的活性进行了测定。发现漆酶、锰过氧化物酶、木质素过氧化物酶的活性高低与羊肚菌菌丝的长势好坏有较大的正相关性。其中羊肚菌菌丝长势表现较好的是油菜、小麦、水稻、玉米的秸秆，但是到这一步为止仍未显著优于市场上流行的商业菌种基质配方。
同时进行的研究分析还发现，羊肚菌的淀粉水解酶有2种：α-淀粉酶与γ-淀粉酶。α-淀粉酶可分解淀粉产生麦芽糖，麦芽糖进一步被α-葡萄糖苷酶分解为α-d-葡萄糖。γ-淀粉酶分解淀粉直接产生β-d-葡萄糖，无需经过麦芽糖中间产物。β-d-葡萄糖容易被葡萄糖氧化酶氧化产生葡萄糖酸和过氧化氢，而α-d-葡萄糖不易被葡萄糖氧化酶氧化。羊肚菌的γ-淀粉酶活性远高于α-淀粉酶，且α-葡萄糖苷酶活性较弱，导致淀粉水解的大部分产物以β-d-葡萄糖形式存在，且容易被葡萄糖氧化酶氧化形成过氧化氢。因此，在配方中适当加入淀粉类原料，可以增加降解代谢途径中葡萄糖和过氧化氢的供应量。
过氧化氢是漆酶、锰过氧化物酶、木质素过氧化物酶的催化反应所必需的电子受体。过氧化氢的增加有助于漆酶、锰过氧化物酶、木质素过氧化物酶对秸秆中木质素的氧化分解，但是木质素分解产生的小分子产物有三种：香草醛、丁香醛、对羟基苯甲醛。不同秸秆中的木质素降解产物中三种单体的组合比例不同，可能对纤维素酶、半纤维素酶、漆酶、锰过氧化物酶、木质素过氧化物酶中的一种或几种具有反馈抑制(下调)或反馈激活(上调)的效应。
通过进一步实验，发现在小麦、水稻、玉米、油菜秸秆中均加入小麦粒，质量比例范围为秸秆:小麦粒＝(60～75)：(25～40)；然后接种羊肚菌。以相应的纯秸秆接种羊肚菌作为对比。结果表明：加入小麦粒可以使小麦秸秆的漆酶活性上调至2.2倍、木质素过氧化物酶活性上调至6.5倍，但锰过氧化物酶活性略有下降；使水稻秸秆的漆酶活性上调至6.8倍、锰过氧化物酶活性上调至2.2倍，但木质素过氧化物酶活性下降至50％；使玉米秸秆的锰过氧化物酶活性上调至6倍、木质素过氧化物酶活性上调至4倍，但漆酶活性下降至47％；只有油菜秸秆的三种酶活性全部上调，其中漆酶活性上调至4.8倍、锰过氧化物酶活性上调至6倍、木质素过氧化物酶活性上调至3.3倍。同时，加入小麦粒的油菜秸秆比加入小麦粒的其他三种秸秆上羊肚菌菌丝的生长速度更快、菌丝更健壮、菌核更多。
因此，油菜秸秆与小麦粒按照(60～75)：(25～40)的质量比例搭配，可以使漆酶、锰过氧化物酶、木质素过氧化物酶这三种木质素降解所需的关键酶的活性得到全面的激活(上调)，促进木质素的分解，有利于菌丝的生长和菌核的形成。而其他秸秆与小麦粒的搭配只能激活其中2种酶却抑制剩下的1种酶，效果不如油菜秸秆与小麦粒的组合。
本发明提供了一种促进羊肚菌菌核形成的菌种基质，该菌种基质由油菜秸秆和小麦粒组成，按质量百分比，其中油菜秸秆碎片为60-75％，小麦粒为25-40％，且两种物质的质量百分数之和为100％，且油菜秸秆碎片和小麦粒均为干燥状态；具体的油菜秸秆碎片的长度为0.5-5cm，宽度为1-4mm。
本发明还提供了上述羊肚菌菌种基质的制备方法，其包括以下实施例：
实施例1
按质量百分比取60％油菜秸秆碎片和40％的小麦粒，其中油菜秸秆碎片的长度为0.5-1.5cm，宽度为1-2mm，用水浸泡油菜秸秆碎片3h，将油菜秸秆碎片浸透，使用质量浓度为1％的石灰水将小麦粒浸泡8h，将小麦粒浸透；然后将浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀后装入聚丙烯菌种袋中，在121℃下灭菌2h，得到菌种基质。
在该菌种基质上接种羊肚菌母种，得到羊肚菌原种。
实施例2
