一种头花蓼离体快繁体系的建立方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种头花寥离体快繁体系的建立方法。
【背景技术】
[0002]头液M (PoIygonum應)又名太阳草、四季红、石莽草等,为寥科寥属植物，主要分布在贵州、重庆、四川、湖北、湖南、以及广西等省份。为贵州苗族用药，其应用历史悠久，地上部分或全草入药，具有味辛、微涩、性凉的特征；民间常用于治疗泌尿系统感染、血尿、膀胱炎、风湿痛、腹泻、痢疾等疾病。目前，头花寥的开发利用主要集中在我国贵州省，是中药现代化重点发展六大苗药品种之一。另外，头花寥依靠种子繁殖，发芽率较高，根系发达，吸附能力很强，且每个茎节都能长出不定根，对土壤有很好的固定作用，是理想的野生覆盖植物。头花寥植株的茎、叶、花等具有较高的观赏价值，是一种野生的地被植物，结合乔灌木植株形成高低层次的园林景观，可用在垂直绿化、边坡护理和地被绿化等绿化处理方面。
[0003]目前，头花寥多采用种子育种、扦插、分株和组织培养等技术进行繁殖。因为种子收获量大、发芽率高、储存方便等特点,采用均勻撒播能够有效形成地被覆盖,使得种子育苗成为主繁殖的主要方法；扦插采用基插技术，配合激素使用能更好达到快速繁殖的目的；分株繁殖方面，由于头花寥的匍匐茎产生气生根容易形成小植株，繁殖方法简单，容易较快成苗。但是，头花寥野生资源分布稀散、工业过度消耗以及生态环境的日益恶化导致头花寥资源严重匮乏，严重阻碍了其大规模化生产的需要。因此，通过植物组织培养技术获得无菌植株并建立一套完整的优质种苗繁育体系已经成为当务之急。本发明以头花寥叶片为外植体，通过愈伤组织诱导培养、增殖培养、分化、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了头花寥离体再植株，建立头花寥组织培养快速繁殖技术体系，以推动其规模化发展。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供出一种头花寥离体快繁体系的建立方法，本发明以头花寥叶片为外植体，通过愈伤组织诱导培养、增殖培养、分化、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了头花寥离体再植株，建立头花寥组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。
[0005]本发明的一种头花寥离体快繁体系的建立方法，包括以下的步骤:
(I)外植体消毒:摘取头花寥刚展开叶片，在自来水中以滴水的形式冲洗60?90min。在无菌条件下，以70%?80%乙醇溶液浸泡20s?60s，无菌水冲洗4?6次，再用0.1%?0.2%升萊溶液消毒5?15min,然后用无菌水冲洗外植体至无泡沫为止。用无菌滤纸吸干表面的水分后备用。
[0006](2)愈伤组织诱导:将步骤(I)消毒好的叶片切0.5cm2的小块，主脉上轻微切割2刀，叶片背面朝下接种到诱导培养基进行愈伤组织诱导培养。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为1000?20001X，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%?80%的条件下培养30天后统计诱导情况。
[0007](3)增殖培养:选取步骤(2)诱导培养得到的生长旺盛的胚性愈伤组织，切取直径大小约为0.3cm的块接种至增殖培养基进行继代培养。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为1000?20001x，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%?80%的条件下培养45天后统计增殖情况。
[0008](4)分化培养:将步骤(3)增殖的愈伤组织取出切成直径大小约0.5cm的块接种至分化培养基进行分化培养。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%?80%的条件下培养45天后统计分化情况。
[0009](5)生根培养:从基部切取步骤(4)分化培养中获的健壮试管苗接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为2000?30001χ，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%?80%的条件下培养30天后统计生根情况。
[0010](6)炼苗移栽:将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下4?5天后，打开瓶盖2?3天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至盛有由泥炭土:蛭石=1:1组成的移栽培养基质的容器袋中进行培养，移栽前5天用0.3%高猛酸钾溶液对基质喷淋消毒并加盖薄膜，3天后打开薄膜，翻动基质，移栽前I天将基质淋透水。移栽时需将基质压实，并进行单株套袋，早晚喷雾，保证生长环境潮湿。移栽7天后剪去塑料袋两角，14天后完全脱袋，移栽30天后统计成活率。
[0011]上述步骤(2)所述的诱导培养基为:MS+0.1?1.0mg/L NAA+1.0?2.0mg/L6-BA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0012]上述步骤(3 )所述的增殖培养基为:MS+2.0?5.0mg/L 6-BA+0.1?0.5mg/LIBA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0013]上述步骤(4)所述的分化培养基为:MS+4.0?8.0mg/L 6-BA+0.1?0.5mg/LIBA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0014]上述步骤(5)所述的生根培养基为:1/2MS+1.0?2.0mg/L ΑΒΤ5+0.1?0.5mg/LNAA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0015]本发明的优点是:头液Polygvnum capiiaiw?)为寥科寥属植物,是贵州苗族用药，全草可入药，常用于治疗泌尿系统感染、风湿痛等病症。头花寥野生资源分布稀散、工业过度消耗以及生态环境的日益恶化导致头花寥资源严重匮乏，严重阻碍了其大规模化生产的需要。因此，通过植物组织培养技术获得无菌植株并建立一套完整的优质种苗繁育体系已经成为当务之急。本发明以头花寥叶片为外植体，通过愈伤组织诱导培养、增殖培养、分化、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了头花寥离体再植株，建立头花寥组织培养快速繁殖技术体系，以推动其规模化发展。
【具体实施方式】
[0016]以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
[0017]实施例1
(I)外植体消毒:摘取头花寥刚展开叶片，在自来水中以滴水的形式冲洗60min。在无菌条件下，以70%乙醇溶液浸泡60s，无菌水冲洗4次，再用0.1%升汞溶液消毒lOmin，然后用无菌水冲洗外植体至无泡沫为止。用无菌滤纸吸干表面的水分后备用。
[0018](2)愈伤组织诱导:将步骤(I)消毒好的叶片切0.5cm2的小块，主脉上轻微切割2刀，叶片背面朝下接种到诱导培养基进行愈伤组织诱导培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为ΙΟΟΟΙχ，置于培养温度为25°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后诱导率为78.9%。所述的诱导培养基为:MS+0.5mg/L NAA+1.5mg/L 6_BA+25g/L蔗糖+3.8g/L琼脂，pH为5.5。
[0019](3)增殖培养:选取步骤(2)诱导培养得到的生长旺盛的胚性愈伤组织，切取直径大小约为0.3cm的块接种至增殖培养基进行继代培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为ΙΟΟΟΙχ，置于培养温度为25°C，空气相对湿度为75%的条件下培养45天后愈伤组织增加量为86.9%。所述的增殖培养基为:MS+3.0mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA+25g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.5。
[0020](4)分化培养:将步骤(3)增殖的愈伤组织取出切成直径大小约0.5cm的块接种至分化培养基进行分化培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为20001χ，置于培养温度为25 V，空气相对湿度为75%的条件下培养45天后分化率为93.3%，不定芽平均数为5.3 个。所述的分化培养基为:MS+5.0mg/L 6-BA+0.3mg/L IBA+18g/L 蔗糖+5.5g/L 琼脂，pH 为 5.5。
[0021](5)生根培养:从基部