专利名称：多花筋骨草再生体系建立及快速繁殖方法
技术领域：
本发明属于植物离体繁殖成苗技术领域，特别涉及一种组培成苗快繁方法。
背景技术：
多花筋骨草(Ajugamultiflora Bunge)为唇形科(Lamiaceae)筋骨草属(Ajuga) 常绿多年生草本。茎四棱，具匍匐茎和直立茎。茎节有气生根，叶对生，边缘具粗锯齿，先端 钝圆，基部楔形，叶片纸质，长椭圆形，叶片有皱折，生长季节绿中带紫，入秋后叶片紫红色， 花蓝紫色，轮伞花序，长年零星开放，比较集中开放时间为4-5月和10-12月，株高25-30cm。 其花期长，株型美观，生长快，易栽培，极具观赏价值，可成片栽于林下、湿地，达到黄土不见 天的效果，已成为绿化的主要地被植物品种。该植物具有清热解毒、止咳化痰、凉血消肿、解毒的功效，可用于治疗腹泻、肝炎、 外伤出血等，对多种细菌具有抑制功能。研究发现服用筋骨草后，临床检测到的白细胞增 力口，血清谷丙转氨酶活力显著下降，表明其对肿瘤及病毒性疾病确有疗效。多花筋骨草成分 复杂，全草含有黄酮类、生物碱、有机酸、酚性物质等。其中蜕皮留酮具有促进核酸和蛋白质 合成、影响糖类和脂类代谢、改善肝功和促进创伤愈合等作用。而目前国内外对筋骨草成 分的提取和分离主要以天然资源为主，由于资源有限，不少植物处于濒危状态，数量急剧减 少，无法满足实际生产需要和大规模生产要求。因此，如何不受地理气候条件限制，节省土 地、降低成本、缩短生长周期，以保证和提高蜕皮激素类似物的含量已经成为迫在眉睫。本 发明以多花筋骨草叶片为外植体诱导获得大量多花筋骨草离体再生苗，建立了多花筋骨草 离体快速繁体系，在解决以上问题的基础上，为多花筋骨草的大规模生产奠定了基础。
发明内容
本发明的目的是提供一种多花筋骨草再生体系及快速繁殖方法的组织培养发法； 为以植物蜕皮激素类似物为目标产物的细胞或组织培养技术奠定良好的基础。该方法培养 的芽健康，茁壮，增殖时间短，成苗移植后成活率高。技术方案(1)取材方法选取多花筋骨草的叶片作为外植体进行接种。(2)培养基的配制在基本培养基MS中分别添加激素BA，2，4_D，NAA或IBA中的 几种，分别配制成芽诱导培养基，丛生芽诱导培养基，愈伤诱导培养基和生根培养基，所述 这些培养基PH值为5. 8，培养基厚度为1. 1 1. 5cm。(3)芽诱导培养选择叶片，将叶片切成IcmX Icm大小，接种在所述的芽诱导培养 基上。培养条件为培养温度25士2°C，光照时间为16h/d，光照强度为1500 2000Lx，诱 导培养的时间为30 35d。(4)愈伤诱导培养选择叶片，将叶片切成IcmX Icm大小，接种在所述的愈伤培养 基上。培养条件为培养温度25士2°C，光照时间为16h/d，光照强度为1500 2000Lx，诱 导培养的时间为30 35d。
(5)增殖培养将经过步骤(3)和(4)诱导培养的诱导芽和愈伤组织切成0. 5cm 长的小块，接种在所述的增殖培养基上培养，培养条件为培养温度25士2°C，光照时间为 16h/d，光照强度为1500 2000Lx，丛生芽诱导培养的时间为25 30d。(6)诱导生根培养将经过步骤(5)诱导长大的丛生芽分成单株，转移到所述的生根培养基中培养。培养条件为培养温度25士2°C，光照时间为16h/d，光 照强度为1500 2000Lx，生根培养的时间为25 30d。(7)小苗移栽当试管苗长至有4 6条根，7 9片叶子，叶长1. 5 2cm时，完 成多花筋骨草再生体系的建立及快速繁殖方法。本发明的显著优点是叶片经过诱导培养，30 35d即可萌发生长出健壮的新芽； 再经过25 30d的增殖培养，25 30d的生根培养后即可成苗，移栽，成活率达95%以上； 苗生长健壮，长势良好。
图1愈伤诱导出芽图2增值培养出的丛生芽图3生根培养诱导的苗和根图4移栽后的苗
具体实施例方式为了更好的理解本发明，下面结合本发明的实施例进一步说明本发明的实质性内 容实例1 选取多花筋骨草的叶片作为外植体进行接种。培养基的配制在基本培养基MS中分别添加激素BA、2，4_D、NAA或IBA中的几种，分别配制成芽 诱导培养基，丛生芽诱导培养基，愈伤诱导培养基和生根培养基，所述这些培养基PH值为 5. 8，培养基厚度为1. 1 1. 5cm。芽诱导培养基:MS+6-BAlmg/L+NAA 0. 2mg/L愈伤培养基:MS+6-BAlmg/L+2，4_D 0 lmg/L ；±曾殖培养基:MS+6-BA 0 2mg/L生根培养基:MS+IBA(NAA) 0 lmg/L芽诱导培养选择叶片，将叶片切成IcmX Icm大小，接种在所述的芽诱导培养基上。培养条件 为培养温度25士2°C，光照时间为16h/d，光照强度为1500 2000Lx，诱导培养的时间为 30 35d。愈伤培养选择叶片，将叶片切成IcmX Icm大小，接种在所述的愈伤培养基上。培养条件 为培养温度25士2°C，光照时间为16h/d，光照强度为1500 2000Lx，诱导培养的时间为 30 35d。增殖培养