按质量百分比取75％油菜秸秆碎片和25％的小麦粒，其中油菜秸秆碎片的长度为0.5-1.5cm，宽度为1-2mm，用水浸泡油菜秸秆碎片4h，将油菜秸秆碎片浸透，使用质量浓度为1.1％的石灰水将小麦粒浸泡9h，将小麦粒浸透；然后将浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀后装入塑料菌种瓶中，使用高压蒸汽灭菌锅在121℃下灭菌2.2h，得到菌种基质。
在该菌种基质上接种羊肚菌母种，得到羊肚菌原种。
实施例3
按质量百分比取70％油菜秸秆碎片和30％的小麦粒，其中油菜秸秆碎片的长度为0.1-1.5cm，宽度为2-3mm，用水浸泡油菜秸秆碎片6h，将油菜秸秆碎片浸透，使用质量浓度为1.5％的石灰水将小麦粒浸泡12h，将小麦粒浸透；然后将浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀后装入玻璃菌种瓶中，在121℃下灭菌2.5h，得到菌种基质。
在该菌种基质上接种羊肚菌原种，得到羊肚菌栽培种。
实施例4
按质量百分比取65％油菜秸秆碎片和35％的小麦粒，其中油菜秸秆碎片的长度为4-5cm，宽度为2-3mm，用水浸泡油菜秸秆碎片5h，将油菜秸秆碎片浸透，使用质量浓度为1.4％的石灰水将小麦粒浸泡11h，将小麦粒浸透；然后将浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀后装入玻璃菌种瓶中，在121℃下灭菌2.4h，得到菌种基质。
在该菌种基质上接种羊肚菌原种，得到羊肚菌栽培种。
实施例5
按质量百分比取69％油菜秸秆碎片和31％的小麦粒，其中油菜秸秆碎片的长度为2-3cm，宽度为2.5-3.5mm，用水浸泡油菜秸秆碎片4.5h，将油菜秸秆碎片浸透，使用质量浓度为1.2％的石灰水将小麦粒浸泡10h，将小麦粒浸透；然后将浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀后装入玻璃菌种瓶中，在121℃下灭菌2.2h，得到菌种基质。
在该菌种基质上接种羊肚菌原种，得到羊肚菌栽培种。
实施例6
按质量百分比取66％油菜秸秆碎片和34％的小麦粒，其中油菜秸秆碎片的长度为1-3cm，宽度为1-3mm，用水浸泡油菜秸秆碎片3.5h，将油菜秸秆碎片浸透，使用质量浓度为1％的石灰水将小麦粒浸泡14h，将小麦粒浸透；然后将浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀后装入聚丙烯菌种袋中，在121℃下灭菌2h，得到菌种基质。
在该菌种基质上接种羊肚菌原种，得到羊肚菌栽培种。
实施例7
按质量百分比取63％油菜秸秆碎片和37％的小麦粒，其中油菜秸秆碎片的长度为1-2cm，宽度为2-3mm，用水浸泡油菜秸秆碎片4h，将油菜秸秆碎片浸透，使用质量浓度为1.5％的石灰水将小麦粒浸泡8.5h，将小麦粒浸透；然后将浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀后装入塑料菌种瓶中，在121℃下灭菌2.5h，得到菌种基质。
在该菌种基质上接种羊肚菌母种，得到羊肚菌原种。
实施例8
按质量百分数取73％油菜秸秆碎片和27％的小麦粒，其中油菜秸秆碎片的长度为1-2cm，宽度为2-3mm，用水浸泡油菜秸秆碎片5.5h，将油菜秸秆碎片浸透，使用质量浓度为1.5％的石灰水将小麦粒浸泡12h，将小麦粒浸透；然后将浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀后装入塑料菌种瓶中，在121℃下灭菌2.3h，得到菌种基质。
在该菌种基质上接种羊肚菌母种，得到羊肚菌原种。
实施例9
