专利名称：建立转基因动物或生物反应器的方法
技术领域：
本发明涉及一种建立转基因动物或生物反应器的方法。
建立转基因动物或生物反应器的常规方法是受精卵内显微注射法，是将外源基因在高倍数显微镜下，借助显微注射仪，通过安装在其上尖端处约头发丝的千分之一直径的毛细玻璃管注入受精卵内，然后将受精卵通过人工受精或体外受精的方法植入雌性动物体内，繁殖首建者动物。其缺点是所用的高倍数光学显微镜、显微注射仪、用于拉毛细玻璃管的拉针仪都非常昂贵，在操作上需要用人的眼睛在高倍数显微镜上一边观看，一边用手对显微注射仪进行调节，使毛细玻璃管尖端非常缓慢地插入受精卵，并注入外源基因，这种操作往往对受精卵造成致命的损伤，因此成功率很低，制造的数量小、制造时间长。另外要将此受精卵移植入雌性动物体内也是一项十分困难的操作，经常出现移植的失败。另外国际上还有在体外处理精子(如电击或脂质体作用或单纯孵育等方法)，将外源基因转入精子，然后再通过人工受精或体外受精等方法建立转基因动物的精子载体法，但因是在体外处理精子，因此成功率及可重复性都比较低。
本发明的目的在于克服上述现有技术中之不足，提供一种能够迅速、大量、有效地使精子带上外源基因而建立转基因动物或生物反应器的方法。
为实现本发明的目的，本发明所述的建立转基因动物或生物反应器的方法，是将通过不同方法处理的外源基因置入雄性动物的输精管或附睾管或睾丸网或储精池内，在输精管或附睾管或睾丸网或储精池内与精子作用，使精子带上外源基因，然后通过自然交配或其他受精的方法建立转基因动物或生物反应器。
具体点说是借助注射器，抽取通过不同方法处理的外源基因液，使针头进入动物的输精管或附睾管或睾丸网或储精池内，推进注射器，使外源基因注入动物体内。使外源基因直接在动物体内的输精管或附睾管或睾丸网或储精池内与精子作用，使精子带上外源基因，然后通过动物的自然交配或体外或人工受精的方法繁殖首建者动物。本方法不但方法简单，而且由于外源基因是在动物体内自然状态下与精子作用，使精子带上外源基因，转染率比较高，因此繁殖的首建者动物阳性率也比较高。
实施例选小鼠作繁殖对象，将适用于小鼠的外源基因(采用tPA cDNA)由脂质体包裹，按外源基因2微升，脂质体2微升，DM EM12微升的配方配成转染液，由于小鼠体形较小，采用带适合于小鼠用的细针注射器，吸入所配置的转染液，借助普通的解剖显微镜观看小鼠，通过常规的人工方法将小鼠麻醉，在小鼠身上适当的部位割开一小口，将细针刺入已麻醉的小鼠输精管内，注入转染液。双侧同样操作。缝合切口。手术后2-3天将实验鼠与母鼠合笼，自然交配。待母鼠产子后检测子代外源基因的整合及表达情况，确定转基因阳性小鼠，即建成转基因小鼠或小鼠生物反应器。
由于小鼠所用的细针可能一时无合适的，可采用毛细玻璃管在酒精灯上拉出细尖端后通过橡胶管套在注射器的注射管口上。若是躯体较大的动物，如猪、牛等可采用常规的玻璃针、塑料针或金属针注射器，将所适应的外源基因注入猪、牛等的输精管及附睾管或睾丸网或储精池内。
本发明所述的建立转基因动物或生物反应器的方法由于外源基因是在雄性动物的输精管或附睾管或睾丸网或储精池内与精子作用，使精子在动物体内就能携带上外源基因，保持了精子在原有的状态下生存，因此具有能够迅速、大量、有效地使精子带上外源基因，在不需特殊专用设备的条件下，操作简单，重复率和成功率高等优点。
权利要求
1．一种建立转基因动物或生物反应器的方法，其特征是将通过不同方法处理的外源基因置入雄性动物的输精管或附睾管或睾丸网或储精池内，在输精管或附睾管或睾丸网或储精池内与精子作用，使精子带上外源基因，然后通过自然交配或其他受精的方法建立转基因动物或生物反应器。
2．根据权利要求1所述的建立转基因动物或生物反应器的方法，其特征是借助注射器，抽取通过不同方法处理的外源基因液，使针头进入动物的输精管或附睾管或睾丸网或储精池内，推进注射器，使外源基因注人雄性动物的输精管或附睾管或睾丸网或储精池内。
全文摘要
本发明涉及一种建立转基因动物或生物反应器的方法。克服现有方法中使精子带上外源基因操作复杂,操作过程缓慢,精子的成活率低,数量小的缺点。将通过不同方法处理的外源基因置入雄性动物的输精管或附睾管或睾丸网或储精池内,在输精管或附睾管或睾丸网或储精池内与精子作用,使精子带上外源基因,然后通过自然交配或其他受精的方法建立转基因动物或生物反应器。具有能够迅速、大量、有效地使精子带上外源基因,在不需特殊专用设备的条件下,操作简单,重复率和成功率高等优点。
文档编号A61D19/00GK1223849SQ97108888
公开日1999年7月28日 申请日期1997年12月22日 优先权日1997年12月22日
发明者黄伟民 申请人:中国人民解放军第一军医大学