一种香花崖豆藤组培快繁方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于香花崖豆藤组织培养技术领域，具体是涉及一种香花崖豆藤组培快繁 方法。
【背景技术】
[0002] 香花崖豆藤（MillettiadielsianaHarms)又名山鸡血藤、大巴豆、山胡豆，为蝶 形花科崖豆藤属多年生半常绿木质藤本植物，大多数都还处于野生状态。其藤茎、根均可药 用，能行气、解热、止血、驱风除湿、通经活络，种子还可做为油料材料，花叶并美，花色多，颜 色鲜艳，花期长，在园林中应可用于棚架、假山、墙面、坡坎、地被、屋顶、盆景等处的绿化，是 一种良好的药用、观赏两用的园林绿化植物。近年来，由于香花崖豆藤既是一种重要的药用 植物（从70年代开始，在两广地区广泛采挖香花崖豆藤用于中成药的生产），又是一类可以 作为优良的园林观赏植物，所以，目前颇受广大市民喜爱，市场上对于香花崖豆藤的需求不 断增长，使香花崖豆藤遭受滥采滥挖的现象越来越严重。如何使香花崖豆藤优良母株的各 种优良性状在后代个体中遗传性稳定，繁殖系数高、繁殖速度快、生根效果好等优点，通过 植物组培快繁是最有效途径。香花崖豆藤的种子播种、藤条扦插和压条方法进行繁殖，其繁 殖系数均不高，因此，加强香花崖豆藤的组培快繁研究工作具有重要的意义。
[0003] 有关香花崖豆藤组培快繁的报道1篇（1、黄艳宁，彭尽晖，周红灿，等.香花崖 豆藤的组织培养与快速繁殖[J].植物生理学通讯，2007. 8, 43 (4) : 751.)及硕士论文1篇 (2、黄艳宁.香花崖豆藤的繁殖技术及园林应用研究）。文献1中以成熟青豆荚为组培材料 时，取材时间有限制，只能为每年的10月份豆荚成熟时取材，且种子在培养基里的萌芽率 不高，每一粒种子只能发出一株无菌苗，再通过无菌苗进行切段进行增殖培养，繁殖系数不 高，为5. 0。文献2中以单芽及带芽茎段为组培材料时，取材时耗材比较多，需要采摘大量的 幼嫩枝条，且繁殖系数不高，为5. 56。本发明以叶片为组培材料，通过愈伤组培进行丛芽诱 导增殖分化，可以在短时间内以十几倍的速度进行增殖，真正可以实现"给我一片绿叶，还 你一片森林"的说法，以种子和带芽茎段为材料的繁殖方法，其增殖系数及速度在短时间内 是无法达到的。同时，利用本发明方法获得的幼芽，生根率高，移栽成活率高，真正做到了产 业化的发展。
[0004]目前，有关香花崖豆藤叶片组培快繁技术尚未报道，且该方法具有取材方便、耗材 少、培养周期短、繁殖系数高、繁殖速度快、生根效果好、保持母株优良遗传性状等特点，使 香花崖豆藤能实行工厂化快速育苗。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是在于提供了一种香花崖豆藤组培快繁方法，本发明提供的组培快 繁方法，具有繁殖系数高、繁殖速度快、生根效果好、保持母株优良遗传性状等特点，能在短 时期内获得香花崖豆藤优质苗木，并能实行工厂化快速育苗。
[0006] 为达到上述目的，本发明采取以下技术措施：
[0007] 本发明所采用的技术方案是通过外植体选取及处理、初代愈伤组织培养、分化培 养、增殖培养、生根培养形成了一套完整的香花崖豆藤组培快繁技术。
[0008] -种香花崖豆藤组培快繁方法，其步骤如下：
[0009] (1)外植体选取及处理：
[0010] 外植体选取：选择生长健壮、无病虫害的香花崖豆藤植株为繁殖材料，3月中下旬 采其一、二年生枝条当年抽发的新梢幼嫩叶片为外植体，灭菌后，切成IcmXIcm的小方块。 [0011] 所述的外植体材料选择是生长健壮、无病虫害、无机械损伤、没有木质化的幼嫩枝 条上刚展开的新叶。
