快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种菊苣外植体的培养方法。
【背景技术】
[0002]由于菊苣外植体比较细嫩，在超净工作台上暴露时间稍长就容易脱水萎蔫，加上传统方法使用镊子和手术刀切割后再用镊子夹取外植体进行接种，对其伤害程度较重，降低了外植体的成活率和出愈率。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种对外植体的伤害程度小，同时大大增加外植体的存活率，提高外植体出愈率的快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法。
[0004]本发明的技术解决方案是:
一种快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法，其特征是:依次包括下列步骤:
⑴种子的消毒灭菌
取菊苣籽粒饱满的种子，用清水中浸泡24h，冲洗干净后，在超净工作台上用75%的酒精消毒30秒，再用10%的NaClO灭菌lOmin，然后用无菌水冲洗3?4次，用无菌滤纸吸干水分后接种在MS培养基中；
(2)无菌苗的获得
在25°C暗箱中培养2天，菊苣种子露白后将其转移至光下继续培养，培养室每天光照12h，光照强度为20001uX，培养温度为26±1°C，培养获得7d_10d苗龄的无菌苗；
(3)子叶、胚轴外植体的获得
在超净工作台上用镊子将无菌苗从培养基上连根拔起，然后用剪刀分别剪取0.5cm长度的子叶和下胚轴，任其自然下落到培养基上后，剪取结束后，用镊子将外植体均匀摆放在培养基上培养；
(4)愈伤组织和芽的诱导
将子叶和下胚轴外植体接种在MS+NAA0.5mg/L+6-BA 2mg/L的培养基上，蔗糖和琼脂浓度分别为30g/L、8g/L ;外植体培养10天左右，在切口边缘处形成大量的淡黄色或淡绿色愈伤组织，在绿色愈伤组织上形成绿色的小突起，即为潜在的芽点；随着培养时间的推移，分化出的芽点逐渐分化成肉眼可见的芽；
5)生根培养
待幼芽长到2~3cm大小时时，在超净工作台上切下幼芽，将愈伤组织去除干净，将切取的幼芽转入三角瓶中的生根培养基培养；生根培养基为1/2MS+NAA0.lmg/L ;生根培养基培养时，对三角瓶用封口膜封口 ；
(6)移栽
当菊苣再生植株在生根培养基上根系发达后，将三角瓶去掉封口膜，在组织培养室练苗2~3d，然后取出再生植株，用流水洗净根部的培养基，移栽到盛有已灭菌蛭石的营养钵中，浇灌营养液，营养液为MS液体培养基；一周以后移栽到盛有田间土的营养钵，然后进行正常的田间粗放管理。
[0005]菊苣品种为从意大利引进的Rossa di Treviso。
[0006]本发明方法简便、易操作；与传统接种和培养方法比较，单位时间内菊苣外植体的获得量比普通接种方法提高50%以上，外植体的出愈率可以提高到100%。
[0007]下面结合实施例对本发明作进一步说明。
【具体实施方式】
[0008]一种快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法，依次包括下列步骤:
⑴种子的消毒灭菌
取菊苣籽粒饱满的种子，用清水中浸泡24h，冲洗干净后，在超净工作台上用75%的酒精消毒30秒，再用10% (质量百分比)的NaClO灭菌lOmin，然后用无菌水冲洗3?4次，用无菌滤纸吸干水分后接种在MS培养基中；
(2)无菌苗的获得
在25°C暗箱中培养2天，菊苣种子露白后将其转移至光下继续培养，培养室每天光照12h，光照强度为20001uX，培养温度为26±1°C，培养获得7d_10d苗龄的无菌苗；
(3)子叶、胚轴外植体的获得
在超净工作台上用镊子将无菌苗从培养基上连根拔起，然后用剪刀分别剪取0.5cm长度的子叶和下胚轴，任其自然下落到培养基上后，剪取结束后，用镊子将外植体均匀摆放在培养基上培养；
(4)愈伤组织和芽的诱导