按质量百分数取72％油菜秸秆碎片和28％的小麦粒，其中油菜秸秆碎片的长度为3.5-5cm，宽度为3-4mm，用水浸泡油菜秸秆碎片4h，将油菜秸秆碎片浸透，使用质量浓度为1.2％的石灰水将小麦粒浸泡8h，将小麦粒浸透；然后将浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀后装入塑料菌种瓶中，在121℃下灭菌2h，得到菌种基质。
在该菌种基质上接种羊肚菌母种，得到羊肚菌原种。
实施例10
按质量百分数取73％油菜秸秆碎片和27％的小麦粒，其中油菜秸秆碎片的长度为3-4.5cm，宽度为3-4mm，用水浸泡油菜秸秆碎片3h，将油菜秸秆碎片浸透，使用质量浓度为1.2％的石灰水将小麦粒浸泡8h，将小麦粒浸透；然后将浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀后装入塑料菌种瓶中，在121℃下灭菌2h，得到菌种基质。
在该菌种基质上接种羊肚菌原种，得到羊肚菌栽培种。
实施例11
按质量百分数取69％油菜秸秆碎片和31％的小麦粒，其中油菜秸秆碎片的长度为3-4.5cm，宽度为1-2mm，用水浸泡油菜秸秆碎片5h，将油菜秸秆碎片浸透，使用质量浓度为1.3％的石灰水将小麦粒浸泡9h，将小麦粒浸透；然后将浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀后装入塑料菌种瓶中，在121℃下灭菌2h，得到菌种基质。
在该菌种基质上接种羊肚菌原种，得到羊肚菌栽培种。
实施例12
按质量百分数取72％油菜秸秆碎片和28％的小麦粒，其中油菜秸秆碎片的长度为2-3cm，宽度为1-2mm，用水浸泡油菜秸秆碎片4h，将油菜秸秆碎片浸透，使用质量浓度为1.3％的石灰水将小麦粒浸泡10h，将小麦粒浸透；然后将浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀后装入玻璃菌种瓶中，在121℃下灭菌2.5h，得到菌种基质。
在该菌种基质上接种羊肚菌母种，得到羊肚菌原种。
实施例13
按质量百分数取68％油菜秸秆碎片和32％的小麦粒，其中油菜秸秆碎片的长度为2-3cm，宽度为1-2mm，用水浸泡油菜秸秆碎片4h，将油菜秸秆碎片浸透，使用质量浓度为1.3％的石灰水将小麦粒浸泡14h，将小麦粒浸透；然后将浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀后装入玻璃菌种瓶中，在121℃下灭菌2.5h，得到菌种基质。
在该菌种基质上接种羊肚菌母种，得到羊肚菌原种。
实施例14
按质量百分数取67％油菜秸秆碎片和33％的小麦粒，其中油菜秸秆碎片的长度为3-4.5cm，宽度为3-4mm，用水浸泡油菜秸秆碎片3h，将油菜秸秆碎片浸透，使用质量浓度为1.2％的石灰水将小麦粒浸泡8h，将小麦粒浸透；然后将浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀后装入塑料菌种瓶中，在121℃下灭菌2h，得到菌种基质。
在该菌种基质上接种羊肚菌原种，得到羊肚菌栽培种。
实施例15
按质量百分数取68％油菜秸秆碎片和32％的小麦粒，其中油菜秸秆碎片的长度为2-3cm，宽度为2.5-3.5mm，用水浸泡油菜秸秆碎片4.5h，将油菜秸秆碎片浸透，使用质量浓度为1.2％的石灰水将小麦粒浸泡10h，将小麦粒浸透；然后将浸透的油菜秸秆碎片和小麦粒混合均匀后装入玻璃菌种瓶中，在121℃下灭菌2.2h，得到菌种基质。
在该菌种基质上接种羊肚菌原种，得到羊肚菌栽培种。
本发明还公开了使用上述促进羊肚菌菌核形成的菌种基质的制备方法得到的菌种基质进行接种羊肚菌母种或羊肚菌原种，其中当接种羊肚菌母种时得到羊肚菌原种，当接种羊肚菌原种时得到羊肚菌栽培种。