[0012] 外植体处理：将取回的幼嫩叶片用少量的洗衣粉冲洗干净放置瓶内，瓶口用单层 医用纱布封好，放在自来水中冲洗60min，然后倒出瓶内的水，将材料放置超净工作台中，先 用75 %酒精处理30s，进行表面消毒，再用无菌水冲洗5?6次，然后用0. 1 %HgCl处理 5min，再用无菌水冲洗5?6次，再将叶片四周切除，然后切成IcmXIcm的小方块。
[0013] (2)初代愈伤组织培养：将灭好菌切好块的叶片接种到装有初代培养基的培养瓶 中进行初代培养，接种时叶背面向下，紧贴于培养基上。材料培养均放在温度为25°C±2°C 的光照培养室内，光照时间为14h，光照强度为1500?2000Lx，培养25?35d将培育出的 愈伤组织转入增殖分化培养基中。
[0014]所述的初代培养基的配方为：MS+6-BA0? 5mg/L+NAAI. 5mg/L+IAA0.lmg/L+琼脂 8g/L+ 鹿糖 30g/L，pH值为 5. 5 ?6. 0。
[0015] (3)分化培养：将初代培养的愈伤组织切成0. 5cmX0. 5cm的小块接种到装有分化 培养基的培养瓶中进行分化培养，pH值、培养温度、光照时间、光照强度、培养时间均与（2) 初代愈伤组织培养相同。愈伤组织分化成芽丛的分化率为60%?70%。
[0016] 所述的分化培养基的配方为：MS+6-BA3.Omg/L+NAA0? 5mg/L+琼脂8g/L+鹿糖 30g/L。
[0017] (4)增殖培养：将获得的芽丛切成单芽（芽长0? 5?I. 0cm)接种到增殖培养基的 培养瓶中进行增殖培养，pH值、培养温度、光照时间、光照强度、培养时间均与⑵初代愈伤 组织培养相同，形成丛生芽。待芽高〇. 5?I.Ocm可再切下，置于增殖培养基，相同培养条 件下继续进行增殖培养，扩繁植株。
[0018] 所述的增殖培养基的配方为：MS+6-BA2.Omg/L+NAA0.5mg/L+琼脂8g/L+蔗糖 30g/L。
[0019] (5)生根培养：将芽丛上的不定苗长至3?5cm，具有2?4片完整的叶片时，切割 成单株不定苗接种到进行生根培养。培养温度、光照时间、培养时间均与（2)初代愈伤组织 培养相同，光照强度为800?lOOOLux，生根率可达90%以上，待不定苗在生根培养基中根 有2?3条、根长为2?5cm时准备出瓶。
[0020] 所述的生根培养基的配方为：MS+IBA3. 0mg/L+NAA0. 5mg/L+琼脂8g/L+蔗糖30g/ L，pH值为 5. 5 ?6. 0。
[0021] 出瓶后的操作按照常规方案进行，可参考硕士论文（黄艳宁.香花崖豆藤的繁殖 技术及园林应用研究）
[0022] 与现有技术相比，本发明的优点在于：
[0023] 首次公开了一种香花崖豆藤组培快繁方法，该方法通过叶片进行初代愈伤组织培 养、分化培养、增殖培养、生根培养来获得繁殖系数高、繁殖速度快、生根效果好、保持母株 优良遗传性状等特点的香花崖豆藤优质苗木，实现工厂化快速育苗，与以种子为材料萌发 获得的无菌苗进行组培快繁相比较，其增殖系数高，可达15.O?18. 0,繁殖速度快，减少了 种子在培养基内萌芽生长成无菌苗的阶段，从而缩短了培养周期，以一个IcmXlcm的叶片 小方块外植体在初代培养30d，分化、增殖培养各30d，每次繁殖倍数为16倍计算，一年根据 实际生产情况可以出苗约为42. 95亿株，为一种药用、观赏两用的良好园林绿化材料提供 了快速繁殖生产技术。
【主权项】