将子叶和下胚轴外植体接种在MS+NAA0.5mg/L+6-BA 2mg/L的培养基上，蔗糖和琼脂浓度分别为30g/L、8g/L ;外植体培养10天左右，在切口边缘处形成大量的淡黄色或淡绿色愈伤组织，在绿色愈伤组织上形成绿色的小突起，即为潜在的芽点；随着培养时间的推移，分化出的芽点逐渐分化成肉眼可见的芽；
5)生根培养
待幼芽长到2~3cm大小时时，在超净工作台上切下幼芽，将愈伤组织去除干净，将切取的幼芽转入三角瓶中的生根培养基培养；生根培养基为1/2MS+NAA0.lmg/L ;生根培养基培养时，对三角瓶用封口膜封口 ；
(6)移栽
当菊苣再生植株在生根培养基上根系发达后，将三角瓶去掉封口膜，在组织培养室练苗2~3d，然后取出再生植株，用流水洗净根部的培养基，移栽到盛有已灭菌蛭石的营养钵中，浇灌营养液，营养液为MS液体培养基；一周以后移栽到盛有田间土的营养钵，然后进行正常的田间粗放管理。
[0009]菊苣品种为从意大利引进的Rossa di Treviso。
【主权项】
1.一种快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法，其特征是:依次包括下列步骤: ⑴种子的消毒灭菌 取菊苣籽粒饱满的种子，用清水中浸泡24h，冲洗干净后，在超净工作台上用75%的酒精消毒30秒，再用10%的NaClO灭菌lOmin，然后用无菌水冲洗3?4次，用无菌滤纸吸干水分后接种在MS培养基中； (2)无菌苗的获得 在25°C暗箱中培养2天，菊苣种子露白后将其转移至光下继续培养，培养室每天光照12h，光照强度为20001uX，培养温度为26±1°C，培养获得7d_10d苗龄的无菌苗； (3)子叶、胚轴外植体的获得 在超净工作台上用镊子将无菌苗从培养基上连根拔起，然后用剪刀分别剪取0.5cm长度的子叶和下胚轴，任其自然下落到培养基上后，剪取结束后，用镊子将外植体均匀摆放在培养基上培养； (4)愈伤组织和芽的诱导 将子叶和下胚轴外植体接种在MS+NAA0.5mg/L+6-BA 2mg/L的培养基上，蔗糖和琼脂浓度分别为30g/L、8g/L ;外植体培养10天左右，在切口边缘处形成大量的淡黄色或淡绿色愈伤组织，在绿色愈伤组织上形成绿色的小突起，即为潜在的芽点；随着培养时间的推移，分化出的芽点逐渐分化成肉眼可见的芽； (5)生根培养 待幼芽长到2~3cm大小时时，在超净工作台上切下幼芽，将愈伤组织去除干净，将切取的幼芽转入三角瓶中的生根培养基培养；生根培养基为1/2MS+NAA0.lmg/L ;生根培养基培养时，对三角瓶用封口膜封口 ； (6)移栽 当菊苣再生植株在生根培养基上根系发达后，将三角瓶去掉封口膜，在组织培养室练苗2~3d，然后取出再生植株，用流水洗净根部的培养基，移栽到盛有已灭菌蛭石的营养钵中，浇灌营养液，营养液为MS液体培养基；一周以后移栽到盛有田间土的营养钵，然后进行正常的田间粗放管理。
2.根据权利要求1所述的快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法，其特征是:菊苣品种为从意大利引进的Rossa di Treviso。
【专利摘要】本发明公开了一种快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法，依次包括种子的消毒灭菌、无菌苗的获得、子叶、胚轴外植体的获得、愈伤组织和芽的诱导、生根培养、移栽等步骤。本发明方法简便、易操作；与传统接种和培养方法比较，单位时间内菊苣外植体的获得量比普通接种方法提高50%以上，外植体的出愈率可以提高到100%。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104604689
【申请号】CN201510063985
【发明人】梁美霞, 周美红
【申请人】鲁东大学
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年2月9日