将经过步骤(3)诱导培养的生长健壮的诱导芽和(4)诱导出的愈伤组织切成 0. 5cm长的小块，接种在所述的增殖培养基上培养，培养条件为培养温度25士2°C，光照 时间为16h/d，光照强度为1500 2000Lx，丛生芽诱导培养的时间为25 30d。诱导生根培养将经过步骤(4)诱导长大的丛生芽分成单株，转移到所述的生根培养基中培养。 培养条件为培养温度25士2°C，光照时间为16h/d，光照强度为1500 2000Lx，丛生芽诱 导培养的时间为25 30d。小苗移栽当试管苗长至有4 6条根，7 9片叶子，叶长1. 5 2cm时，完成多花筋骨草再 生体系的建立及快速繁殖方法。完成试管苗的多花筋骨草的进行移栽，将试管苗放在自然光下炼苗3 5d后在打 开瓶盖进行炼苗2 4d，以增强试管苗对室外环境的适应能力，然后从瓶中取出，洗去根部 培养基，移至蛭石和土的质量比=1 1的混合基质中，保湿遮阴培养，所述多花筋骨草试 管苗的成活率达95%以上。按照上述方法进行，叶片经过诱导培养，30 35d即可萌发生长出健壮的新芽；再 经过25 30d的增殖培养，25 30d的生根培养后即可成苗，移栽，成活率达95%以上；苗 生长健壮，长势良好。
权利要求
一种多花筋骨草再生体系的建立及快速繁殖方法，其特征在于所述方法的具体步骤包括(1)取材方法选取多花筋骨草的叶片作为外植体进行接种。(2)培养基的配制在基本培养基MS中分别添加激素BA，2，4-D，NAA或IBA中的几种，分别配制成芽诱导培养基，丛生芽诱导培养基，愈伤诱导培养基和生根培养基，所述这些培养基PH值为5.8，培养基厚度为1.1～1.5cm。(3)芽诱导培养选择叶片，将叶片切成1cm×1cm大小，接种在所述的芽诱导培养基上。培养条件为培养温度25±2℃，光照时间为16h/d，光照强度为1500～2000Lx，诱导培养的时间为30～35d。(4)愈伤诱导培养选择叶片，将叶片切成1em×1cm大小，接种在所述的愈伤培养基上。培养条件为培养温度25±2℃，光照时间为16h/d，光照强度为1500～2000Lx，诱导培养的时间为30～35d。(5)增殖培养将经过步骤3)和4)诱导培养的诱导芽和愈伤组织切成0.5cm长的小块，接种在所述的增殖培养基上培养，培养条件为培养温度25±2℃，光照时间为16h/d，光照强度为1500～2000Lx，丛生芽诱导培养的时间为25～30d。(6)诱导生根培养将经过步骤5)诱导长大的丛生芽分成单株，转移到所述的生根培养基中培养。培养条件为培养温度25±2℃，光照时间为16h/d，光照强度为1500～2000Lx，生根培养的时间为25～30d。(7)小苗移栽当试管苗长至有4～6条根，7～9片叶子，叶长1.5～2cm时，完成多花筋骨草再生体系的建立及快速繁殖方法。
2.根据权利要求1所述的多花筋骨草再生体系的建立及快速繁殖方法，其特征在于 所述步骤7)中的完成试管苗的多花筋骨草的进行移栽，将试管苗放在自然光下炼苗3 5d 后在打开瓶盖进行炼苗2 4d，以增强试管苗对室外环境的适应能力，然后从瓶中取出，洗 去根部培养基，移至蛭石和土的质量比=1 1的混合基质中，保湿遮阴培养，所述多花筋 骨草试管苗的成活率达95%以上。
3.根据权利要求1所述的多花筋骨草再生体系的建立及快速繁殖方法，其特征在于 所述步骤2)培养基的配制中所述芽诱导培养基为基本培养基MS中再加入6-BAlmg/l，NAAO. 2mg/l ；所述愈伤培养基MS+6-BA lmg/L+2，4-D 0 lmg/L ；所述增殖培养基为基本培养基MS中再加入6-BA0 2mg/ ；所述生根培养基为基本培养基MS中再加入IBA(NAA)O lmg/1。
全文摘要
本发明提供一种多花筋骨草再生体系及快速繁殖方法的组织培养方法，属于植物离体繁殖成苗技术领域，为以植物蜕皮激素类似物为目标产物的细胞或组织培养技术奠定良好的基础。所述培养基为MS培养基，pH值为5.8～6.5。分别以该培养基为原料掺入6-BA 1mg，NAA 0.2mg配成芽诱导培养基。掺入6-BA1mg，2，4-D 0～1mg配成诱导愈伤培养基。掺入6-BA 0～2mg配成腋芽增值培养基。掺入IBA(NAA)0～1mg配成生根培养基。选取叶片经过无菌处理诱导培养，30～35d即可萌发生长出健壮的新芽，再经过25～30d的增殖培养，25～30d的生根培养后即可成苗，移栽，成活率达95％以上。本发明提供的多花筋骨草组培快繁方法，针对多花筋骨草的特点，简便易行，组培苗无畸形，繁殖系数提高，繁殖周期短，培养效果好，成活率高。
文档编号A01H4/00GK101803573SQ201010142409
公开日2010年8月18日 申请日期2010年4月8日 优先权日2010年4月8日
发明者宇佳, 李晓灿, 赵晓杰, 迟德富, 钱晶晶 申请人:东北林业大学;迟德富;赵晓杰;李晓灿