1. 一种香花崖豆藤组培快繁方法，其步骤如下： (1) 外植体选取及处理： 外植体选取：选择生长健壮、无病虫害的香花崖豆藤植株为繁殖材料，3月中下旬采其 一、二年生枝条当年抽发的新梢幼嫩叶片为外植体，灭菌后，切成IcmX Icm的小方块； (2) 初代愈伤组织培养：将灭好菌切好块的叶片接种到装有初代培养基的培养瓶中进 行初代培养，接种时叶背面向下，紧贴于培养基上；材料培养均放在温度为25°C ±2°C的光 照培养室内，光照时间为14h，光照强度为1500?2000Lx，培养25?35d将培育出的愈伤 组织转入增殖分化培养基中； 所述的初代培养基的配方为：MS+6-BA 0. 5 mg/L+NAA I. 5 mg/L+IAAO. I mg/L +琼脂 8g/L + 鹿糖 30g/L，pH 值为 5· 5 ?6· 0 ; (3) 分化培养：将初代培养的愈伤组织切成0. 5cmX0. 5cm的小块接种到装有分化培养 基的培养瓶中进行分化培养，pH值、培养温度、光照时间、光照强度、培养时间均与（2)初代 愈伤组织培养相同； 所述的分化培养基的配方为：MS+6-BA 3.0 mg/L+ NAA 0. 5mg/ L +琼脂8g/L +蔗糖 30g/L ； (4) 增殖培养：将获得的芽丛切成单芽，芽长0. 5?I. 0cm，接种到增殖培养基的培养瓶 中进行增殖培养，pH值、培养温度、光照时间、光照强度、培养时间均与（2)初代愈伤组织培 养相同，形成丛生芽；待芽高〇. 5?I. Ocm可再切下，置于增殖培养基，相同培养条件下继续 进行增殖培养，扩繁植株； 所述的增殖培养基的配方为：MS+6-BA 2.0 mg/L+ NAA 0. 5mg/ L +琼脂8g/L +蔗糖 30g/L ； (5) 生根培养：将芽丛上的不定苗长至3?5cm，具有2?4片完整的叶片时，切割成 单株不定苗接种到进行生根培养；培养温度、光照时间、培养时间均与（2)初代愈伤组织培 养相同，光照强度为800?1000 Lux，生根率可达90%以上，待不定苗在生根培养基中根有 2?3条、根长为2?5cm时准备出瓶； 所述的生根培养基的配方为：MS+IBA3. Omg/L +ΝΑΑ0. 5 mg/L+琼脂8g/L +蔗糖30g/ L，pH 值为 5· 5 ?6· 0。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于： 所述的外植体材料选择是生长健壮、无病虫害、无机械损伤、没有木质化的幼嫩枝条上 刚展开的新叶； 外植体处理：将取回的幼嫩叶片用少量的洗衣粉冲洗干净放置瓶内，瓶口用单层医用 纱布封好，放在自来水中冲洗60min，然后倒出瓶内的水，将材料放置超净工作台中，先用 75%酒精处理30 s，进行表面消毒，再用无菌水冲洗5?6次，然后用0. l%HgCl处理5 min， 再用无菌水冲洗5?6次，再将叶片四周切除，然后切成IcmX Icm的小方块。
【专利摘要】本发明公开了一种香花崖豆藤组培快繁方法，该方法通过外植体选取及处理、初代培养、分化培养、增殖培养、生根培养形成了一套完整的香花崖豆藤组培快繁技术。本发明具有培养周期短，繁殖系数高、繁殖速度快、生根效果好、保持母株优良遗传性状等特点，使香花崖豆藤能实行工厂化快速育苗，其增殖系数可达15.0～18.0，与以种子萌发、单芽和带芽茎段为材料获得的无菌苗进行组培快繁相比较，其增殖效果好、增殖效率高，减少了种子在培养基内萌芽生长成无菌苗的阶段，从而缩短了培养周期，为一种药用、观赏两用的良好材料提供了快速繁殖生产技术。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104604691
【申请号】CN201510071050
【发明人】黄艳宁, 彭福元, 朱校奇, 谢进, 范海珊, 彭斯文, 徐瑞
【申请人】湖南省农业生物资源利用研究所
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年2月11日